1-ФЕНИЛ-3-АЛКИЛ-5-(O-ОКСИФЕНИЛ)-1,2,4-ТРИАЗОЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ТРАНКВИЛИЗИРУЮЩИМ И АНТИГИПОКСИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, И 1-ФЕНИЛ-3-Н-БУТИЛ-5-(О-ОКСИФЕНИЛ)-1,2,4-ТРИАЗОЛ, ОБЛАДАЮЩИЙ ТРАНКВИЛИЗИРУЮЩИМ, АНТИГИПОКСИЧЕСКИМ И АНАЛЬГЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Советский патент 1996 года по МПК C07D249/08 A61K31/41 

Предлагаются новые соединения 1-фенил-3-алкил-5-(0-оксифенил)-1,2,4-триаз- ол общей формулы
где R пропил (Ia), или н-бутил (Iб)-, обладающие транквилизирующей и антигипоксической активностью.

Кроме того, соединение Iб обладает анальгетической активностью.

Целью изобретения являются новые биологически активные вещества, обладающие иным спектром действия, чем структурные аналоги.

П р и м е р 1. 1-Фенил-3-пропил-5-(0-оксифенил)-1,2,4-триазол (Ia).

К суспензии 2,8 г (0,01 моль) перхлората 2-пропил-4-оксо-1,3-бензоксазиния в 10 мл ледяной уксусной кислоты прибавляют 2 мл (0,02 моль) фенилгидразина. Смесь кипятят 3 мин. Выделившийся при охлаждении осадок отфильтровывают, промывают три раза водой и получают 2,3 г (82%) светло-кремовых кристаллов, т.пл. 56-57^оС (из водного пропанола).

Найдено, 73,2; H 6,1; N 15,2.

C₁₇H₁₇N₃O
Вычислено, C 73,1; H 6,1; N 15,1.

ИК-спектр: 1620 ср. 1600 пл. 1590 с. 1518 о.с. 1270 о.с. 1160 см^-1.

П р и м е р 2. 1-Фенил-3-бутил-5-(0-оксофенил)-1,2,4-триазол (Iб).

К суспензии 3,03 г (0,001 моль) перхлората 2-бутил-4-оксо-1,3-бензоксазиния в 8 мл ледяной уксусной кислоты прибавляют 2 мл (0,02 моль) фенилгидразина. Смесь кипятят 2 мин, охлаждают, добавляют трехкратный избыток воды и нейтрализуют Na₂CO₃ до рН 6. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают три раза водой и получают 2,2 г (75%) светло-кремовых кристаллов, т.пл. 42-43^оС (из водного пропанола).

Найдено, C 73,6; H 6,6; N 14,3
C₁₈H₁₉N₃O
Вычислено, C 73,7; H 6,5; N 14,3
ИК-спектр: 1618 ср. 1585 пл. 1580 с. 1505 о.с. 1260 о.с. 1155 см^-1.

Спектр ПМР триазола Ia в CДCl₃ записан на приборе Tesla BS-467 при 20^оС с ГМДС в качестве внутреннего стандарта: 1,0 (триплет, 3Н, СН₃); 1,85 (секстет, 2Н, -СН₂-СН₂-СH₃); 2,75 (триплет, -СН₂-СН₂-СН₃)_; 6,40-7,80 (мультиплет, 9Н, ароматические протоны); 12,1 м.д. (синглет, 1Н, ОН).

Наличие фенольных протонов в соединениях Ia и Iб подтверждается также положительной качественной реакцией со спиртовым раствором хлорного железа (фиолетовое окрашивание).

Молекулярная масса:
Ia: найдено 286 (криоскопически в бензоле); вычислено 279;
Iб: найдено 300 (криоскопически в бензоле); вычислено 293.

Хроматографическая подвижность:
ТСХ Ia: R_f в бензоле 0,74 (Silufol UV 254), 0,61 (Al₂O₃);
ТСХ Iб R_f в бензоле 0,80 (Silufol UV 254); 0,67 (Al₂O₃).

