Способ определения активности тимозина Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биологиТй, медицине, медицинской промышленности и может быть использовано для определения активности тимозина - гормона, выделяемого из вилочковой железы, широко применяемого в экспери- ментальньпс исследованиях и клинике для лечения больных с иммунодефици- тами различной этиологии.

Цель изобретения - повышение точности определения активности тимо- .зина.

Пример. Лимфоциты вьщеля- ioT из гепаринизированной крови в градиенте фиколла и верографина. Полученную взвесь лимфоцитов дважды отмьгоают средой 199 по 10 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отбирают, осадок помещают в 1 мл среды 1-99 и считают количество выделенных лимфоцитов. Взвесь лимфоцитов доводят.до конечной концентрации 10 в 1 мл средой 199. Для одного определения берут 0,1 мл указанной клеточной взвеси. Клетки инкубируют 1 ч при 37°С с различными концентрациями тимозина, добавляемого в пробирки в объеме 0,1 мл. Контролем служат-лимфоциты, инкубируемые при 37°С в течение I ч с тем же объемом питательной среды. После инкубации с тимозином клетки дважды отмывают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин. К 0,1 мл взвеси проинкубированных с тимозином лимфоцитов (10 клеток) добавляют О,1 мл суспензии трижды отмытых физиологическим раствором эритроцитов мьши (2.10 клеток). Смесь клеток центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин и инкубируют 30 мин при 37 С. Затем к осадку доРедактор В. Ковтун Заказ 381/50

Составитель И. Башкаев Техред А.Кравчук

Тираж 777 ВНРШПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0

5

бавляют по 0,1 мл 0,6%-ного раствора глютаральдегида, осторожно ресуспен- дируют осадок и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают,, к осадку добавляют 0,1 мл дистиплированной воды, ресус- пендируют смесь, готовят капли на предметном стекле. Высохшие капли фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Подсчет произво- ,дится при увеличении 7x90. Розеткой считают образование из лимфоцита, инкубированного с минимальной дозой тимозина и трегх и более присоединившихся к нему эритроцитов. Подсчет розеток производится на 200 лимфоцитов и выражается в процентах. Например, после инкубации лимфоцитов в среде бьшо зарегистрировано 4% Ем-РОК, а .после инкубации лимфоцитов с тимозином в концентрациях 60 и 30 мкг/мл соответственно 8 и 4%, активность тимозина равна 60 мкг/мл, что более чем ,на 30% повьппает точность способа по сравнению с прототипом, возможность определения которого равна 125 мкг/мл.

0

5

Формула изобретения

Способ определения активности тимозина, включающий вьщеление лимфоцитов человека, инкубацию лимфоцитов с тимозином в различных концентрациях и добавление эритроцитов с последующим определением активности тимозина по числу розеткообразующих клеток при минимальной концентрации тимозина, отличающийся тем,

что, с целью повьшгения точности способа, выделение лимфоцитов осуществляют из периферической крови и после инкубации их с тимозином добавляют эритроциты мыши.

Корректор Л. Пилипенко Подписное

Изобретение повышает точность определения активности тимозина. Лимфоциты выделяют из гепаринизирован- ной крови в градиенте фиколла и веро- графина, отмьшают средой 199, взвесь лимфоцитов доводят до концентрации 10 в 1 мл средой 199. Клеточную взвесь инкубируют 1 ч при 37 С с различными концентрациями тимозина, добавляют эритроциты мьши (2.10 клеток ), центрифугируют и инкубируют 30 мин при 37 С. К осадку добавляют 0,6% раствор глутаральдегида, готовят капли на предметном , фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Активность тимозина определяют по числу розеткооб- разующих клеток при минимальной концентрации тимозина. ffi к о со сд о: