Способ получения 6-(2-амино-2-фенилацетамидо)пеницилланоилоксиметил-1,1-диоксопеницилланоилметилкарбоната или его кислотно-аддитивной соли Советский патент 1986 года по МПК C07D499/08 A61K31/431 A61P31/04 C07D499/68 C07D499/86 

- 121

Изобретение относится к способу получения новых сложных бис-эфиров пенициллановой кислоты общей формулы

н

S СНз

о

0 о (I)

V СНз Ь«0

у

о соосн о

где R - водород или гидроксил, или их кислотно-аддитивных солей, обладающих антибактериальными свой-| ствами.

Цель изобретения - создание на основе известных методов способа получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами .

Пример 1. бис-Йодметилкарбонат.

а, Б раствор 10,7 мл (15,9 г, , 0,1 моль) бис(хлорметил)карбоната в 400 МП ацетона вводят 75 г (0,5 моль) йодистого натрия. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч в атмосфере азота, затем ее оставляют на ночь при комнатной температуре. Смесь фильтруют, фильтрат выпариваю в вакууме. К полученному продукту выпаривания добавляют хлористый метилен (500мп) и образующуюся смесь фильтруют. Фильтрат выпаривают до получения объема примерно 200 МП, добавляют 200 мл воды, и величину рН водной фазы доводят до 7,5. Добавляют водный раствор тиосульфата натрия, удаляя йод, органическую фазу отделяют и высушивают над сульфатом натрия. Выс ушен ньй раствор хлористого метилена выпаривают в вакууме до получения масла, которое при выстаивании темнеет. Этот маслянистый продукт подвергают обработке смесью, состоящей из 35 мп гексана и 6 мп диэтилового эфира, при , образую1циеся кристаллы от- фильтровьтают, промывают гексаном и высушивают, в результате получают 10,0 г (29%) желтоватого кристаллического продукта с температурой плавления 49-51°С. Спектр Н-ЯМР (CDClj) ч./мпн, (8): 5,94 синглет; инфракрасный спектр (Nu)OL), 1756, 1775.

12

в, Йодометил-6 в-(2-азидо-2-фенил-. ацетамидо) -пеницилланошюксиметил- карбонат,

В охлажденньш до О С раствор

2,4.3 г (7,1 ммоль) бис-йодометилкар- боната в хлороформе (16 мл) вводят по каплям раствор 2,19 г (3,5 ммоль) тетрабутиламмоний-6- в-(2-азидо-2- -фенилацетамидо) пеницилланата в

10 МП хлороформа. После прекращения этого добавления реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и вьщерживают при ней в течение ночи. Растворитель выпаривают в вакууме, остаточньш продукт вьтарива- ния подвергается хроматографическому разделению на силикаселе, при злюиро- вании смесью хлористого метилена с зтилацетатом в объемном отношении

3:1, в результате чего получается 322 мг (40%) продукта. Спектр Н-ЯМР (CDClj), ч./млн, (О: 1,52 (S, ЗН); 1,65 (S, ЗН); 4,45 (S, Ш); 5,04 (S, 1Н); 5,65 (т, 4Н); 5,92

(S, 2.Н); 7,34 (S, 5Н); инфракрасный спектр (CHClj): 1770 см .

С. (2-Азидо-2-фенилацетамидо)- пеницилланоилоксиметил-1,1-диоксо- пеницилланоилоксиметилкарбонат.

В раствор 622 мг (1,4 ммоль) йод- метил-6- D-(2-азидо-2-феннлацетами- до) пеницилланоилоксиметилкарбоната в 30 МП хлороформа вводят по каплям при комнатной температуре раствор 1,33 г (2,8 ммоль) тетрабутиламмоний-1,1-диоксопеницилланата в 30 мп хлороформа. Реакционную смесь пере- мепивают при комнатной температуре в течение ночи, вьшаривают в вакууме и подвергают хроматографическому раздепению на силикагеле. Элюирова- ние осуществляют смесью хлористого метилена с этилацетатом в объемном отношении 9.: 1, и в результате получается 0,51 г продукта (выход

52,6%). Спектр Н-ЯМР (CDC1.,), ч./млн (Е): 1,4 (S, ЗН); 1,5 (S, ЗН); 1,6 (S, ЗН); 1,64 (S, ЗН); 3,42 (d, J 3 Гц, 2Н); 4,4 (S, Ш); 4,44 (S, 1Н); 4.,6 (t,,J 3 Гц, 1Н); 5,04 (S, Ш);

5,44-6,0 On, бН); 7,35 (S, 5Н); инфракрасный спектр (CHClj): 1775см

d. (2-А 1ино-2-фенилацетами- до)} -пеницилланоилоксиметил-1,1-диаксспеницшшаноилоксиметилкарбонат.

