Способ получения 7-замещенных 9а-метоксимитозана Советский патент 1986 года по МПК C07D487/14 

1

Изобретение относится к способам получения новых производных митоми- 11,ина С, а именно 7-замещенных 9а- метоксимитозана общей формулы

О

LI)

где А - амнно, метокси или группа общей формулы

или оба А и В - амидиновйя группа общей формулы

г

. R «3 R.

водород, формил или метил; водород или метил; каждый в отдельности метил или изопропил, или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пиперидин или морфолин, обладающих противоопухолевой активностью.

Целью изобретения является получение новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами с повышенной активностью.

Пример 1. 7- tДиметиламино)ме- тилен амино-N - (диметиламино)-мёти- лен-9а-метоксимитозан (соединение I).

7-(Димeтилaминo)мeтилeн aминo- o ,. -N -(диметиламино)-метилен-формил-Эа-мет оксимитозан (соединение II).

К суспензии 500 мг (1,50 мК) мито- мицина С в 25 мл хлороформа добавляют в целом 9,6 мл 12,4 мл порциями через О, 18, 21 и 23 ч) N,N-димeтил- формамиддиметилацеталя и суспензию перемешивают при 50 С в течение 41 ч. После выпаривания растворителя и избытка реагента при пониженном давлении получают темно-зеленый остаток; тех (хлористый метилен/метанол 20:1) показьшает отсутствие митомицина С при наличии двух новых зеленых компонентов (,16 и 0,22). Основной компонент (,16) выделяют хроматографией мгновенног о испарения, используя смесь хлористый метилен/ме518062

танол 20:1 в качестве злюента, в виде зеленого твердого вешестна (340мг, 51,5%), который после растворения в диэтиловом эфире с последующим до- 5 бавлением гексана дает соединение I в виде темно-зеленого аморфного порошка .

Вычислено, %: С 56,71; Н 6,08; N 18,90

О .Os

Найдено, %: С 56,20; Н 6,28; N 17,88.

Второстепенный компонент (Rf 0,22) выделяют (180 мг, 25,35%) 15 в виде аморфного твердого вещества, которое после осаждения из диэтило- вого эфира и гексана идентифицируют как соединение II.

С 55,89; Н 5,93;

20 N

Вычислено, 17,78

.H,,,

-

25

30

35

40

45

50

55

Найдено, %: С 55,41; Н 5,96; N 16,99.

В растворах соединений I и 1I либо в этилацетате, либо в N,N-димe- гилформамиддиметилацетале при стоянии при комнатной температуре более 10 ч происходит превращение соединения И (,22) в соединение f (,16), что удостоверяется тех, с получением раствора с повышенным содержанием соединения I.

Примеры 2-7 выполняют согласно примеру 1 с модификациями, указанными ниже, с получением различных дополнительных соединений.

П р и м е р 2. 7-(Диизопропил- амино )метилен амино-N -(диизопропил- амино)метилен-9А-метоксимитозан (соединение IТ f).

Суспензию Митомицина С (200 мг, 0,6 мМ) в N,N-диизoпpoпилфopмaмид- цизтилацетале (3 мл) нагревают при перемешивании в течение 15 ч при 3°С. Реакционную смесь выливают в 50 мл воды и зкстрагируют зтилацета- том (З ЗО мл). Объединенный органический экстракт сушат (Na 80 ) и выпаривают с получением темно-зеленого сиропа; ТСХ (хлористый метилен/метанол 10:1) показьшает наличие основного зеленого компонента с ,43 и примесей, движущихся быстрее (Rf 0,45-0,50). Основной компонент III вьделяют в виде темно-зеленого твердого вещества (156 мг, 46,8%) с помощью двукратной хроматографии мгновенного испарения с использованием

3

смеси хлористый метнлен/метанол 20 в качестве элюента.

Вычислено, %: С 62,55; Н 7,91; N 15,10

C.jg Н N.

Найдено, %: С 62,08; Н 7,80; N 14,60.

П р и м е р 3. 7-(Диметиламино метилен амино-N -(диметиламино)мет1О.

лен-9а-метокси-Н -метилмитозан (со

динение IV).

