Способ получения производных гуанина в виде рацематов или @ ( @ ) изомеров Советский патент 1986 года по МПК C07D473/18 A61K31/522 A61P31/12 

Изобретение относится к способу получения новых биологически активных соединений - производных гуанина, обладающих антивирусной активностью, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - создание способа получения новых производных гуанина, oблaдaюlIЦ x более высокой антивирусной активностью и низкой токсичностью.

Пример 1. Получение 9-(2,4-диоксибутил)-гуанина,

40 мг 4-(2-амино-6-хлорпурин-9-ил)-метил-1,3-диоксана растворяют в 5 мл 1 м хлористоводородной кислоты и нагревают с обратным холодильником в течение 4 ч, Раствор подщелачивают разбавленной гидроокисью аммония и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде и очищают жидкостной хроматографией под давлением с применением смеси метанола с водой (1:3) в качестве элюента. Получают 14 мг белого кристаллического продукта с т.пл. 226-228 С (разложение).

УФ-спектр (0,01 моль/л хлористоводородной кислоты) Л ,g|(, , нм: 227, 254 ( 10700).

Пример 2. Получение R-(+)-9-(3,4-диоксибутил)-гуанина.

100 мг (0,33 моль) R (+)-4-(2-ами ю-6-хлорпурин-9-ил)-изопро1Г илиденбутан-1,2-днола растворяют в 1 1 м 1 М хлористоводородной кислоты и нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч. Раствор концентрируют в вакууме и остаток растворяют в 5 мл воды и подщелачивают водной гидроокисью аммония. Получаемый в результате упаривания твердый остаток перекристаллизовывают из воды. Получают 40 мг (51%) целевого продукта в виде белых иголок, с т.пл.262264°С.

УФ-спектр (0,01 моль/л хлористоводородной кислоты А „д , нм; 277, 253.

Wn + 30,8 (с 0,25; вода).

ПМР-спектр (, внутренний стандарт трет-бутанол, - 1(33 ч/млн; ч/млн: 1,75-2,15 (м, 2Н); 3,40-3,70 (м, ЗН); 4,15 (АВ , 2Н), 7,77 (с, 1-Н) .

Пример 3. Повторяют пример 2, однако в качестве исходного соединения используют 4-(2-амино-6-хлорпурин-9-ил)-изопропилиденбутан-1,2-диол. Получают 9-(3,4-диоксибутил)-гуанин, т. пл. 260-261°С (разл.). Выход 55% теоретического.

УФ-спектр (0,01 моль/л хлористоводородной кислоты) (кс - 277, 253 ( 11500).

Масс-спектр: 11,2 3 (внутр.): 239 (М, 0,13); 222 (0,19); 221(О,Ю; 152 (0,43); 151 (0,56)i 44 (1,0).

Проведены биологические испытания производных гуанина, полученных предлагаемым способом.

Опыт 1 .Мьппей весом 15 г заражают внутрибрюшннно 10 единицами пузырькового лишая типа 2„ Мьпдей подразделяют на две группы по 10 мышей в каждой. Через 1 ч после заражения мышам одной группы орально дают соединение примера 2 в дозе 15 мг/кг веса тела два раза в день в течение 10 дней. Зараженных мышей другой группы обрабатывают тем же образом с использованием известного соединения - 9-(2-оксиэтоксиметил)-гуанина в той же дозе.

По окончании опыта определяют смертность. Результаты опытов даны в табл. 1 .