Раствор 1,49 г (2-aзидo-2- -фeнилaцeтaмщ o)j -пеницилланоилокси- метил-1,1-диоксопеницилланоилокси- . метилкарбоната в 40 мп хлористого ме

3,1

тилена и 20 мл изопропанола подвергают гидрированию при давлении 60 psi (4,2 кг/см) в присутствии 1,5 г 10%-ного Pd/C в течение 30 мин. После этого добавляют порцию катализатора 1,5 г и гидрирование продолжают еще в течение 30 мин. Затем катализатор отфильтровывают и фильтрат вьтаривают, получая белый твердый остаточный продукт выпаривания . Этот продукт растворяют в смеси тетрагидрофуран/вода (в соотношении 1:1), полученн.ый раствор охлаждают до Ос, величину рН этого раствора доводят до 2,5 путем добавления 0,1 н-соляной кислоты. Тетрагидрофу- ран вьтаривают в вакууме, образующийся водный раствор высушивают при температуре ниже О С, в результате чего получается 680 мг (45%) продукта в виде белого твердого вещества. Спект Н-ЯМР (CDClj + CDjOD), ч./кши. (S) : 1,42 (S, 6Н); 1,5 (S, ЗН); 1,6 (S, ЗН); 3,46 (m, 2Н); 4,4 (S, Ш); 4,43 (S, Ш); 4,72 (m, 1Н); 5,2 (S, Ш); 5,48 (g, J 4 Гц, 2Н); 5,82 (S+g, J 6 Гц, 4Н); 7,44 (S, ЗН); инфракрасный спектр (Nujol): 1775 см

Пример 4. (2-Бензил- оксикарбониламино)-2-(пара-оксифе- нил)-ацетамидоЗ -пеницилланоилокси- метил-1,1-диоксопеницшшаноилокси- метилкарбонат.

а. К 7,40 г (0,010 моль) тетра- бутиламмоний-6- Б-(2-бензилоксикарбониламино) -2-(пара-оксифенил) -ацет- амидо пеницилланата и 3,81 г (0,01и моль) бромметил-1,1-диоксопе- ницилланоилоксиметилкарбоната добавляют 30 мл диметилформамида, смесь перемешивают 4 ч. Добавляют этилаце- тат (500 мл) и смесь промьгоают поочередно солевым растврром, водой, снова солевым раствором и высушивают над безводным сульфатом натрия. После вьшаривания растворителя в вакууме получается сырой.продукт, который может быть очищен Путем хррмато- графического разделения на силика- геле.

б) (2-Амино-2-/пара-оксифе- нш1/-ацетамидо)3 пеницилланоилоксиме- тил-1,1-диоксопеницилланоилоксиме- тилкарбонат.

Смесь 2,0 г (2-(бензилокси- карбониламино/-2-/пара-оксифенил/- ацетамидо) пеницилланоилоксиметил- -1,1-диокс опеницилланоилоксиметил- карбоната, 50 мл дихлорметана, 50 мл

1Л

изопропанола и 2,0 г 10%-ного палладия - на углероде подвергается гидрированию при давлении 3-4 атмосферы (3,5-4,0 кг/см) до тех пор, пока не

прекращается поглощение водорода. Вводится дополнительно 2 г катализатора и грщрование продолжается в течение 30 мин. Катализатор удаляют путем фильтрации, и фильтрат вьтаривают в вакууме, в результат,е получается продукт, который может быть очищен путем хроматографического разделения на Sephadex LH20.

Полученные соединения (I) или их

фармацевтически приемлемые соли проявляют in vivo антибактериальную активность, которая может быть проиллюстрирована известными способами, принятыми для пенициллиновых соединений.

Фармакокинетические исследования. В результате фармакокинетических исследований ценного ингибитора бета- лактамазы, салбактама установлено,

что он слабо абсорбируется у крыс при стоматическом применении. Так стоматические дозы в 10 мг/кг, примененные к крысам, давали максимальное содержание в крови только 0,1 мкг/мл.

