Способ получения производных винилкарбоновых кислот Советский патент 1986 года по МПК C07D213/34 C07D213/55 

Изобретение относится к производных винилкарбоновых кислот общей формулы

HK

/С СН-СН2 Ш2{СН2)п-СООНз

Ri

где R - пиридил;

R - фенил, тиенкл, фурил, нафтил, бенэотиенйл или пг риДШ1, содержащий HHsjnyro алкокси- или алкильную , атом галогена, тр1 фторметильную группу, группу низшего алкенила или метиленДйокси-группу; RJ - атом ВОДОРОДА или низший

алкил;

п - целое число от О до 6. Цепью изобретения 11вляется разработка на основе известного метода способа получения новьс1с соединений, обладакЕЕ1Их высокой ингибирующей активностью а отношении синтетазы тромбоксана Aj и, тем самым, выраженным противотромбозным действием. Пример1.К40мл диметилсульфокснда порциями добавляют 1,0 г гидрида натрия, смесь нагревают при 80с в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют к ней 9,5 г 5-карбоксипентиптрифенилфосфонийбромида ммоль) и перемешивают в течение 5 мин, затем добавляют 10 мл тетрагидрофуранового раствора 3,7 г

(0,02 моль) 3-бензоилпиридина. Смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, добавляют воду (100 мл), затем подвергают экстракции (дважды) этилацетатом (50 мл) для удаления нейтральных продуктов. Водные слои объединяют и подкисляют до рН 6 2 и. соляной кислотой, затем их экстрагируют этилацетатом. Органические слои объединяют, промывают водой и высушивают сульфатом магния. Затем вьшаривают растворитель, остаток подвергают хроматографированию на силикагеле, используя смесь этанола и этилацетата (1:5) в качестве элйента, и получают 4,5 г (79%) (Е) + (г)-7-3-пи идил)-7-фенш1-6-гептеновую кислоту (табл. 1, соединения).

Разделение изомеров осуществляют с помощью фракционной кристаллизации или жидкостной хроматографии с использованием прибора Лобра Лихропреп Р-П-8 (40-63 мкм, произведен фирмой Мерк и Ко).

В табл. 1-6 приведены физико-химические характеристики полученных соединений (где Е - изомеры, в которых пиридиновое ядро при одном атоме углерода и атом водорода при другом атоме углерода находятся по одну сторону от тризамещеннйй олефиновой связи; Z - изомеры, в которых они находятся в противоположных направлениях А и В - два типа геометрических изомеров; а А-4-В - их смесь).

0)

n

X I

a i X I

ЧГ «e

Ю

чО

Л

се

in r

1Л

0

о

Ю

Ю

Г-,

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ВИНШ1КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ общей формулы FI. X. ,с сн- СН2- СНгЧСНг)- соонз / Нг где R, - пиридил; R - фенил, тиенил, фурил, нафтил, бензотйенил или пиридил, содержащий низшую алкокси- или алкильную группу, атом галогена,,трифторметильную группу, группу низшего алкенипа или метилендиокси-грутшу; R. - атом водорода илинизший алкил; п - целое число от О до 6, отличающийся тем, что, кетон общей формулы R 1 / R2 где R и Rj имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (, ) ,-P-CH,CH2CH,j-(CH4 )„ -COORjJIx; СО где R, и п имеют указанные значения, X - атом галогена, предпочтительно в присутствии основания, например гидрида натрия, амида натрия или трет -бутилата калия в присутствии органического растворителя, преимущественно тетрагидрофурана, диметилсульфоксида или смеси этих двух растворителей при температуре от -10 до +40 С.

о .ft m

/-S ft

0 CN

Л

« .ft tN Х-Ч

t О

J- r

.ft 0,

/-S Л Щ

0 33-3f

ft V N

я v

СЧ r - a in о о, vo

ft.ft

00 S о

.ft СЧ ft

к W CM

- vC «8

о

X T-

t4 0f4

и ft(M

- SB

S- .ft

00 0

О

О я

- ftCVl

- r M

+

;

/-s

.ft

-9

.ft g - ft

-s

0 rя с м

0 Я а N

см

fttSl

«s

я

00

ftV.

