Способ определения концентрации лактата Советский патент 1986 года по МПК G01N27/30 G01N27/46 

Изобретение относится к области исследования материалов с помощью электрических средств путем измерения тока ф(1рментных реакций при элек ролизе и может быть использовано при определении концентрации лактата в крови, микробиологических и биологических растворах.

Цель изобретения - увеличение чувствительности способа определе:ния концентрации латката.

Эти превращения ил.пюстрируются следующей схемой:

цитохром В

Л и- Fe П + НАДН

Fe - е где Л

1+

П + Fe ЛДГ

Л + НАД электрохимически

Fe

лактат; П - пируват; ДДГ - НДЦ зависимая лактатдегидрогеназа.

Для ос5 ществления способа применяют ферментный электрод, анод которого изготовляют из стеклоуглерода с нанесенным на него цитохромом J и лактатдегидрогеназой, покрытый ди.злизной ме мбранойэ а катод - на серебра, покрытого AgCl.

Пример 1. Электролиз исследуемого раствора проводят в присутствии цитохрома В, концентрация которого 60 ед/мл, НДЦ зависимой лактатдегидрог1гназы, концентрация которой 60 ед/мЛ; 5 М1%М лактата в (); М фосфатном буфере. Определение йави- симости вел| Мины тока от концентрации НАДН ведут при рН 7,5, OB относительно Ag/AgCl.

Зависимость величины тока от концентрации НАДН приведена в таблице.

Составитель И, Рогаль 1 едактор А. Шишкина Техред Н.Бонкало Корректор . Шароши

Заказ 3695/40 Тираж 778Г одписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий П30355 Москва, Ж-35, Раушская наб,, д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, З жгород, ул. Проектная, 4

Из таблицы видно, что наибольшая величина тока (предельный), т.е. 18 нА, наблюдается при концентрации 1 мМ, а при дальнейшем увел1-гчении концент)зации. НАДН величина тока снижается ,.

Предлагаемое изобретение позволяет увсгли лить ч гвствительность определения лактата и снизить его предел обнару кения.

25 ф о р м у J а

б р е

тения

Способ определения концентрации лактата, включающий электролиз ис- следуемсго раствора при 20-25 С с введением в него цитохромом Вд, в фосфатном буферном растворе рН 7,0- 7.,5, содержащем медиатор, измерение тока, по которому определяют кок- Ц€;нтрацию л:актата9 отличающийся TeMj что, с целью увели-, чения чувствительности способа, электролиз проводят в присутствии лактатдегидрогеназы, взятой в коли- че.стве 10-120 ед/1уш, к восстановленного никотинамидадениндинуклеотида в Концентрации ,0 мМ с последующим измерением тока относительно Ag//u5Cl электрода,,

Изобретение относится к исследованию материалов при помощи электрических средств. Способ основан на .электролизе исследуемого раствора, в который введен медиатор, при 20- 25 С с введенным в него цитохромом В, в фосфатном буферном растворе рН которого 7,0(-7,5. С целью увеличения чувствительности способа электролиз проводят в присутствии лактатдегидро- геназы и восстановленного никотина- мидадениндинуклеотида в концентрациях, соответствующих предельному току. Это приводит к циклическому превращению лактата в биоферментной системе при участии медиатора, что приводит к увеличению тока ферментного электрода и соответственно к увеличению чувствительности способа. I табл. с о (П