Способ определения активности оксидазы- @ -аминокислот Советский патент 1986 года по МПК C12Q1/02 G01N33/48 

1

Изобретение относится к биохимии, а именно к биохимическим способам определения активности ферментов, в частности оксидазы-Ь-аминокислот.

Цель изобретения .- сокращение времени определения активности.

При м е р. Для определения активности взяли раствор фермента, выделенного из Trichoderma sp., после частичной очистки фракционированным осаждением сульфатом аммония, К разбавили его в 100 раз. Определение ферментативной активности осу- ществляли в кювете спектрофотометра. Реакционная смесь содержала, об.%:

Натрий-фосфатный буфер 0,1 М, рН 7,576

L-лизин 0,1 И4

Пероксидаза 0,04% 1 Ферроцианид калия 0,1 М 4 Раствор оксндазы-Ь-амино- кислот .15

Реакцию иницируют добавлением раствора фермента.

Смесь инкубировали при комнатной температуре 5 мин,после чего добав9

ляли 25%-ную Тр ихлоруксусную кислоту до концентрации 3%. Измеряли оптическую плотность раствора при 420 нм (D(,0,21). В кювету контроля вместо раствора L-лизина внесли буферный раствор. Через 5 мин оптическая плотность в кювете контроля составляла Dej, 0,022. Нашли разность оптических плотностей

D DpaB-D«fP 0,21-0,,l88.

За единицу активности фермента, (Е) принято такое его количество, которое катализирует образование 1 мкМ перекиси водорода в минуту при

25 С. Калибровочную кривую построили, принимая оптическую плотность окрашенного продукта - феррицианида калия, равной 1040 М .

По калибровочной кривой определили, что концентрация фермента в реакционной смеси составляет 0,038 Е/мл. Учитывая степень разбавления, вычислили, что ферментативная активность

раствора после осаждения сульфатом «аммония и диализа составляет 0,038 « «6,,5 Е/мл.