я

t u

N ГО

ш

о 4J Ti

О я

«

А«

(Si да

О Л

} {N1 го f

СП

ft

п , .ft

чО -ч

..3

.5

.ft л

.«О

/-ч ft

я

0 40

0 Я

/в I-см .

ft

Я S ,

«

PC «

CM

00 С U

x о

ч-- - ,-

N а

CM Н

CO ta

00 ft ft

«

А ft

п

о я

S я t

vO Я

n fS

ш

ft sJft

00 . -o .« 00

4

.

.ft a cj

00

И f

.ft и

«ft о ft in

/TV ft in - ft

я

я я

я я . s ft

я vo

So§fO о

CJ.ft

.ft

-0

о

00 -r -4

1 0 ft 00 0

-Г S

я Я

- к «I,

4« «

Я я

ГО я

«- 40 я ч- чо я

- fo г

S ч

о

о

CJ

г. о

vO oo 00

Г f о

г г. CM

r ftCsJ О

ft ft

ft

V ft ft

c чо

00 T- vO CM .- ч) (О

pq

+

+ «

t

О CM

,a

л

M M

ГО CM

,0JQ

Kf-

)C CH-CH2CH24CH2%CQOH. (Iff)

Re

Спектр ЯМР (хим.сдвиг,6 , м.д.ГМС

Избмер

R виутрелний стандарт) У А + В

Таблица 4

Выход, 11,80 (1Н, СООН); 8,53 (2Н,т); 7,62 (1Н,т); 62 7,30 (2Н,т); 6,85 (1H,in); 6,83 и 6,48 (1Н,т); 6,22 и 6,04 (1Н, t, 7 Гц); 2,30 (4Н,т) 1,46 (6H,ffl)

Kfl

-CHCH2CH24CH2-)riCOOCH3 (le)

2A « в

Br2A в

6

Вг

2А « В

О

5А В

Сг

Т..а блица 5

8,50 (2H,m); 7,30 {2H,m); 7,09 7,0682

2H,d, 8 Гц); 6,88 н 6,78 (2H,d, 8 Гц); 6,05 и 6,02 (и, 6); 3,82 и 3,78 (ЗН,в); 3,64 (ЗН,в); 2,26 R 2,13 (2H,m); 1,55 4H,m)

6,90 (3H,m); 6,15 {lH,t, 7 ПО; 3,84 (ЗН,.в); 3,67 (ЗН,в); 3,64 (2H,m); 2,27 н

3,80 (ЗН,в); 3,77 (ЗН,в); 3,65 (ЗН,в); 2,27и 2,15 ); 1,59(4Н,1в)

81

8,50 (2Н,ш); 7,30 .(6Н,т); 6,14 я 6,10 (1H,t, 7 Гц); 2,26 я 2,09 (2Н,т); 1,55 (4Н,т)

8,48 (2Н,т); 7,31 (7Н,т); 3,65 (3H,s);

6,16 я 6,07 (1H,t, 7 Гц); 2,28 (2H,t, 7 Гц); 2,11 (2Н,и); 1,58 2Н,я); 1,30 (10K,iii)

8,4.6 (2Н,ш); 7,44 (1H,d, 5 Гц); 7,32

(ЗН,т); 7,15 (ЗН,т); 6,09 (lH,t, 7 Гц); 3,66 (ЗН,в,Ме); 2,26 (2H,t, 7 Гц); 2,ТЗ (2H,t, 7 Гц); 1,55 (4Н,)

в,50 2Н,ш); 7,48 (tH,d, 6 Гц); 7,23 (6Н,т); 6,t6 1H,t, 7 Гц); 3,66 (ЗН,в); 2,27 2H,t,

7 Гц); 2,09 (2H,t, 7 Гц); 1,56 (4Н,ш)