Соединение (I) при стоматическом применении к крысам в дозе 20 мг/кг давало максимальное содержание в крови салбактама 2,18±0,49 мкг/мл через 0,25 ч, максимальное содержание в крови ампициллина через 0,5 ч составляло 1,83jtO,13 мкг/мл.

Сравнительные значения для салта- мициллина. также приведены для сравнения. Все результаты представлены в таблице.

Процедура. Фармакокинетические

данные быпи получены с использованием крыс Спрак-Доули весом 80-100г. Испытываемые соединения применялись стоматически (5 крыс на каждое

соединение) в виде водной суспензии (0,5 мл), содержащей 20 мкг/кг препарата.

Пробы крови брались в указанное , время и подвергались дифференциальному биоанализу с целью определения содержания ампициллина и салбактама. При биоанализе на ампициллин используется культура Sarcina lutea (АТСС 9341), которая восриимчива к ампициллину, но не чувствительна к сал- бактаму при концентрации 100 мг/мл, так что он не содержит бета-лакта- мазу. Таким образом, этот организм

не показал синергетического эффекта при использовании комбинаций ампиидллина и салбактама. Стандартную кривую получают в нормальной сыворотке при концентрациях ампициллина 4,2,1; 0,5; 0,25 и 0,125 мг/мл. На диски из стерильной фильтровальной бумаги наносятся 25 ламбда объема. Чашки для вьтолнения анализа получают с использованием зернового агара (Диф- ко). КультураSarcina lutea после инкубирования в течение ночи разбавляется в пропорции 1:100 и 1 мл разбавленной культуры добавляется в 100 мл агара в пластиковых чашках размером (30-,5 см х 30,5см Затем чашки инкубируются при 37 С в течение 8 ч и замеряются размеры зон.

Процедура определения концентрации салбактама основана на нечувствительности Pasteurella histo lytica (59В010) при высоких концентрациях либо только ампициллина либо только салбактама. Однако, так. как их стойкость связана через бета-лактамазу, культуры реагируют синергетически на комбинации ампивниипи

Заказ 1007/62

,Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4,

циллина и салбактама. Стандартную криву получают тем же способом,что используют для ампициллина. Чашки ,., для анализов получают при помощи добавления 1 мл культуры Pasteurella histolytica после инкубирования в течение ночи в 100 мл агара Мюл- лера-Хинтона, к которой были добавлены 50 г/мл ампициллина и 5% &т-ер стерильной бычей крови. Чашки инкубируются при 37°С в течение 18 ч, после чего измеряются размеры зон.

Из приведенньк результатов можно сделать вывод, что соединение (Т) дает очень высокую концентрацию в крови салбактама и ампициллина при стоматическом применении. Таким об- разом оно обладает отличительными свойствами по сравнению с салбакта- мом; соединение (I) дает более высокие и более быстрые максимумы концентрации в крови салбактама по сравнению с салтамициллином.

Фармакокинетические данные после стоматического применения испытываемых соединений А и В в дозе 20 мг/кг к крысам приведены в таблице (концентрация сыворотки дана в мг/мп).

Тираж 379

Подписное

Способ получения 6-(2-амино-2- -фенилацетамидо)пеницилланоилокси- метил-Т,1-диоксопеницилланоилметил- карбоната общей формулы СНг Я-4/-СНСО 1Н-р Y -tiHl 0 СНз о / соосн о С-0 где R - водород или гидроксил, или его кислотно-аддитивной соли, отличающийся тем, что, соединение общей формулы i о S./CH3 , COOZi подвергают взаимодействию с соединением общей формулы О о / S о л СН-г V М рсня .-N-k COOZ где R (} Z, и Z, указанные значения; азидо- или бензилоксикар- бониламиногруппа; каждый в отдельности означает тетрабутиламмоний или группу СН20СОСН2Х О . где X - С1, Вг или О, S среде полярного органического, растворителя, образовавшееся при этом соединение общей формулы с (б (/) CHCOl H S Нз соосн о ххО ггЧ оД-с, СНз СНз / COOCHiO где Q и R имеют указанные значения, .подвергают гидрогенизации на Pd/C с последующим вьщелением целевого продукта в свободном виде или в виде его кислотно-аддитивной соли.