Таблица 1

Изобретение касается производных гуанина, в частности соединений общей формулы I NH-C(0) / H2N-C N-C- N-CH -CHR,-CHR -CH20H, где R,Н при или R Н при R,OH, в виде рацематов или R(+) изомеров, которые как обладающие антивирусной активностью могут быть использованы в медицине. Для вьивления физиологической активности получены новые производные гуанина - соединения I. Синтез ведут кислым гидролизом соответствующего гуанина, в котором при N имеется другой радикал - Rg - метил- 1,3-диоксан; 1,2,0-изопропштиден-1,2-диоксибутан; R(+)-1,2,0-изопропилиден-1,2-диоксибутан; а при С -атоме находится галоид. Вьщеление ведут в виде рацемата или R(+) изомера. В сравнении с известным 9-

По примеру 2 10 10 20 20 Известное 10 20 40 40

30 70

30 70 По данным табл. 1 видно, что новые производные гуанина обладают лучшей антивирусной активностью по сравнению с известным производным гуанина, Опыт 2. С целью проявления антивирусной активности при наличии заражений пузьфьковым лишаем производные гуанина должны предварительно переводиться в соответствуюпше монофосфаты под действием тимидиново киназы пузьфькового лишая. Чувствительность производных гуанина к действию тимидиновой киназы пузырькового лишая типа 1 из клеток Веро, а также относительная скорость фосфорилирования определяют в соответствии с методом А.Ларосона. При этом чувствительность тем выше, чем ниже значение Kj . Результаты опыта сведены в табл.2

Таблица 2

Значение

ОтносительК;, микм ная скорость фосфорилирования, % 30 0,4 (км) Тимидин 19 1,5 Пример 1 Пример 3 Известное 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанин Данные табл. 2 свидетельствуют том, что новые производные проявл ют лучшую чувствительность к дей вию тимидиновой киназы (и тем са лучшую антивирусную активность), чем известное соединение. Кроме того, при использовании соединения примера 3 наблюдается лее высокая относительная скорост фосфорилирования, что важно в том случае, если можно ожидать соревнование с естественным тимидином во время переведения в монофосфат в зараженных клетках. О п BI т 3, Степень соревнования между тимидином и соединениями с антивирусной активностью определяют в зараженных пузьфьковым лишаем типа . I клетках согласно методу Ларссона, при котором определяют концентрацию производного гуанина, обеспечивающую 50%-ное торможение образования пятна лишая, в зависимости от концентрации добавляемого тимидина (концентрация КТ Результаты опыта сведены в табл.3. Таблица 3 100 микм тимидина Соотношение О микм тимидина предлагаемого соединения 6,1, а для известного соединения - 28. Данные табл. 3 свидетельствуют о том, что по мере повышения количестfea добавляемого тимидина антивирусная активность известного соединения снижается больше, чем антивирусная активность предлагаемого соединения. Результаты опыта 3 полностью подтверждают сделанное в опыте 2 заключение о зависимости степени антивирусной активности от наличия тимидина. Опыт 4. С целью определения токсичности известное соединение и новые производные гуанина согласно примерам 1-3 орально дают собакам. Результаты опыта даны в табл.4. Доза исследуемого соединения, мг/кг/день Примеры

Не давалось

Нет отрицательных эффектов Сравнение данных табл. А свидетельствует о том, что новые соединения не являются токсичными в дозах до 290 мг/кг, тогда как известное соединение уже в дозе 45 мг/кг вызывает нежелательный побочный эффект. Таким образом, производные гуанина, полученные предлагаемым способом HN H2N Nгде R, - водород при Rj - гидроксил RJ, - водород при R, - гидроксил в виде рацематов или R (+)изомеров, отличающийся тем, что соединение общей формулы tY ,

Таблица 4

Диаррея, потеря веса Не давалось

и Исследуемое соединение 1-3 Известное соединение малотоксичны в сравнении с 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанином и обладают более высокой антивирусной активностью. Формула изобретения Способ получения производных гуанина общей формулы CH-CHCH OH Rl R2 Д X - галоид; метил-1,3-диоксан 1,2,0-изопропилиден-1,2-диоксибутан; R (+)-1,2,0-изопропилиден-1,2-диоксибутан, подвергают гидролизу в кислой среде и целевой продукт выделяют в виде рацемата или R(t) изомера.