8,60 (tH.iO; 8,48 (ЗН,ш); 7,45 (4H,iE)i

vC

о)

tf

S Ч ю :e) Н II p и м e p 2. (Е.)-7-{3-Пиридил) 7-фенил-6-гептеновую кислоту (Ia-4) 300 мг растворяют в 5 мл 2н, соляно кислоты. Раствор концентрируют при пониженном давлении. Пере1 ристаллизация оставшихся кристаллов из смес этанола и изопропилового эфира дает 285 мг (Е)-7-(3-пиркдил)-7-фенил-6гептеновой кислоты гидрохлорид (If-1) с т.пл. 163-165С (табл. 6). П р и м е р 3. (Е)-7-(3-Пиридил) 7-фенш1-6-гептеновую кислоту (1а-4) 500 мг и 160 мг бикарбоната натрия добавляют к 5 мл воды, получая гомо генный раствор, который концентриру ют при пониженном давлении. Концент рат распыляют с использованием смес этанола и изопропилового эфира и по лучают натриевую соль (Е)-7-(3-пири дил)-7-фенил-6-гептеновой кислоты (rf-2, табл. 6). П р и м е р 4. Добавляют 31т (0,79 моль) амида натрия к 350 мл диметилсульфоксида в атмосфере азота, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем при поддержании температуры или ниже добавляют 140 г (0,306 моль) бромистого 5-карбоксипентилтрифенилфосфония, смесь перемепшвают в течение 1 ч. В указанную смесь по каплям добавляют раствор 55 г 3-бензоилпиридина (0,301 моль) и 50 мл диметилсульфоксида при комнатной температуре и перемешивании. По окончании добавления реакция протекает при комнатной температуре дополнительно в течение 30 мин. Добавляют 700 мл воды, нейтральное вещество экстрагируют дваж ды толуолом. Водный слой подкисляют до рН 5,5 6 н. раствором соляной кислоты и дважды экстрагируют этилацетатом. Органический слой промываг ют водой, высушивают и концентрируют при пониженном давлении, получая эк- вимолярную смесь 71,0 г (Е)- и (Z)7-фенил-7-(3-пиридил)-6-гептеновой кислоты. Эту смесь растворяют в смеси 47%-ной бромистоводородной кислоты (300 мл), и 300 мл воды. Образовавшуюся смесь нагревают при, в течение. 18 ч, после охлаждения ее подщелачивают до рН 5,5 50%-ным водным раствором гидроокиси натрия и дважды экстрагируют этилацетатом. Органический слой промьшают водой, высушивают и концентрируют при пошiжeннoм давлении. Образовавшийся маслянистый продукт растворяют в 100 мл этилацетата, раствор вьщерживают при комнатной температуре в течение суток, получая кристаллический продукт, который собирают фильтрацией, получая 28,6 г (33,8%) (Е)7-фенил-7-(3-пиридил)-6-гептеновой кислоты. При концентрации фильтрата получают смесь 40,4 г (Е)- и (г)-7-фенил7-(3-пиридил)-6-гептеновой кислоты (отношение форм E/Z 17:23). Эту смесь повторно подвергают кислотной изомеризации аналогично описанному и получают дополнительно 16,7 г (19,7% выхода) (Е)-7-фенил-7-(3-пиридил)-6-гептеновой кислоты. Дважды повторяют кислотную изомеризацию так,как описано, и получают 12,3 г (14,5%) (Е)-7-фенил-7-(3-пиридил)-6-гептеновой кислоты. Весь кристаллический продукт (57,6 г), полученный по описанной методике кислотной изомеризации и кристаллизации, перекристаллизовывают дйажды из 120 мл этилацетата и получают 52,3 г (61,7%) (Е)-7-фенил7-(3-пиридил)-6-гептеновой кислоты, имеющей чистоту не менее, чем 99. Т.