Триазолы Ia и Iб хорошо растворимы в хлороформе, этиловом, пропиловом спиртах, ацетонитриле, толуоле, бензоле, уксусной кислоте, мало растворимы в воде, петролейном эфире, гептане, пентане и других углеводородных растворителях.

М е т о д и с п ы т а н и й. О транквилизирующей активности испытуемых соединений судят по их влиянию на пороги эмоционального реагирования, используя методику электроболевого раздражения, по влиянию на поведение крыс в условиях конфликтной ситуации, а также по антагонизму с коразолом.

Опыты проводят на половозрелых нелинейных крысах-самцах весом 200-250 г. Испытуемые соединения вводят внутрь на рафинированном подсолнечном масле в дозах 20, 50, 70 и 100 кг/кг. В качестве эталонного препарата применяют широко используемый в клинической практике транквилизатор диазепам в дозе 5 мг/кг.

Пороги эмоционального реагирования изучали по изменению порогов писка, которые определяли при раздражении крыс постоянным импульсным электротоком частотой 100 Гц, подаваемым от электростимулятора ИСЭ-01 на электродный пол. Порог эмоционального реагирования оценивали по минимальному напряжению, вызывающему писк.

Оценку влияния веществ на поведение животных в условиях конфликтной ситуации проводили с помощью установки с автоматической регистрацией поведения крыс для экспериментальной оценки действия транквилизаторов. Эксперимент начинали с тренировки создания у крыс чувства жажды и навыка взятия воды из поилки в камере.

Животных содержат на сухом корме в течение 48 ч, затем в одно и то же время суток на протяжении 3 дней крыс помещают в камеру, где они получают воду из поилки в течение 10 мин. В день опыта через 5 с поcле начала питья крысе наносят электрическое раздражение пропусканием тока (80 В) через поилку. Таким образом, конфликтная ситуация создается столкновением питьевого и оборонительного рефлексов. Фармакологический эффект испытуемых соединений оценивают по их влиянию на количество взятой воды, несмотря на получение электроболевого раздражения (см. табл. 1).

Антагонизм с коразолом оценивают по способностям испытуемых веществ предупреждать тонико-клонический компонент судорожного припадка, вызванного коразолом. Коразол вводят внутрибрюшинно в дозе 120 мг/кг, которая вызывает судороги и летальный исход у 95% животных. Свойства испытуемых веществ препятствовать развитию эффекта коразола оценивают также по их способности защищать животных от гибели и увеличивать среднюю продолжительность жизни по сравнению с контролем (см. табл. 2).

О противогипоксическом действии исследуемых соединений судят по их влиянию на среднюю продолжительность жизни мышей в условиях гермокамеры.

Испытуемые соединения вводили внутрь на рафинированном подсолнечном масле в дозах 25, 50 и 100 мг/кг. Через 1 ч после введения вещества каждую мышь по одиночке помещают в герметически закрывающиеся стеклянные банки емкостью 0,5 л Для устранения гиперкапнии используют 20%-ный раствор едкого натра. О моменте гибели животных судят по остановке дыхания.

По влиянию на среднюю продолжительность жизни исследуемые соединения сравнивают с активностью широко используемого в медицинской практике оксибутирата натрия, который вводят в дозе 200 мг/мг внутрибрюшинно.

Об анальгетической активности испытуемого соединения Iб судят по его влиянию на болевую чувствительность у крыс.

Опыты проводят на белых нелинейных крысах-самках массой 170-200 г. Оценку влияния вещества на болевую чувствительность проводили по тесту "отдергивания хвоста". Для этого животных адаптируют к специальным плексигласовым домикам в течение 1 ч. Процедура измерения болевой чувствительности состоит в погружении хвоста крысы в воду с температурой 55±0,5^оС и регистрации времени с момента погружения до его отдергивания из воды вследствие непереносимости боли. Хвост погружают в воду на величину 5 см от дистального отдела и после проведения каждого замера аккуратно высушивают.

