сн
1
Изобретение относится к пояученйк) новых производных митозана, а именно 7-эаме1ценных 9о -метоксимитозана общей формулы
СН20С- КНг ОШз
где А - группа формулы
1 2Нз -с кгде R, - водород или -NCCH); Rj - водород, СН, или группы общих формул
.N-СНз
. f .м.
СНз
1 GH,
R - метил или Rj вместе с R и атомом азота, к которому они присоё динены, образуют пирролидин или пиперидин, обладающих противоопухоле-г, вой активностью.
Целью изобретения является поиск новых соединений митомицинового ряда обладаювщх высокой протг воопухолевой активностью, а также используемых в качестве промежуточных продуктов в
синтезе других соединений, обладаю щих этой активностью.
Изобретение иллюстрируетср следу™ юврши примерами.
П р и м е р t а
А. К раствору 1 t изопропилформи- мидат гидрохлорида в- 2 мл диметил- фЛрмамида (ДО)) медленно добавляют 2,1 мМдиизопропил этиламина при О С в атмосфере аз.ота. К полут1енному раствору по каплям добавляют / -три- метилсилилзтнп хлорформат при ,
0
583271
Полученный чистьй раствор обозначают раствором Ai
B.Раствор 1 ммоль i-оттомицина С в 5 мл ДМФ добавляют к суспензии
5 1,5 ммоль гидрида натрия в 3 мл ДМФ. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают до (-40)-(-50)°С перед добавлением вышеприготовленного раствора А. Раствор выдерживают при 40 С в течение 1 ч, затем ему дают нагреться до комнатной температуры, после чего а течение v6-l8 ч разводят хлористым метиленом и фильтруют. Твердый остаток, полученный после выпаривания фильтрата, хроматографируют на сили- кагеле с выделением амидино-защищен- ного соединения, -указанного в названии примера.
C.А| идино-защитную группу предыдущего промежуточного соединения удаляют с получением незамещенного амидинового соединения, укайанного в названии примера.
П р и м е р 2
5
0
5
OCONH2
30
ОСНз
NH
A.к раствору 1 мМ изопропилформ- имидат гидрохлорида в 2 мл ДМФ медленно добавляют 21 мМ диизопропил зтилаьшна в атмосфере азота при 0°С. К полученному раствору при добавляют метилиодид. Ползгченный раствор обозначают как раствор В.
B.Используя вместо раствора А раствор В, повторяют пример 1В
с получением соединения, указанного в названии примера..
П р и м е р 3.
ШНз)2 о
)1Я
НII 1
OCONH2 ОСН
кн
0,5 м раствор М,Н-диметилхлорме- тиленилвиний хлорида получают путем 55 добавления по каплям 1,57 г оксалил- хлорида(12,5 ммоль) при О С к раствору 915 мг (12,5 ммоль) ДМФ мл хлороформа ,и перемешивают 30 мин
1ФИ комнатной температуре. Отдельно раствор 334 мг (1 кмоль) митомицина С в 5 мл даф добавляют к суспензии 36 мг (1,5 ммоль) гидрида натрия в 3 мл ДМФ, Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают до (-40)-(-50) С после чего добавляют описанньш раствор Ы,Н-диметилхлорметилениминий хлорида (3 мл, 1,5 ммоль). После 10 мин перёмепшвания при -40 С к раствору добавляют 18 мг (0,75 ммоль) гидрида натрия. Раствор вьщерживают при -40 С в течение 1 ч и затем разводят хлористым метиленом и фильтруют. Остаток, полученный-после выпаривания фильтрата, подвергают тонкослойной хроматографии на силика- геле (10% в в качестве элюента).
Экстракция основной зеленой полосы дает 78 мг (43% по отношению к возвращенному мктомицину С) аморфного твердого вещества. Экстракция 4н1олетовой полосы дает 150 мг мито- мицина С.
П р им ер 4. 7(1-Метил-2-(Н)- -пиридинилиден)-амино-9а-метокси- митозан
OCONH2
осн
БН
Ш
К смеси 242 мг (0,725 ммоль) ми- TOwnptHa С и 43,5 мг (1,81 ммоль) гидрида натрия добавляют 4 мл ДМФ. После 15 мин перемешивания при натной температуре добавляют.370 мг (1,45 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридиний иодида. Раствор перемешивают 1,5 ч, разводят этилацетатом (t ОАс) и фильтруют. Остаток, полученный после выпаривания фильтрата, хроматогра- фируют тех на силикагеле, используя 5%-ный метанол в хлористом метилене в, качестве элюента. Второстепенный продукт (12 мг) представляет собой соединение XIX. Основной продукт (75-мг) очищает ТСХ на силикагеле, используя .10%-ный метанол в хлористом метилене, с получением 6 мг (2%) соединения, указанного в названии примера.