пл. 114-115с. Вычислено,%: С 76,84j Н 6,81; N 4,98. С ,8 Н19 N02 Найдено,%: С 76,76; Н 6,69; N 4,68. Спектр ЯМР (хим.сдвиг, б , м.д., внутренний стандарт ТМС, то же самое во всех следующих примерах): 11,8 (1Н, СООН); 8,55 (2Н, мультиплет); 7,46 (1Н, дублет, 7 Гц); 7,31 (ЗН,м); 7,16 (ЗН,м); 6,13 (1Н, триплет,7 Гц); 2,29 (2Н, триплет, 7 Гц); 2,13 (2Н, триплет, 7 Гц); 1,58 (4Н, мультиплет), Пр йме р 5..В атмосфере азота добавляют 1 г гидрида натрия (60% в масле) к 25 мл диметилсульфоксида), смесь нагревают при 85°С и перемешивЪнии в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, постепенно добавляют 5,2 г (11 ммоль) бромистого 5-карбоксипентилтрифенилфосфония. Смесь перемешиают в течение 10 мин, по каплям доавляют к нему раствор 2,5 г (0,11 моль) (3,4-метилендиоксибензол)пиридина в тетрагидрофуране (10 мл). осле окончания добавления смесь доолнительно Перемешивают при комнатной температуре в течение 30 1«шн. По завершении реакции добавляют 100 мл воды, нейтральное вещество экстрагируют дважды толуолом (по 50 мл). Водный слой подкисляют до рН5,5 2н. со ляной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, высушивают сульфатом магни и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографированию на колонке с силикагелем, используя этилацетат в качест ве элюента. Элюент концентрируют, остаток кристаллизуют из смеси этил ацетата и изопропилового эфира, получая 0,4 г (24,6%) (г)-7-(3,4-метилендиоксифенил)-7-(3-пиридил)--6-гептейовой кислоты, т.пл. 90-91 С. Спектр ЯМР: 9,20 (COOH)j8,46 (2Н, мультиплет);7,50 (1Н,м) ; 7,30 (1Н,м) j 6,68 (1Н,д, 2Гц); 6,68(1Н, дублет, 8 Гц); 6,53 (1Н, дублеты,. 8 и 2 Гц) 6,06 (1Н, триплет, 7 Гц); 5,92 (2Н, синглет); 2,28 (2Н,м); 2,03 (2Н,м); 1.57(4Н,м). Полученный (Z)-изомер (0,3 г) растворяют в 18%-ной соляной кислоте, раствор нагревают при 110 С в .течение 20 ч. После завершения реакции реакционную смесь подщелачивают до водным раствором аммиакаи экстрагируют этилацетатом. При жидкостной хроматографии высокого разрешения этого продукта установлено, что соотношение Е-изомер: Z-изомер составляет 51:21. При жидкостном хроматографировании 0,26 г этой смеси с использованием прибора Лобар Лихропрен РП-8 (40-60 нм, фирма Мерк, г.Дармштадт) смесь разделяют на Z-изомер, которьй элюируется первым, и Е-изомер, который элюируется позднее. При концентрировании фракции Е-изомера получают (Е)-7-(3,4метилендиоксифенйл)-7-(3-пиридил)6-гептеновую кислоту (0,14 г). Спектр ЯМР: 10,30 (1Н, СООН); 8,50 (2Н, мультиплет); 7,47 (2И,м); .6,80 (1Н, дублет, 8 Гц); 6,60 (1Н, дублеты, 8 и 2 Гц); 6,57 (1Н,д,,2 Гц) 6,06 (1Н, триплет, 7 Гц); 5,96 (2Н, синглет); 2,31 (2Н,м); 2,16 (2Н,м); 1.58(4Н,м). Примерб.В атмосфере аргона добавляют 10 г (0,25 моль, 60%--ный в масле) гидрида натрия к 250 мл диметилсульфоксида, смесь перемешивают 1ч при85°С, затемее охлаждают до

