Способ выделения наружной и внутренней мембран возбудителя чумы Советский патент 1990 года по МПК C12N1/00 

Описание патента на изобретение SU1292320A1

Изобретение относится к области биотехнологии и касается выделения наружной и внутренней мембран гран- отрицательных микроорганизмов.

Целью изобретения является првы- гаение выхода целевого продукта и ускорение способа за счет модификации этапа вьщеления.

Пример. Клетки чумного микроба (штамм EV) выращивают в системе непрерывного культивирования в бульоне Хоттингера, рН 7,2 при 28 С и до середины логарифмической фазы развития и биомассу собирают центрифугированием в течение 15- 20 мин при 5000-6000 g. Клетки отмывают буфером (0,01 М трис-НС1, рН 7,2; 0,02 М MgCx 0,03 М 2-меркапто- зтанол) и оставляют в осадке при минус до использования.

Замороженные ucaAKrf (8-10 г бактериальной массы) суспендируют в 30 мл трис-НС1-буфера, рН 8,0, содержащего 20% сахарозы, добавляют РНКазу и ДНКазу (2 мг на 1 г клеток) , инкубируют 30 мин при А°С и дважды пропускают через Х-пресс (давление 16 т) в замороженном состоянии.

Обломки клеток и неразрушенные клетки удаляют центрифугированием при 1300-1400 g в течение 10 мин. Клеточные оболочки (общая фракция мембран) выделяют центрифугированием супернатанта при 120000 g (ротор SW-27, .ультрацентрифуга L ) в течение 1 ч в ступенчатом градиенте .сахарозы, содержащем 9 мл 70%-ной саРедактор А.Купряков

Заказ А362

Составитель, И.Красильников

Техред Л. 0л ейник Коррек Тор I Решетник

Тираж 490 . ВНИИПИ ГоЬударственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

5

0

5

0

харозы (п/объем) и 23,5 мл 20%-ной сахарозы (в/объем). Плотный оранжевый слой, расположенный в центр : пробирки, отсасывают с помощью шприца и используют для дальнейшего фракционирования.

Выделенную фракцию оболочек или суммарных мембран (наружные и цито- плазматические) промывают 0,01Мтрис- -НС1-буфером, рН 8,0, содержащим . 0,01 М дитиотреитола и 5 10 М Mg , и наслаивают на верх линейного сахарозного градиента (70-45%) (общий белок 200 мг). Градиенты приводят в равновесие за 6 ч на ультрацентрифуге L 5-65, используя ротор SW-27 и ускорение 120000 g. За это время материал отчетливо распределяется в два кольца. Оранжевый слой и серо-. вато-бельй на 0,5 см ниже первого, которые представляют собой материал внутренних и наружных мембран. Проводят измерение оптической плотности при 280 нм на Uvicord II после раскапывания (по 10-12 капель), полученных последовательно фракций градиента, которые в дальнейшем собирают и отмывают в трис-НС1-буфере, рН 8,0, содержащем и 0,01 М дитиотреитола . Выделенные чистые препараты наружных и внутренних мембран хранят при минус .

Способ позволяет в 3 раза по срав- 35.нению с прототипом ускорить процесс пьлучения мембранньт фракций с высо-- кой степенью чистоты и увеличить вы- ход конечного продукта в 4 раза.

Подписное

Похожие патенты SU1292320A1

название год авторы номер документа
Способ получения вакцин против лейкоза крупного рогатого скота 1977
  • Кукайн Р.А.
  • Нагаева Л.И.
  • Шишков В.П.
  • Иткин Б.З.
  • Чапенко С.В.
  • Брацславская О.И.
  • Ильинская Т.Н.
  • Куделева Г.В.
  • Лагановский С.Я.
  • Нымм Э.М.
  • Симоварт Ю.А.
  • Кумков В.Т.
  • Крикун В.А.
  • Петровский Г.С.
  • Шиков А.Т.
SU820015A1
Способ получения синтетической двунитчатой РНК, обладающей интерферониндуцирующей активностью 1979
  • Хирофуми Аримура
  • Масанори Нагаи
  • Такеси Ямаути
  • Цутому Китагава
  • Тадаказу Суяма
SU933001A3
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО ДИАГНОСТИКУМА 2010
  • Симакова Диана Игоревна
  • Ларионова Людмила Владимировна
  • Карбышев Гериард Львович
  • Терентьев Александр Николаевич
  • Лысова Людмила Константиновна
RU2430376C1
Способ получения полипептида, обладающего активностью фактора некроза опухоли человека 1987
  • Мосааки Ямада
  • Ясуджи Фурутани
  • Мицие Нотаке
  • Юнити Ямагиси
SU1739855A3
Способ получения рекомбинантной плазмидной ДНК pHTN 713, кодирующей фактор некроза опухоли человека 1985
  • Масааки Ямада
  • Ясуджи Фурутани
  • Мицие Нотаке
  • Юнити Ямагиси
SU1614765A3
СПОСОБ ОЧИСТКИ ВИРУСОВ ПУТЕМ УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ В ГРАДИЕНТЕ КОНЦЕНТРАЦИИ САХАРА (ВАРИАНТЫ) 2008
  • Райтер Манфред
  • Грилльбергер Леопольд
  • Мундт Вольфганг
  • Миттерер Артур
  • Шафхаузер Хорст
RU2503719C2
Способ получения ридулозодифосфаткарбоксилазы-оксигеназы 1977
  • Доман Николай Герасимович
  • Сеитова Тыныштык Аппасовна
  • Русинова Нелли Георгиевна
SU691461A1
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА PET32a-TNF-Thy, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО БЕЛКА α-ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ - ТИМОЗИН АЛЬФА 1, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)/PET32A-THF-Thy - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy 2022
  • Чумбуридзе Георгий Георгиевич
RU2787531C1
СПОСОБЫ ОЧИСТКИ АДЕНОАССОЦИИРОВАННЫХ ВИРУСОВ 2017
  • Фидлер, Кристиан
  • Гриллбергер, Леопольд
  • Хасслахер, Майнхард
  • Краус, Барбара
  • Миттерграднеггер, Доминик
  • Ройбергер, Штефан
  • Шафхаузер, Хорст
  • Бендик, Мариан
RU2773406C2
Способ иммуноферментного определения антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота 1989
  • Дикинене Нийоле Пятро
  • Адомайтене Даля Юозо
  • Микалаускене Гене Юозо
  • Велецкайте Аста Эдуардо
SU1631434A1

Реферат патента 1990 года Способ выделения наружной и внутренней мембран возбудителя чумы

Формула изобретения SU 1 292 320 A1

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1990 года SU1292320A1

Hurbert R.E
et al I.Bacteriol
Колосниковая решетка с чередующимися неподвижными и движущимися возвратно-поступательно колосниками 1917
  • Р.К. Каблиц
SU1984A1
Счетный сектор 1919
  • Ривош О.А.
SU107A1
Darvean R.P
et al I.Bacteriol, 1980, 143, 2, p
СПОСОБ ЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ШТИФТОВОЙ СВАРКИ ЗАКРЫТОЙ ВОЛЬТОВОЙ ДУГОЙ 1924
  • Дульчевский Д.А.
SU942A1

SU 1 292 320 A1

Авторы

Коробейник Н.В.

Абрамова Л.А.

Цивин В.С.

Даты

1990-10-15Публикация

1984-11-20Подача