12583274
П р и м е р 5. 7-(Метштаминрме- тилен)-амино1-9q-метоксимитозан
,r-OCONH2 OCH-j
,Н
12 мг (0,5 ммоль) гидрида натрия в атмосфере азота добавляют к раствору 167 мг (0,5 ммоль) МИТокицина С в 2 мл гексаметилфосфорамида. .К раствору добавляют 19 мг (0,25 отоль) N-метилформимидойл хлорида, перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и затем добавляют 6 мг (0,25 ммоль) гидрида и 9,5 мг (0,13 ммоль) N-кетилформами- доил хлорида. После 6-12 ч перемешивания раствор разводят этилацетатом и фильтруют. Выпаривание растворителя с последующей хроматографиЧеской очисткой остатка дает соединение, указанное в названии примера.
П р и м е р 6. 7-(1-Пирролняи- нилнетилен)-амнно -9а-метоксимитозан
О г-осо1ЯНг
ОСНз
0,5 м раствор пирролидинил хлор- метилениминий хлорида получают добавлением по каплям 3,17 г (25 ммоль) оксалилхлорида при к раствору 2,48 г (25 ммоль) 1-формилпирролиде- на в 50 мл хлороформа с последующим перемешиванием при комнатной темпера туре в течение 30 мин. Отдельно к раствору 334 мг (1 ммоль) митомицин« С в 3 мл 1-фop илпиppoлидeнa в атмосфере азота добавляют 24 мг (1 ммоль) гидрида натрия. После 20 мин перемешивания при комнатной температуре раствор охлаждают до (-40)-(-50) С и добавляют 1 мл (0,5 ммоль) полученного выше раствора иминиевой соли. У зтой смеси добавляют по очереди с интервалами по 10 мин каждый 12 мг (0,5 ммоль) гидрида натрия, 0,5 мл (0,25 ммоль) раствора иминиевой соли, 6 мг (0,25 ммоль) гидрида натрия, 0,25 мл
(0,125 ммоль) раствора иминиевой со-г ли, 3 мг (0,125 ммояь) гидрида нат- рня и О,t25 МП (0,063 ммоль) раствора иминиевой соли. После 30 мин перемешивания при смесь нагре- веют до комнатной температуры. Затем ее разводят этилацетатом и неорганическую соль отфильтровывают. Остаток полученный после выпаривания растворителя, хроматографируют с помощью тонкослойной хроматографии на силика геле, используя 10%-ный метанол в хлористом метилене. Экстракция зеленой полосы дает 120 иг (t5% вьпсод) соединения, указанного в названии примера.
Пример 7. 7-{,Ы-Метил-Н(ме- тиламино)-метил -амино-9л-метокси- митозан
алюминием. Колонку элюируют сначала хлористым метиленом, а затем - 2%-Hbw (об/об) метанолом в шористом метилене. Получают зеленую фракщяо, состоящую из целевого продукта, который далее очищают хроматографией на алюминии с использованием хлористого метилена, содержащего 10% (об/об) метанола, выход 20 мг (5%).
Найдено, % С 52,68; Н 6,21; N 18,15
Вычислено,
N 8,55
1-1/4 K.jO %: С 53,03; Н 6,34;
П р и м е р 9. 7- (1,3-Диметилг- тетрагидропиримидинилиден) -амино- -9с(-метоксимитозан
9%
i I
О
ц
Ш2СЮЪ1Н2
осщ
5-NH
Повторяют пример 5, заменяя мито- мицИн С 9а-метокси-7-(Н-метиламино) митозаном в том же молекулярном количестве.
