Общество химических заводов Рона-Пуленк (Франция) ДействнтеоТьные изобретатели иностранцы Нинэ м Варье
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПИРАМИЦИНА
Заявлено 20 нюня IS58 г. за jY° 60244С/31 в Комитет по делам нзобротешп и
открытий при Совете Министров СССР Опубликовано в «Бюллетене нзобретений Л 19 за 193 г.
Известно, что антибиотик спирамицин состоит из трех компонентов I, II, П1, имеющих очень близкие свойства, и получается нутем ферментации Streptomyces ambofaciens.
Предлагается способ, позволяющий получать менее токсичные вари анты спирамицина (II и III) путем подавления образования более токсичного варианта (спирамицина I). Это достигается тем, что в среду добавляют ацетилирующие или пропионалирующие радикалыПример.
В эрленмейеровскую двухлитровую колбу вносят 260 .ил следующей среды:
Кукурузный настой (50%-него сухого экстракта) 40 г Глюкоза20
Хлористый натрий5
Сернокислый магний
Водопроводная вода1000 мл
Устанавливают рН 6,8 добавкой едкого натра и затемдобавляют еще:
Углекислый кальций5 г
Соевое масло4 мл
Эту среду стерилизуют 45 мин. при 120 После охлаждения ее засевают культурой штамма Streptomyces ambofaciens (NRRL 2420 в галактике). Затем культуру перемешивают на трясучке в течение 48 час.
Одновременно в эрленмейеровские колбы на 300 мл вводят по 5 мл следующей среды:
Заявитель
Кукурузный настой (50%-ного сухого экстракта) 35 г Глюкоза50
Хлористый натрий20
Первичный фосфорнокислый калий2
Сернокислый магний1
Водопроводная вода1000 мл
рН устанавлниают на 6,8 добавкой едкого натра, после чего добав.чяют:
Углекислый кальций5 г
Затем вводят пропкопамид в количествах, указанных в нижеприведенной таблице, даюи1,ей результаты нроведенных опытов.
Эрленмейеровские колбы стерилизуют 20 мин. при 120, охлаждают и засевают 4 мл культуры из двухлитровых колб, иосле чего встряхивают на трясучке при 25 Анализы проводят на 6-ii, 7-й и 8-й дни с целью определения ма ;:има..тьлой активности и относительных нгыходов трех спирамицинов.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА | 1972 |
|
SU352469A1 |
| СССРЗависимый от патента № — Заявлено 17.IV.1968 (№ 12;ЗЭ3513/3'1-16) Приоритет 18.IV. 1967, № 15056—А/67, Италия Опубликовано 17.IV.1973. Бюллетеиь № 18 Дата опубликования описания 15.VI.1973-и ^'•^«^o^-xJr, ;fW,.,._*•* -!'ЯЛЯ :биолиSlil^biSAМ. Кл. С 12d 9/14А 61k 21/00УДК 615.779.а31(088.8) | 1973 |
|
SU378026A1 |
| Способ получения комплексного антибиотика циклоспорина и/или его компонентов и штамм грибка ТоLYросLаDIUм VаRIUм | 1989 |
|
SU1836425A3 |
| Способ получения антибактериального вещества | 1975 |
|
SU648117A3 |
| Способ получения трихотецина | 1975 |
|
SU528918A1 |
| Способ получения аденозин-5 -трифосфата | 1980 |
|
SU1144619A3 |
| Способ получения фосфолипазы | 1976 |
|
SU644827A1 |
| ШТАММ MICROMONOSPORA PURPUREA VAR.VIOLACEA - ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА ГЕНТАМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНТАМИЦИНА | 1991 |
|
RU2033426C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3-КЕТО-С19-СТЕРОИДОВ | 1973 |
|
SU396873A1 |
| СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО БАКТЕРИОФАГА ГАММА | 1996 |
|
RU2133273C1 |
П р и м е р 2.
В двух.литровую эрленмейеровскую колбу вводят 250 ,ил следующей среды:
Кукурузный настой (50%-ного сухого экстракта) 4-0 з Крахмал20
Хлористый натрий5
Сернокислый магний1
Первичный фосфорнокислый калий2
Водопроводная вода до объема1000 мл
рН устанавливают на 6,8 добавкой едкого натра, после чего вводится: Углекислый натрий5 г
Эту среду стерилизуют в течение 45 мин. нри 120. После охлалсдения засевают ее культурой штамма S. arnboiaciens и встряхивают на трясучке в течение 48 час. при 25°.