/ Порфиромицин {N -метилмитомицин

130 мг, 0,37 мМ) замещают в качест исходного соединения в реакции с 0,8 мл (1,5 мМ) Г 1,М-диметилформами диметилацеталя, используя 10 мл хлроформа и 2 мл метанола в качестве реакционного растворителя, время ракции 50 мин при . Соединение

IVполучают в виде сиропа после вы паривания реакционного растворител Это соединение затем очищают хроматографией мгновенного испарения, используя 20 г силикагеля и смесь хлористый метилен/метанол 20:1 в к честве элюента.

Вычислено, %: С 57,60; Н 6,55; N 18,33 . C,,H,NgOs

Найдено, %: С 57,I1; Н 6,I1; N 17,99.

Эта методика дает соединение

V- 7-амино-М -диметиламинометилен -9a-мeтoкcи-N -метилмитозан - в качестве побочного продукта с 30%выходом; ТСХ: ,40 (хлористый метилен/метанол 9:1).

Вычислено, %: С 56,53; Н 6,20; N 17,38,

.Oj

Найдено, %: С 54,68; Н 6,13; N 16,59.

П р и м е р 4. 9а-Метокси-7-( 1 -пиперидиниламино)метилен амино-N (I-пиперидинилметилен)митозан (соединение VI) .

К-(Диэтоксиметил)пиперидин (З м и митомицин С (200 мг) взаимодействуют при в течение 2,5 ч в хлроформе (3 мл). Продукт получают с 27,6%-ным выходом, ТСХ: ,20 (хлористый метилен/метанол 20:1).

Вычислено, %: С 61,79; Н 6,87; N 16,02;

С,, Н,6 е

Найдено, %: С 61,01; Н 6,85;

N 15,34.

N -Формил-производное предьщу

5

fO

15

20 5

о

5

5

0

щего вещества.

N -Формил-9а-метокси-7- {I-пиперидиниламино )метилен 1-амнно-М - (1-пиперидинилметилен)митояан получают в качестве основного KOMnoHOfi- та: выход 43%; ТСХ: ,25 (хлористый метилен/метанол 20:I ) .

Вычислено, %: С 60,08; Н 6,32; N 15,21

С.

Найдено, %: С 59,09; Н 6,17;

N 15,07

Пример 5. ,9а-Метокси- ( 1- морфолино )метилен амино-N -( I-мор- фолино)метилен митоэан (соединение VTI).

Перемащиваемую суспензию митоми- цина С (200 мг, 0,6 мМ) в хлороформе (10 мл) и N-диэтоксиметилморфолина (4 мл) нагревают при в течение 42 ч. Реакционную смесь концентрируют до консистенции сиропа под высоким вакуумом. С помощью сырой хроматографии мгновен 1ого испарения (хлористый метилен/метанол 25:1) отделяют зеленые компоненты от избытка реагентов. Объединенные зеленые реагенты растворяют в 20 мл этилацетата и промывают водой (3 20 мл). Объединенные промывки ре- экстрагируют этилацетатом ( мл). Все этилацетатные фракции объединяют, сушат (,| ) и выпаривают до темно-зеленого сиропа; ТСХ (хлорис- ть)й метилен/метанол 10:1) которого . свидетельствует о наличии отдельного компонента с ,33 и нескольких зелень1х примесей (Rf 0,35-0,40). С помощью хроматографии мгновенного испарения компонент с ,33 вь1Деля- ют (130 мг, 56,8%) в виде темно- зеленого аморфного твердого вещества, которое характеризуется как соединение VIT.

Вычислено, %: С 56,78; Н 6,06; N 15,90

Найдено, %: С 53,07; Н 6,03; N 15,37

10

П р и м е р 6. 7-Амино- « -диме- тиламинометилен-9а-метокеимитозан (соединение VTII).

Митомицин С (200 мг, 0,6 мМ) растворяют в 10 мл хлороформа и 2 мл метанола, добавляют К,Г;-димотилформ- амиддиметилацеталь (0,64 мл, 4,8 мМ) и раствор перемешивают при 50 С в

течение 50 мин. Тонкослойная хроматография (хлористый метилен/метанол 90:10) показывает следы непрореагировавшего митомицина С (,22) и два новых компонента (,A2 и 0,33 соответственно). Раствор концентрируют при пониженном давлении до консистенции сиропа, который подвергают хроматографии мгновенного испарения (25 г силикагеля), используя смесь хлористый метилен/метанол 20:1 в качестве злюента.

Быстрый компонент (Rf-0,42) вьще- ляют в виде зеленого аморфного твер- дого вещества (60 мг, 22,5%) и идентифицируют как соединение 1 с помощь его ЯМР-спектра (пиридин d).