П р и м е р 8. 7-(1,3-Диметил 2- -имидазолинилвден)-9(1,-метоксимитозан
О
/iHaOCNH
ОСНз
ш
0,34 г (1 ммоль) митомицина с растворяют в 5 мл 1,3-диметиЛ-2- -имдцазолидона и к раствору добав.пя- ют О,i г гидрида натрия (50% в масле 2,08 ммоль) при комнатной температуре. Смесь вьщерживают при комнатной температуре в течение 20 мин и затем охлаждают на ледяной солевой ванне до -15 С. При этой температзфе смесь вьщерживают 10 мин, а затем к ней добавляют 0,65 г (2 ммоль) 2-хлор-- 1,3-диметил-4,5-дигидро-( ЗН)-имида- золиминий хлорида. После этого смесь снова выдерживают при -15 с а течение 1 ч и затем разводят этилацетатом. и хроматографируют на колонке с
Гидрид натрия (50%-ная дисперсия в масле) в количестве 200 мг (4,2 ммоль) добавляют в атмосфере азота к раствору 680 мг (2 ммоль) митo в«динa в 8 мл 1,3-диметил-3,4, 5,6-тетрагндро (1Н, ЗН)-2-пиримиди- нона. Смесь .вццерживают при комнатной температуре в течение 20 мин и охлаждают до -25°С. Затем к ней до- баэляют 0,73 г (4 ммоль) 2-хлор-1,3- -диметия-2,3,4,5-т етрагидропиримвди- ний хлорида после чего смесь ввдер- живают при в течение 3 ч. Затем ее разводят этилацетатом и 2 мл метйнояа и без дальнейшей обработки наносят на хроматографическую колон-, ку с сухим алюминием и злюируют сначала хлористым метиленом, а затем - 2%-ной (об/об) смесью метанол/хлорис- тьй метилен с получением целевого продукта 0,35 г (39,5%) т. пл.
С 54,78; Н 6,18;
НгО
138-|40 С.
Найдено, Z; N 18,21
,
&)1числено, %: С 54,65; Н 6,33; N 18,2t
Пример 10. 7-(Тетраметил- диa шнoмeтилeк)-aминo-9a-мeтoкcими- тозан
N
.r-oeo-NH2
OCH H
425 МГ (1,42 ммоль) }«1томицина С перемешивают с 50%-ной дисперсией в масле гидрида натрия (85,3 мг) и к смеси добавляют 4 мл диметилформами- да, перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона-в течение to и затем охлаждают до -35°С. Добавляют 289 мг (2,13 ммоль) тетра- метилхлорформамидиний хлорида и оставляют нагреваться до 5°С в течение 2ч, Затем к смеси добавляют наколоть сухой лед для остановки реакции и растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток хроматографи- руют на колонке с алюминием (100 г), используя 3%-ный (об/об) метанол в хлористом метилене в качестве элюента. Это вещество далее очищает тех на алюминии (5%-ный (об/об) мета- иол в слористом метилене) с получением двух фракций весом 17 мг и 76мг, Вторую фракцию кристаллизуют из смеси ацетон - эфир с целевого продукта, т,ш1, выход 12%.
Найдено, %: С 54,92; Н 6,53; N 19,29
С«оНг8.МбО
Вычислено, %: С 55,54; Н 6,53; N 19,43
Пример 11, 7-(1-Пиперидинш1- метилен)-амино-9а-метоксимитозан
ползгчением 193-195 С,
О
о
CH OCKHi OCH-i
0,5 М раствор пиперидинилхлормети- лениминий хлорида получают путем добавления по каплям 380 мг (3 ммоль) оксалилхлорида и 6 мл хлороформа, содержащего 0,34 г (3 ммоль) 1-фор- милпиперидина. Отдельно к раствору 334 мг (1 ммоль) митомицина С в 3 мл 1-формилпиперидина в атмосфере азота добавляют гидрид натрия (30%-ная дисперсия в масле) в количестве 96 мг (2 ммоль). После 15 мин переме
8
10
15
20
25
30
5
0
5
шивания при комнатной температуре раствор охлаждают до и добавляют 4 мл (2 ммоль) раствора имииие- вой соли, приготовленного, как описано выше. Реакционную смесь вцдержи- вают при -25°С в течение 1 ч и затем охлаждают добавлением сухого льда. После добавления метанола ( мл) полученную смесь абсорбируют нейтраль- ньм алюминием, который затем наносят на колонку с алюминием (30 г), Колонку элюируют сначала хлористю метиленом, а затем - 3%-иым (об/об) метанолом в хлористом метилене с получением 360 мг (84%) соединения, указанном в названии примера, т.пл. 68-70 С,
Найдено, : С 55,57; Н 6,21; N 15,91
1-1/4
Вычислено, %: С 55,80; Н 6,58; N 15,49
Противоопухолевая активность по. .отношению к Р-388 Murine Лейкемии.