Одновременно в эрленме1 1еровские колбы на 300 .чл вводят 40 чл следующей среды:
Кукурузный пастой (50%-ного сухого экстракта) 45 г Глюкоза5
Углекислый кальций25
Водопроводная вода до общего объема1000 .ил
Устанавливают рН 7,0 добавкой едкого натра.
После этого среду стерилизуют в течение 30 мин. при 120 Пос.ю охлаждения каждую эрлеименеровскую колбу засевают 4 мл ранее on:iсанной заправочной культуры. Затем смесь встряхивают на трясучке при 25°. Через 48 час. развитие грибка оказывается весьма удовлетворительным. После этого добавляют в каждую колбу 20 мл стерильного EOIного раствора, содержащего 12 г/л чистого спирамицина I в виде осиг ваиия и 6 с1/л пропионата натрия. Культуру встряхивают в течение 24 час., затем смешивают содержимое всех эрленмейеровских колб.
Хроматографический анализ бульонной культуры показывает, ч го она содержит 2.3 г/л непреврашенного сиирамицина I и 1.4 ;. смеси, состоящей пз 20u спирамицина П и . спирамицина III.
П р и м е р 3.
В эрленмейеро;-5СК1 е колбы на 300 мл вводят ио 40 .,;.; слочуюиюГ; среды:
.Хлористы аммоний6 с
Глюкоза25
Углекислый кальций20
Водопроводная вода до общего объема1000 мл.
Стерилизуют, засевают и вырапдивают культуру грибка в условиях, описанных в примере 5. По истечении 48 час. добавляют по20лг.г водного стерильного раствора с содержанием 9 г/л чистого сппрамиинна 1 в виде основания и 21 г/л пропионамида.
После трехдневной инкубации иутем хроматографического анализа обнаруживают превращение 1,86 г/л спирамицина I в смесь из 55% спирамицина П и 45% спирамицина П1. 1,14 г/л спира.мицина I остается бе.. изменения.
При м ер 4.
Готовят культуру S. ambofaciens в условиях, описаниь х в примере 3. Раствор спирамицина основания I содержит еще 6 г/л пропионата натрия. В этом случае хроматографический анализ обнаруживает превращение 2,04 г/л сиирамицина I в смесь из 11% спирамицииа II и 89% спирамицина П1; 0,96 г/.г исходного спнрамицииа остается без изменения.
Пример 5.
В эрлен.мейеровские колбы на 300 мл вводится ио 50 мл, следуюп ей среды:
Азотнокислый аммоний13 с
Глюкоза50
Углекислый кальций25
Водопроводная вода до общего объема1000 мл.
Колбы стерилизуют 30 .мип. при 120, охлаждают и засевают по 5 M.I культуры, получение KOTopoii описано в примере 2. После тоехдневной инкубации при 25° при встряхивании на трясучке в каждую колб} приливают 5 мл водного раствора с содержанием 100 г/л чистого спирамициаа I в виде основания, 38 г/л пропиоиовой кислоты и 10 г/л щестиводного хлористого кобальта. рН этого раствора предварительно доводят до 6,5
ль 122816
Ло 122846- 4 путем добавки едкой щелочи. После трехдневной инкубации анализируют методом хроматографии на бумаге. Превращено 8,70 г/л спирамицина I; выход 9% спираминина П и 91% епирамицина III.
Примере.
В эрленмейеровскую колбу на 300 мл наливают50 мл следующей среды:
Хлористый аммоний10 г
Глюкоза50
Углекислый кальций25
Водопроводная вода до общего объема1000 лл
Колбу стерилизуют, засевают и инкубируют в описанных выше условиях.
По истечении 72 час. культуру центрифугируют и жидкость декантируют. Осадок взвещивают вновь в 50 мл чистого буферного раствора, находящегося в эрленмейеровской колбе на 300 мл. Буфер содержит 9,85 г/л ледяной уксусной кислоты и 4,9 г/л уксуснокислого натрия и имеет рН 4. Кроме того, в буфере содержится еще 6,45 г/л хлоргидрата епирамицина I и 1 г/л щестиводного хлористого кобальта. Суспензию этого мицелия инкубируют 80 час. при 25° при встряхивании на трясучке и хроматографируют на бумаге. В результате 2,40 г/л епирамицина I превращаются в смесь остальных спирамицинов (II и П1) в относительных размерах 90 : 10.
Предмет изобретения
Способ получения епирамицина, осуществляемый путем ферменгации Streptomyces ambofaciens, отличающийся тем, что, в целях получения менее токсичных вариантов епирамицина (II и III), в среду добавляют ацетилирующие или пропионалирующие радикалы.