Основной синий компонент (,33 выделяют в виде аморфного твердого вещества (148 мг, 63,3%) и характеризуют как соединение VITI. Аналитический образец получают осаждением из хлористого метилена и н-пентана.

Вычислено, %: С 55,48; Н 5,91; N 17,98;

Ci8 ,

Найдено, %: С 54,70; Н 6,14; N 17,95

П р и м е р 7. 7,9а-Диметокси- , -N -диметиламинометиленмитоэан (соединение IX).

Вместо митомицина С примера 1 берут митомицин А (170 мг) и подвергаю взаимодействию с К,Н-диметилформамид диметилацеталем (0,6 мл) в растворе хдороформ/метанол 10:1 при 50°С в течение 1 ч. Целевой продукт получают с выходом 48%; ТСХ: ,50 (смесь хлористый метилен/метанол 9:1).

Вычислено, %: С 56,39; Н 5,94; 13,85;

С,д Н,, N, О,

Найдено, %; С 56,51; Н 5,92; N 13,71.

-.la .

N -Формил-производное соединени

IX получают в виде соединения ТХа- -7,9а-диметокси-К -диметиламиномети лен-N -фор1чилмитозана с выходом i6,5%. ТСХ ,61 (хлористый метилен/метанол 9:1).

Примере, (Димeтилaми- нo)этилидeн aминo-N - 1-(диметил- амино)этилиден -9а-метоксимитозан (соединение Х).

Суспензию (600 мг, 1,79 ммоль) : (итомицина С в 2 мл метанола обра. ю

)5

20

25

зо

д

5

батывают 3 мл N,М-диметнлацетамид- диметилацеталя. Затем суспензию нагревают до 75-80 С и перемешивают в течение 2 ч. На этой стадии ТСХ (хлористый метилен/метанол 10:1) показьшает, что почти весь митомицин С израсходован в процессе реакции. На хроматограмме полученный продукт проявляется в виде зеленой полосы. Растворитель и летучие вещества удаляют концентрированием реакционной смеси досуха при пониженном давлении с получением сиропа, который растворяют в хлористом метилене и наносят на колонку с 40 г силикагеля, после чего колонку злюируют 200 мл 1%-ного метанола в хлористом метилет1е, 200 мл 2%-ного метанола в хлористом метилене, и 400 мл 5%-ного метанола в хлористом метилене. Фракции, содержащие зеленую полосу, представляющую собой продукт, объединяют и концентрируют до аморфного твердого вещества весом 110 мг, выход 13%. Это вещество растворяют в 2 мл ацетона и осаждают из раствора добавлением гексана. Продукт собирают фильтрацией.

Вычислено, %: С 58,46; Н 6,83; N 17,79,

С,зН,,,0,

Найдено, %: С 58,89; Н 6,89; N 17,64.

П р и м е р 9. 7-Oкcи-N -диме- тиламинометилен-9а-метоксимитозан.

К раствору 20 мг 7-окси-9а-мет- оксимитозана в 3 мл хлористого метилена добавляют I мл диметилформ- амиддиметилацеталя и раствор перемешивают при в течение 30 мин. Ход реакции контролируют ТСХ (хлорис тый метилен/метанол 10:1). Продукт возвращают концентрированием смеси при пониженном давлении и остаток хроматографируют на силикагеле с получением целевого соединения.

Противоопухолевая активность по отнощению к Р-388 Murine лейкемии.

В табл. I приведены результаты лабораторных исследований на CDF,. мьппах-самках, которым внутрибрюшинно имплантировали опухолевый прививочный материал, содержащий 10 асцит- ньпс клеток Р-388 Murine лейкемии, и которым вводили различные дозы тестируемого соединения формулы 1 или митомицина С.

Соединения вводили путем внутри- брюшинногЧ инъекции. На каждую дозу брали тфуппу из шести мышей, которые получали одну дозу .оединения в первый после заражения день. В каждую серию экспериментов включали группу из десяти мыгаей, которым вводили фи- зиолог1гческий раствор. Группы, обработанные митомицином включены D качестве положительного контроля. Для каж.цой группы мьппей в течение 30 дн отмечали время выжива шя в днях, а в конце 30-дневног о периода регистрировали число вьгживших особей Мышей взвешивали перед введением препарата и повторно на 6-й день. Изменение веса было принято в качестве меры токсичности вещества, В эксперимент брали мьпией весом 20 г каждая и потерю веса до 2 г не считали чрезмерной. Результаты выражали в процентном отношении Т/С (treated/control), которое представляет собой отношение времени выживания группы, обработанной препаратом, к времени выживания контрольной группы, обработанной физиологическим раствором, которое было принято за 100%, Животные, которым вводили физиологический раствор, обычно погибали не позднее девятого дня.