Испытуемое соединение вводят в дозах 25, 50 и 100 мг/кг внутрибрюшинно на растворе диметилсульфоксида. Регистрацию болевой чувствительности проводят до введения вещества и через 15, 30, 40, 60, 90, 120, 150 и 180 мин после введения. Анальгетическая активность соединения Iб cравнивалась с анальгетической активностью анальгина (см. табл. 2).

Экспериментальные данные обрабатывали статистически, вычисляли матожидание (М), стандартные ошибки (М±m). Для оценки достоверности различия между средними величинами используют критерий Стъюдента. Различия между фоном и опытом считают достоверными при уровне вероятности (Р) не менее 0,05.

Результаты испытаний соединений Iа и Iб в дозах 20 и 100 мг/кг соответственно показывают статистически достоверно понижение эмоциональной реактивности животных, о чем свидетельствует повышение порогов электротока, вызывающего эмоционально-выразительную реакцию (писк). Наибольший эффект обнаружен у вещества Ia, которое в дозе 20 мг/кг увеличивает порог писка по сравнению с контрольной группой интактных животных на 89% хотя и уступает соответствующей активности диазепама (см. табл. 1).

Вещества Ia и Iб обладают антиконфликтным действием, которое выражается в увеличении числа наказуемых взятий воды (см. табл. 2). Положительные результаты данного теста свидетельствуют о растормаживающем действии веществ, внешним выражением которого является активация поведения крыс, направленного на удовлетворение важной биологической потребности. Наибольшей активностью по данному тесту обладает соединение Iб.

Испытуемые соединения обладают выраженной антикоразоловой активностью (см. табл. 3), которая проявляется в защите животных от гибели, а также в значительном увеличении средней продолжительности жизни по сравнению с контролем. Наибольшей антикоразоловой активностью обладает соединение Iб, которое в дозе 100 мг/кг защищает от гибели 100% животных.

Положительные результаты по данному тесту подтверждают транквилизирующую активность веществ Ia и Iб. Испытуемые соединения в широком диапазоне доз не вызывают мышечной релаксации (см. табл. 3), в то время как диазепам уже в дозе 5 мг/кг приводит к значительному снижению мышечного тонуса.

О наличии миорелаксирующего действия судят по тесту "боковое положение", который используется для характеристики нарушений, связанных с развитием миорелаксации. Критерием эффекта служит утрата животными рефлекса переворачивания на лапы из положения на спине на протяжении 2 мин. Опыты проведены на крысах. Соединения вводят внутрибрюшинно в растворе ДМСО в дозах 20, 100 и 500 мг/кг. В качестве эталона используют диазепам в дозах 5, 20, 50 и 100 мг/кг. Опыты показывают, что соединения Ia-Iб во всех испытанных дозах не вызывают утраты рефлекса, тогда как диазепам нарушает его в дозе 50 мг/кг у 50% животных.

Таким образом, вещества Ia-Iб в широком диапазоне доз, в том числе и в сублетальных дозах, не вызывают миорелаксации.

Соединения Ia и Iб в дозе 100 мг/кг статистически достоверно увеличивают среднюю продолжительность жизни животных, что свидетельствует о наличии у этих веществ противогипоксической активности. Как показано в табл. 4, наибольшей активностью обладает вещество Iб, которое практически не отличается по выраженности фармакологического эффекта от оксибутирата натрия. Однако, если учесть, что соединение Iб обладает противогипоксической активностью в дозе 100 мг/кг при пероральном введении, в то время как оксибутират натрия обнаруживает аналогичный по выраженности эффект в дозе 200 мг/кг при внутрибрюшинном введении, можно заключить, что вещество Iб в условиях гермокамеры относительно более активный антигипоксант, чем оксибутират натрия.

Соединение Iб в дозе 100 мг/кг вызывает статистически достоверное ослабление болевой чувствительности, увеличивая латентный (скрытый) период болевой реакции (см. табл. 5). Анальгетическое действие вещества Iб проявляется через 30 мин после введения и сохраняется на протяжении 120 мин. По анальгетическому действию соединение Iб сравнивают с анальгином.