комнатной температуры, постепенно добавляют 52 г 5-карбоксипентилтрифенилфосфоний бромида (0,11 моль),поддерживая температуру равной . Образовавшуюся смесь перемешивают в течение 10 мин, по каплям добавляют раствор 20 г (О,11 моль) 2-никотиноилтиофена в 60 мп тетрагидрофурана. После добавления смесь перемешивают при комнатной тем)П ературе в течение 30 мин и добавляют 300 мл воды. Водный раствор экстрагируют дважды толуолом (300 мл), чтобы удалить нейт- . ральцое вещество. Водный слой подкисляют до рН 5,5 сдляной кислотой (2н.) и экстрагируют эт1-шацетатом. Этилацетатный слой промывают водой, высуши- . вают сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматог рафированию на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента этилацетат, элюат концентрируют. Полученный маслянистый продукт растворяют в этштацетате, раствор Вьщерживают в течение ночи, получая 9 г (29%) (Z)-7-(3-пиpидил)7-(2-тиенил)-6-гептеновой кислоты, т.пл. 93-94°С. . Спектр ЯМР: 11,9 (1Н, СООН); 8,53 (2Н,м); 7,62 (1Н,м); 7,20 (1Н,м); 7,15 (1Н,м); 6,85 (1Н,м); 6,48 (1Н,м).-, 6,22 (1Н, триплет,7 Гц); 2,35 (4Н,м); 1,63 (4Н,м). Полученный в описанной реакции Z-изомер (1j, О г) растворяют в 10 мл 50%-ного водного раствора фосфорной кислоты, раствор нагревают при 100 С в течение 16 ч. По завершении реакции реакционную смесь подщелачивают дд рц 5,5 водным аммиаком с последугадей экстракцией и разделением известным способом. Методом жидкостной хроматографии высокого разрешения этого сырого продукта установлено, что соотношение изомеров ErZ 76, 14. Неочищенный продукт (0,92 г) перекристаллизовывают из этилацетата и получают 0,65 г (Е)-7-(3-пиридил)-7(2-тиенил)-6-гептеновой кислоты, т.пл. У4-85 С. Спектр ЯМР: 10,50 (1Н, СООН); 3,59 (1Н, дублет, 2 Гц); 8,48 (1Н, Д,Д..2 и 4 Гц); 7,58 (1Н, триплет, 7 и 2 Гц); 7,29 (1Н,м); 7,24 (1Н, Д,Д 4 и 7 Гц); 7,04 (1Н,м); 6,85 (1Н,м); 6,04 (1н, триплет, 8 Гц); 2,34 (4Н,м); -1,64 (4Н,м). Пример 7. 11-фенил-11-(3-пиpидил)-10-yндeцeнoвaя кислота, В газ.овом потоке аргона гидрид натрия (обработанньм путем промывки 3,8 г его 60%-ного маслянистого продукта гексаном) добавляют в 200 мл диметилсульфоксид, смесь перемешивают -при 85 С, Реакцию продолжают в течение 1 ч, затем реакционную смесь охлаждают до комнатйой температуры, постепенно добавляют в реакционную смесь 21 г (0,041 моль) 9-карбоксинонитрифенилфосфониумбромида, поддерживают реакционную температуру на уровне 40 С. Реакцию, продолжают 10 мин с перемешиванием, затем в ре акционную смесь добавляют 7,5 г (0,04 моль) раствора 3-бензоилпиридина в диметилсульфоксиде (20 мл) и перемешивают в течение 30 ми, В ре акционную смесь добавляют 200 мл во ды и удаляют нейтральное вещество (трифенилфосфиноксид) путем экстрак ции толуолом, рН водного слоя довод до 4 путем добавления 2н. хлористов дородной кислоты. Полученньш таким образом продукт экстрагируют этилацетатом, затем промывают органичес кий слой водой, просушивают с помощью сульфата магния и концентрируют под пониженным давлением. Полученный таким образом осадок обрабатывают посредством хроматографии в силикагельной колонне и подвергают элюиро ванию изопропилэфирэтилацетат.ом ( с целью получения смеси (Е)- и (Z)изомеров (8 г, выход 86%). Часть этой смеси обрабатьшают посредством высокоскоростной жидкостной хромато графии с целью изоляции соответственно (Е)- и (г)-изомеров. (Е)-11-Фенил-11-(3-пиридил)-10ундеценовая кислота, точка плавления 90-9 . Элементный анализ. Вычислено,%: С 78,30} Н 8,06; N 4,15. Найдено, %: С 78,51; Н 9,12; N 4,03. Спектр NMR (в CDC t, внутренний стандарт TMS): 1,27(12Н,т); 2,07 (2Н,т); 2,31 (2Н,т); 6,11 (1H,t, 7Н Z); (7Н,т); 8,44 (Ш, d, d, 2Н Z); 8,51 (lll, d, 1H.Z). (г)-11-Фенш1-11-(3-пиридил)-10ундеценовая кислота. ПИК спектр (в CDCEj, внутренний стандарт TMS): 1,27 (12Н,т); 2,06 (2Н,т); 2,32 (2H,t, 8Н Z); 6,16 (1Н, t, 7Н Z); 7,21 (6Н,м,т);7,50 (1Н, d, d); 7Н Z, 2Н Z); 8,46 (1H,d, 2Н Z); 8,54 (1H,d,d, 2Н Z, 4Н Z). П p и м e p 8. 7-(3-Пиридил)-7фенил-6-гептеновая кислота. Третичный бутилат калия (2,6 г, 23 мМ) добавляют в диметилсульфоксид (40 ни), к этому раствору добавляют 5-карбоксипентилтрифенилфрсфоний бромид (4,25 г, 10,5 tM) постепенно и поддерживают температуру реакции ниже 40°С. Затем к этой реакционной смеси добавляют раствор (3-бензоилпиридина 1,85 г, 10 мМ) в тетрагидрофуране (5 мл) с перемешиванием и, продолжают реакцию в течение 30 мин. В реакционную смесь добавляют 200 мп воды, посредством толуола удаляют экстракционным путем нейтральное вещество (трифенилфосфинокись), рН Водного слоя доводят до 5,5 путем добавления 2н. хлористоводородной кислоты, затем полученный таким образом продукт экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, высушивают и концентрируют в условиях пониженного давления. Полученный таким образом остаток обрабатывают посредством хроматографии в силикагельной колонне, элюируют этанол - этилацетатом (1:5) с целью получения смеси (Е)- и (Z)-изомеров 7-(3-пиридил)-7-фенил-6-гептеновой кислоты (2,3 г, выход 80%). (Е)-изомер изолируют путем рекристаллизации, из этилацетата. Одновременно (Z)изомер изолируют из маслянистого вещества при удгшении (Е)-изомера посредством жидкофазной хроматографии высокой разрешающей способности. Пример 9. 7-(3-Пиридил)-7(2-тиенил)-6-гептеновая кислота. К перемешанной смеси метилсульфинилмётила натрия, которую получают путем добавления порошкообразного гидрида натрия (500 мг) к избыточному диметилсульфоксиду с перемешиванием в среде азота при 65-70с до прекращения выделения водорода, в диметилсульфоксиде и тетрагидрофу ране (в соотношении 1:1,40 мл), добавляют 5-карбоксипентилтрифенилфосфонийбромид (4,75 г) и 3-пиридил2-тиенилкетон (1,89 г) при -10°С. После вьщержки при тех же условиях в течение 2 ч реакционной смеси представляют возможность отстояться при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь обрабатывают 2н; соляной (150 мл) и с помощью толуо ла экстрагируют нейтральный компонент, С Помощью карбоната натрия водный слой доводят до рН 5,5 и с помощью этилацетата экстрагируют продукт. Органический слой промывают воДой, высушивают и подвергают концентрированию под пониженным дав лением. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле с использовани ем в качестве растворителя для элюи рования смесь простого иэопропилово го эфира и этилацетата (в соотношении 1:4) с получением 7-(3-пиридил7-(2-тиенил)-6-гептеновой кислоты (2,2г, 82%). Испытание токсичности на мышах проводят следующим образом, № шш-самцы ICP в возрасте пяти недель используют по группам из пяти животных. Каждому животному стоматйчески вводят каладое испытуемое соединение из расчета 200 мг/кг живого веса. Затем подсчитьшают количество погибших животных в течение следующей одной недели. Характерные примеры результатов испытаний приведены в табл. 6. Т:аблица7 47030 К 60 мкл трис -буферного раствора (рН 7,5, концентрация 50 мМ) IPM, содержащего 140 тгг в виде белка, добавляют 60 мкл буферного фаствора или раствора, содержащего испытуемые соединения при различных концентрациях. Эти смеси выдерживают в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем 1три О С к порции смеси объемом too мкл добавляют 200 мкл буферного раствора, содержащего 30 мг простагландина Н (nPHj). Эту смесь вьщерживают в течение 5 мин при ОС, чтобы вызвать образование тромбоксана А (fXAj). Реакция образования ТХА прекращается при добавлении 500 мкл трис -буфера в эту смесь. Используя 50 мкл смесей, проводят количественное определение стабильного метаболита ТХА,, (тромбоксана Bj) с помощью радиоиммунного анализа (Шибоута и др. Biochem. Pharmaco. 1979, 28, 3601). Ингибирующая активность соединеНИИ в отношении TXAj - синтетазы определяется по разности накоплений TXBj в испытуемой и контрольной группах. Результаты для типичнь1х соединений показаны в табл. 8. ТаблицаВ