Максимальный эффект в приведенной ниже таблице выражен в процентном отношении Т/С; рядом дана доза, которая этот дефект вызывает. Цифры в круглых скобках представляют собой значения, полученные при введении митомицина С в качестве положительного контроля в том же эксперименте. Таким образом, может быть вычислена относительная активность соединений настояшего изобретения по сравнению с митомицином С, Минимальным эффектом считали 125% Т/С. Минимально эффективной дозой, приведенной в таблице, является доза, вызывающая минимальный эффект (125% Т/С), Две цифры, данные в каждом эксперименте в графе среднее изменение веса, представляют собой соответственно среднее изменение веса мьпии при максимально эффективной и минимально эффективной дозах (1-6 день).

В табл. 2 представлены результаты исследования противоопухолевой активности при заражении мьш1ей В 16 меланомой коричневой. Эксперименты

проводили ни BDF, мышах, которым внутрибрюшинно инокулировали опухолевый имплантант. Протяженность экс- J перимента 60 дн. На каждую дозу тестируемого соединения брали группу из 10 мышей и для каждой группы определяли время выживания, У контрольных животных, инокулированных так 10 же, как и опытные уивотные, и инъек- цированных растворителем без препарата, время выживания составляло 21 день. Отношение времени выживания опытных животных к времени выжи15 вания контрольных (Т/С) использовали в качестве меры эффективности и для каждого тестируемого соединения определяли максимально эффективную и минимально эффективную дозы. За

20 минимально эффективную дозу принимали такую дозу, которая вызывала эффект 125% Т/С, Для каждой дозы опытным животным внутрибрюшинно вводили тестируемое соединение на

5 1-й, 5-й и 9-й день. Среднее изменение веса в день, отмеченное при максимально эффективной и минимально эффективной дозах, использовали в качестве меры токсичности. Потеря

0 веса в 2 г не считалась чрезмерной.

Соединения исследовали на противоопухолевую активность по отношению к В 16 Murine меланоме при подкожном введении опухолевого имплантанта и внутривенном введении препарата. Гра- фиk введения препарата и значения времени вьгаивания (исследования проводили в течение 40 дн) определяли, как указано вьште, На 12-й день определяли изменение веса. Максимально эффективная доза соединения была 1 мг/кг. Эта доза вызывала эффект 156% Т/С и прирост веса 1,5 г. В группы брали по шесть животных, и при этой дозе три мыши выживали в течение всех 40 дней. Минимально эффективная доза была 0,25 мг/кг, при этой дозе на 12-й день изменение веса составило 1,0 г. Минимально эффективную дозу митомицина С не определяли.

В кратком токсикологическом исследовании группам из пяти белых BDFj мьш1ей внутрибрюшинно вводили однократную дозу соединения, В результате при оптимально эффективной дозе вводимого соединения не наблюдалось значительного уменьшения чис5

0

5

0

ла лимфоцитов. При этой дозе также не отмечалось значительного повышения азота мочевины крови IBunj или сывороточной глютаматфосфотрансфера- эы (SGPT), что указывает на отсутствие неблагоприятного воздействия на функцию почек или печени, а также на то, что препарат не подавляет активности лимфоцитов.

Ввиду высокой противоопухолевой активности, выявленной в зксперименПодавление Р-388 Murin

Подавление В16 меланомы

I (1)(256) 0,8(3,2),2

VII(5)(198) 2,0(3,0),0

Примечание : цифры в скобках представляют собой

значения контроля с митомицином С.

Tax на животных, а также пониженной токсичности в сравнении в митомици- ном С возможно использование соединений общей формулы f для подавления опухолевого роста у млекопитаюих. В этих целях они применяются системно (по всему организму) у млекопитающих имеющих опухоли, в основном в нетоксичных противоопухолевых эффективных дозах.

Т а б л и ц а I

йкемии

Таблица 2

+0,5 -0,2(5) -0,4 -0,4(6)