Способ получения лейкоцитарного альфа @ -гликопротеида Советский патент 1986 года по МПК C07K16/06 

.

Изобретение относится к медицине, а именно препаративной и технологической биохимии, и касается получения биологически активного белкового продукта, используемого как в иммунохимии, так и в практической медицине,

Цель изобретения - повышение выхода и чистоты целевого продукта путем адсорбции на каолине при опре деленных условиях, обработки катио- нитным сильноосновным сефадексом средней зернистости и осаждения сернокислым аммонием при определенном насыщении.

Способ осуществляют -следующим образом.

Гной, полученный при вскрытии -флегмы, подвергают троекратному замораживанию-оттаиванию, центрифуги- руют, осадок удаляют, надосадочцую жидкость инкубируют с влажнь1м каолином при перемешивании, каолин отмывают водой, насыщенным раствором двузамещенного карбоната натрия, .продукт элюируют 8-12%-ным карбона- тбм натрия, надосадочную жидкость диализуют, смешивают с влажным SP- сефадексом С-50, инкубируют при пе- .ремепшвании, отмывают дистиллиро- ванной водой и элюируют 2 М раствором хлористого натрия, к надосадоч- ной жидкости добавляют насьпценный раствор сернокислого аммония до 55- 60%-ного насыщения, осадок растворя- ют в дистиллированной воде, диализуют и лиофилизируют.

Пример 1. 500 МП гноя, полученного при вскрытии флегмон, подвергают троекратному замораживанию- оттаиванию, центрифугируют 30 мин при 8000 g, осадок удаляют, а надосадочную жидкость инкубируют с 500 мл влажного каолина в течение 20 мин на магнитной мешалке. Каолин с сор- бированными на нем белками триждь; отмывают дистиллированной водой в количестве 1,0 л, всякий раз удаляя воду при помощи центрифугирования, затем каолин отмывают 1,0 л насыщен- ного раствора двузамещенного гидрофосфата натрия, центрифугируют в течение 20 мин при 8000 g. Надосадочную жидкость удаляют, а каолин инкубируют с 500 мл 8%-ного раствора карбоната натрия s течение 20 мин, центрифугируют, надосадочную жидкост диализуют против дистиллированной

5

0 0 5

О 5

0

воды, полученную после диализа фракцию смешивают с 250 мл влажного SP- сефадекса С-50, инкубируют в течение 20 мин на магнитной мешалке, надоса- док удаляют центрифугированием, а сефадекс с сорбированными белками отмывают троекратно 1,0л дистиллированной воды, всякий раз удаляя над- осадок при помощи центрифугирования. К отмытому сефадексу добавляют 250 мл 2 М раствора хлористого натрия, инкубируют в течение 20 мин, центрифугируют при 8000 g, осадок удаляют. К надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония так, чтобы его концентрация составила 55%-ного насьш;ения, инкубируют 24 ч при 4с, центрифугируют в течение 30 мин при 8000 g, надосадочную жидкость удаляют, а осадок растворя- ют в 150 МП дистиллированной воды, диализуют против дистиллированной воды, лиофилизируют. в результате получают препарат лейкоцитарного альфа - гликопротеида с чистотой 70%, выход продукта составляет 25%.

Пример 2. 500 мл .гноя подвергают замораживанию-оттаиванию,обрабатывают каолином, каолин отмывают дистиллированной воДой и двузамещен- ным гидрофосфатом натрия, как описано в примере 1. Отмытый каолин инку-, бируют с 500 мл 12%-ного раствора карбоната натрия в течение 20 мин, . центрифугируют, надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды. Полученную после диализа фракцию смешивают с 250 мл влажного SP- сефадекса С-50, инкубируют в течение 20 мин на магнитной мешалке, надосадок удаляют центрифугированием, а сефадекс с сорбированными белками

отмывают троекратно 1,0 л дистиллированной воды, всякий раз удаляя над- осадок при помощи центрифугирования. К отмытому сефадексу добавляют 250 МП 2 М раствора хлористого натрия, инкубируют в течение 20 мин, центрифугируют при 8000 g, осадок удаляют. К надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония так, чтобы его концентрация составила 60%-ного насыщения. Дальнейшую обработку осуществляют, как описано в примере 1. В результате получают препарат лейкоцитарного апьфа -гликопротеида с чистотой 75%, выход продукта составляет 20%.

3 12473794

Пример 3. 500 мл гноя под-рат лейкоцитарного альфа -гликовергают замораживанию-оттаиванию,протеида с чистотой 70%, выход прообрабатывают каолином, каолин отмы-дукта составляет 20%. вают дистиллированной водой и двузамещенным гидрофосфатом натрия, как5 В сравнении со способом-прототиописано в примере 1. Отмытый каолинпом, который являетсй единственным

инкубируют с 500 мл 10%-ного раство-способом выделения лейкоцитарного

ра карбоната натрия в течение 20 мин,альфа -гликопротеида, предлагаемый

центрифугируют, надосадочную жид-способ позволяет повысить выход прокость диализуют против дистиллиро-10 дукта (в 2-3 раза), а также чистоту

ванной воды. Дальнейшие манипуляциипродукта (по способу-прототипу выход

осуществляют, как описано в приме-не превышает 10%, а чистота не прере 1. В результате получают препа-вьш1ает 15-20%) .