Способ количественного определенияАКТиВНОСТи ТиМОзиНА Советский патент 1981 года по МПК G01N33/54 

телыюй среды, прогревают перед инкубаш ой с тимрзином при 44,5-45, в течение 55-65 мин, а активность тимозина определяют по минимальному его количеству, увеличивающему число po-i.авткообраэукмцих клеток на 5О-100%. Аа фиг, I изображена активность тнмозш1а определяемая настоящим спосо- бом; на фиг. 2 - активность тимозива. определя ая известным способом. Способ осуществляется следувэщим . Получают лимфоциты морской свинки и эритроциты кролика. Прогревают лимфо циты тимуса морской свинки, что приводит к утрате ими способности образовывать спонтанные розетки с эритроцитами кролика. Восстанавливают розеткообразукшую спосо ость лимфоцитов путем инкубации их с различными количест вами тимозина. Инкубируют лимфоциты с эритроцитами кролика и определяют число образовавшихся розеток. Пример. Морская свинка весом 20О.-ЗОО г подвергается шмэктомии по этаминал- натриевым «аркозом . Вьшеленный тимус помещают в среду 199 или раствор Хэнкса, измельчают препаровальными иглами, фильтруют через нейлоновый фильтр. Полученную взвесь лимфоцитов тимуса доводят до конечной концентрации Ю° жизнеспособных клеток в 1 мл цитател&ной среды. Для одного определения берут I мл указанной Клетбчной взвеси. Затем лимфоциты выдерживают 1ч при 45°С, дважды отмывшот питательной средой путем центр фугирования при 1ООО об/мин в тече. ние 5 мин. Отмытые клетки инкубируют I ч 1ФИ с различными количествами тимозина. Контролем служат прогретые лимфоциты, инкубируемые при 37 С I ч с Ш1Татещ ной средой. Затем лизмфоциты дважды отмывают от тимозина сре дой центрифуткфсванием при lOOO об/ми в течение 5 мин добавляют к ним ЗОЮ итроцитов кролика, выдерживают I ч при 37 С, центрифугируют при ЮОи об/мин 5 мин и оставляют на ночь при 4°С. На следукяцкй день клетки, осторожно ресуспендщ ук)т шшеткой Пастера и подсчитывают числорозеткообразующих лимфоцитов под микроскопом в камере Горяева. Розеткой считают образование из лимфоцита трех или более присоединившихся к нему эритроцитов. Об активности тимозина судят по минимальному его количеству, вызывающему увеличение числа. Данные об активности тимозина, полученные настоящим способом, корре- лируют с данными, полученными известным способо:м (фиг. I и 2). Предлагаемый способ позволяет ускорить и упростить определение активности тимозина. Способ доступен для широкого использования в лабораторной практике. Лимфоцитов, выделенных из тимуса одной лишь морской свинки, стоимость которой 3 руб. 40 коп., достаточно для проведения одновременно 80-90 анализов. Формула изобретения Способ количественного определения активности тимозина путем инкубации лимфоцитов в присутствии тимозина с последующим отделением взвеси лимфоцитов, повторной инкубацией их с эритроцитами другого организма и подсчетом числа розеткообразующих клеток, о т. л и ч а ющ и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, используют лимфоциты тимуса морской свинки и эритроциты кролика, при этом взвесь лимфоцитов. 2 IО клеток в I -мл включающую питательной среды, прогревают перед инкубацией с химозином при 44,5-45, течение 55-65 мин, а активность тимозина определяют по минимальному его количеству, увеличивающему число розеткообразуюших клеток на 50-100%. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Bacb.J.F.,Dardenne М.,Antigen ecognUion by T-LymphoGyles. iiect$ oi Azalhiopvine, ALSand Antiiheta on Rosette Forming phocytes in Normal and Меопо аЙу Thymeclomi7.ed Mice.-СеВЙ ЗттипоЙ. № 3. II. 1972.

62.5 125 ZSQ

Количества тимозина 8мкг /м

то Фиг.

ТО

о

60

««ь

I

501Л.

I

30

§

|Z( I

I ю

W5 W

Количеств ти юзииа 8 MHZ/мм Фиъ.2