Способ выделения лизоцима Советский патент 1986 года по МПК C12N9/36 

Изобретение относится к способам получения фермента лизоцима, пшроко применяемого в разных областях народного хозяйства, в том числе в медицине, пищевой промьшленности, биоло- гни.

Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса выделения лизоцима.

Лизбцим из яичного белка экстра- гируют подкисленной водой с одновременной денатурацией белков яйца при повышенных температурах.

Лизоцим является сильноосновным белком мол. массы 14-93 тыс. (в зави- симости от сырья) и в воде образует гель.

В яичном белке при наличии среды, близкой к нейтральной, (рН 6-7) лизо цим с альбумином образует комплекс, улучшающий устойчивость фермента, но:препятствующий вьщелению лизоцима. Понижение рН добавлением органических или неорганических кислот разрушает комплекс с образованием соот- ветствующих солей лизоцима с органическими или неорганическими кислотами, которые лучше экстрагирзтотся водой..

Для активации лизоцима, разрушени устойчивых суспензий и улучшения эксракции, к раствору ; добавляется соль щелочного металла (хлориды).

5 Гелевидная масса, очень слабо 18 фильтруется

5 Гелевидная масса с последукидим 28 выпадением хлопьев

5 Осаждение нитевидной массы пос- 43 тороннего белка

Оптимальная температура для выде-- 5 ро, что может вызвать потери фермен- ления лизоцима 80-95 €.та яизоцима.

Ниже денатурация посторонних И р и и е р 2. Процесс проводят, белков происходит недостаточно быст- как в примере 1. Отбирают 10 мл яичОтделение посторонних белков от лизоцима осуществляется повьопением температуры до 80-95°С так«м образом чтобы коагулировалась основная масса посторонних белков.

Пример. 10 л свежего яичного белка без предварительного отделения овомуцина гомогенизируют перемейнвани ем и разделяют на 10 частей.В колбу вметимостью 3 л запивают 1 л воды,добавляют уксусную кислоту до достижения рН 3,5; включают мешалку, обогрев и растворяют 20 г хлористого натрия. Устанавливают температуру, С:

1 и 2 ОПЫТЫ; 60

3 и Д опыты 70

5 и 6 опыты 80

опыты 90 . 9 и 10 опыты около 100

8горячий раствор при перемешива- НИИ добавляют 0,5 л яичного белка в

течение 1-1,5 мин.

Полученную суспензию фильтруют и осадок промьшают 0,5 л подкисленной воды, содержащей соль щелочного металла, фильтраты соединяют и охлаждают. I

Выход лизоцима в температуры кислого ра приведен в табл.

Таблица 1

31239147

ного белка и вливают в 30 мл раство- . ра, содержащего 2% хлористого натрия и уксусную кислоту различной концентрации .

Теьтература в рабочем растворе 5 85 ± .

Ферментная активность фильтратов после вьщеления лизоцима из яичного белка.в зависимости от концентрации уксусной кислоты представлена в 10 табл, 2.

Таблица 2

0,4 я.0,5

0,005

0,075

-0,01

0,15

2

Нет

Нет

Нет

Нет

2

0,15 2,0-2,5 2550

и,з

4 5,0

2300

Продолжение табл. 2

Оптимальная концентрация уксусной кислоты, необходимая для начала обра- зования солей лизоцима, составляет 0,5-5,0%.

Пример 3. Опыт проводят, как в примерах 1 и 2.

Ферментная активность фильтратов в зависимости от концентрации разных кислот дана в табл. 3.

IТ а б л и ц а 3

Не определена

Не определена

Не определена

Не определена

2350

2500

Для определения ЛИЗоцима необходимо определенное количество любой кислоты, достаточное для образования солей лизоцима, независимо от водо- рбдйого показателя отдельной кислоты.

Пример А. Опыт проводят, как в примерах 1 и 2.10

Оптимальнаяконцентрация солей 0,5-4,0%. При 5%-ной концентрации солей наблюдается снижение выхода лизоцима.

П р и м е р 5. Опыт проводят, как в примерах 1 и 2. 10 мл яичного белка добавляют к раствору, содержащему уксусную кислоту, и к чистой воде при 85 ± 10°С.

Активность лизоцима при экстракции водой, ед/мл лизоцима, в среднем составляет 0.

Активность лизоцима при экстракции раствором уксусной кислоты без добавления хлористого натрия при рН 3,9 в среднем составляет 1270 ед/мл лизо- цима.

Предлагаемый способ получения ли- зоциМа дает возможность по сравнению

ВНИИПИ Заказ 3354/21 Тираж 490 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород ул. Проектная, 4

К раствору добавляют различные количества хлористого натрия, калия и лития для установления оптимальной концентрации солей при количестве яичного белка 10 на 25 мл раствора.

Ферментная активность фильтратов после выделения лизоцима из яичного белка в зависимости от концентрации солей указана в табл. А.

Таблица 4

с известным резко увеличить производительность установки и организовать промьшшенное получение фермента для различных отраслей народного хозяйства, в том числе для сельского хозяйства и пищевой промьшшенности, ускорить процесс выделения до 16 ч; использовать отходы, получаемые при осуществлении предлагаемого способа, в пищевой промышленности, например, в сыроделии, так как они представляют собой белок, содержащий около 10-30% остаточного лизоцима; сократить расход рабочего времени, что на полу- промь:1шленных и лабораторных установках составит около 140 человеко-часов на каждый кг лизоцима; сэкономить энергоресурсы, так как процесс не требует громоздких холодильных блоков.