В таблице представлены результаты лаборатсфных исследований на CqP| мышах-самках, которым внутрибрюшинно имплантировали опухолевый прививочный материал, содержащий 10° асцит- ных клеток Р-388 iBurine лейкемии, и которым вводили различные дозы тестируемого соединения указанной формулы I или митомицина С, Группа из . вести мьшей получала одйу дозу динения в 17Й день после заражения. В каждую серию экспериментов вкогвоча- ли группу из 10 мышей, которым вво-- дили физиологический раствор. Груп- пы, обработанные мит(я ицияом С, представляли собой полоямтельяый контроль. В каждой группе мывей в 30 дн отмечали время выживания в днях и регистрировали число ВЫЖИВШ1Х особей. Мьшей взвешивали перед введением препарата и повторно - на 6-й . Изменение веса было принято в качестве меры токсич- ности вещества. В эксперимент брали мышей весом 20 г каждая, а потерю веса до -2 г не считали чрезмерной. Результаты выражали в яроцентах от-, ношения Т/С (treated/ctmtrol)., которое представляет собой отношение времени выживания группы, обработан- ной препаратом, ко времени выживания контрольной группы, обработанной физиологическим раствором, которое было принято за 100%, Животные, ко-г- горым вводили физиологический раствор, обычно погибали не позднее 99125832710
:го дня. Таким образом может быть фектнвной является доза, вызывающая вачиелена OTHocHTenbHiaH активность гйнимальный эффект (125% Т/С). Кро- соедМнеяий по изобретению в сравнении не того, в таблице дано среднее с ми1гомнф1ном С. Минимальным эффек- значение веса на мышь при максимальтом считали 12% Т/С. Минимально эфно и минимально эффективных дозах.
Подавление Р-388 Murine Лейкемии
Примечание: Цифры в круглых скобках представляют
собой значения, полученные при введении мятомицина С в качестве положительного контроля.
предлагаемые соединения исследовли на противоопухолевую активность, заражая мьшей В 16 меланомой коричиеаой. Эксперименты проводили на DFt мьвпах, которым внутрибркшинно ниокулировали опухолевый имплантант на протяжении 60 дн. Для каждой группы из 10 мьшей определяли время шхивания. Т контрольных животных, инокулированных так же, как опытные жквЬтные и инъецированные: растворителем без препарата, время выживания составляло 21 дн. Для определения максимально и минимально эффективных доз каждого соединения использовали соотношение Т/С (%). За минимально эффективную принимали такую дозу, Которая вызывала 125% Т/С эффект.. Для каждой дозы опытным животным внутрйбрюшинно вводили тестируемое Ёоединение на 1,5 и 9-й день. Среднее изменение веса в день, отмеченное при максимально и минимально эффективных дозах, использовали в качестве меры токсичности. Потеря веса в 2 г для мыши весом 20 г не считалась чрезмерной.
но и минимально эффективных дозах.
Соединения по примерам 10 и 9 исследовали на противоонухолевую актив- ньсть по отношению к В 16 Шггпе нбпаяоие при подкожном введении опухолевого имялантанта и внутри- введении препарата. График введения препарата и время вьвкивания (исследааания проводили 40 дн) определяли по известной методике. На 12-6 день измеряли изменение веса Максимально эффективная доза соединения 1 мг/кг вызывала эффект 156% (Т/С) и прирост веса 1,5 г. В группах по 6 живоТнЁ1х при этой дозе выживали 3 мыши в течение всех 40 дн. Минимально эффективная доза составила 0,25 мг/кг, при которой на 12-й день изменение веса равнялось 1,0 г. Для соединения примера 9 максимально эффективная доза составила 8 мг/кг при эффекте 177% Т/С и изменении веса 0,6, минимально эффективная доза - 4 мг/кг При изменении веса 0,8. В этом же эксперименте максимально эффективная доза митомицина С составляет 3 мг/кг при эффекте 195% Т/С и изменении веса 0,5, минимально эфП123832712
фехтианую дозу митомицина С не опре- противоопухолевую активность, выяв делили.ленную в эксперинентах на животных,
Таким обраэом, данные подтвержда- а также пониженную токсичность в ют для полученньк соединений высокую сравнении с митомицином С,
Составитель И.Бочарова Редактор М.Келемеш Техред М.Ходанич Корректор-А.Обручар
Заказ 5043/60Тираж 379Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР
по делам изобретений- и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4
| F | |||
| Ашег | |||
| Chem | |||
| Soc., 84 | |||
| Письменный прибор | 1925 |
|
SU3185A1 |