Выбор анальгина в качестве стандартного препарата обусловлен следующими обстоятельствами. Анальгин не является наркотическим анальгетиком, как и соединение Iб. Являясь производным пиразолона, анальгин обладает некоторым структурным родством с соединением Iб. Анальгин является малотоксичным широко распространенным анальгетиком. Длительность его анальгетического действия составляет 3-4 ч.

Анальгин испытывают в дозах 100 и 1000 мг/кг при внутрибрюшинном введении по тесту "отдергивания хвоста". Методика проведения эксперимента приведена в описании изобретения. Результаты экспериментов представлены в табл. 5. Как следует из полученных данных, анальгин в дозе 100 мг/кг не обладает анальгетической активностью. В дозе 1000 мг/кг он оказывает отчетливое анальгетическое действие, увеличивая время отдергивания хвоста на 23-42% по сравнению с исходным состоянием.

Соединение Iб, как показано в табл. 5, в дозе 100 мг/кг не уступает анальгину по длительности действия. Кроме того, максимум действия Iб развивается уже через 30 мин после введения, тогда как пик эффекта анальгина приходится на 90-ю мин.

Таким образом, соединение Iб не уступает анальгину по длительности действия и оказывает более выраженный обезболивающий эффект в первые 60 мин с момента введения. Соединение Iб приблизительно в 10 раз активнее анальгина, так как проявляет сходный по величине и длительности эффект в дозе, в 10 раз меньшей, чем анальгин.

Токсикологические исследования показали, что соединения Iа и Iб обладают относительно низкой острой токсичностью. При введении внутрь мышам и крысам испытуемые соединения не вызывают смертельных эффектов в дозах 2000 мг/кг и более, в связи с чем средние смертельные дозы для этого пути введения не устанавливают. Минимальные токсические эффекты соединений наблюдают при введении этих веществ в дозах 1500-2000 мг/кг. Средняя смертельная доза испытуемых соединений при внутрибрюшинном введении крысам в растворе диметилсульфоксида находится в диапазоне 700-800 кг/кг.

Таким образом, соединения Iа и Iб обладают транквилизирующим действием, приближающимся к действию одного из наиболее эффективных транквилизаторов диазепама, в два раза менее токсичны этого препарата и лишены такого нежелательного побочного эффекта диазепама, как миорелаксация. Транквилизирующая активность соединения Iб сочетается с анальгетическим эффектом.

Соединения Ia-Iб обладают противогипоксическим действием, которое практически не уступает действию оксибутирата натрия. Соединение Iб относительно активнее оксибутирата натрия в условиях гермокамеры, поскольку его противогипоксический эффект в дозе 100 мг/кг при введении внутрь не отличается от эффекта оксибутирата натрия при внутрибрюшинном введении в дозе 200 мг/кг.

Кроме того, противогипоксическое действие соединения Iб cочетается с обезболивающим эффектом.

Соединение Iб обладает анальгетическим эффектом, который по выраженности не уступает аналогичному эффекту анальгина, но достигается в более короткий срок и в меньшей дозе.

1. 1-Фенил-3-алкил-5-(О-оксифенил)-1,2,4-триазолы общей формулы

где R - пропил (1а) или н-бутил (1б), обладающие транквилизирующим и антигипоксическим действием.

2. 1-Фенил-3-н-бутил-5-(О-оксифенил)-1,2,4-триазол (1б), обладающий транквилизирующим, антигипоксическим и анальгетическим действием.

1. 1-Фенил-3-алкил-5-(О-оксифенил)-1,2,4-триазолы общей формулы

где R пропил (1а) или н-бутил (1б), обладающие транквилизирующим и антигипоксическим действием. 2. 1-Фенил-3-н-бутил-5-(О-оксифенил)-1,2,4-триазол (1б), обладающий транквилизирующим, антигипоксическим и анальгетическим действием.