N-(2-N-МОРФОЛИНОЭТИЛ)АМИД 1,2,4-ТРИАЗИНО [5,6-B] ИНДОЛИЛ-3-ТИОГЛИКОЛЕВОЙ КИСЛОТЫ, ПОВЫШАЮЩИЙ ФИЗИЧЕСКУЮ РАБОТОСПОСОБНОСТЬ В УСЛОВИЯХ ГИПОКСИИ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/04 A61K31/535 

Изобретение относится к новому химическому соединению - N-(2-N-морфолиноэтил)амиду 1,2,4-триазино[5,6-b]индолил-3-тиогликолевой кислоты формулы I

повышающему физическую работоспособность в условиях гипоксии.

Целью изобретения является новое биологически активное вещество, обладающее повышенной активностью по сравнению со структурным аналогом.

П р и м е р. Смешивают 14 г (48,5 ммоль) этилового эфира 1,2,4-триазино[5,4-b] индолил-3-тиогликолевой кислоты, 24,5 мл (181,5 ммоль) 2-морфолиноэтиламина и 50 мл н-пропилового спирта и при перемешивании нагревают на глицериновой бане (температура бани 100^oС) 1 ч. После остывания для более полного осаждения прибавляют 150 мл эфира, фильтруют, промывают пропиловым спиртом (2 х 30 мл), эфиром (2 х 30 мл) и сушат при 110^oС. Получают N-(2-N-морфолиноэтил)амид 1,2,4-триазино[5,4-b]индолил-3-тиогликолевой кислоты в виде мелких желтых кристаллов, выход 18 г (99,4%).

17,5 г вещества очищают перекристаллизацией из 200 мл бутилового спирта с добавлением 0,4 г активного угля. Выпавший осадок фильтруют, промывают бутиловым спиртом (2 х 30 мл), эфиром (2 х 30 мл) и сушат при 110^oС. Получают 14,5 г (83%) очищенного вещества, зеленовато-желтый кристаллический порошок, т.пл. 208-208,5^oС.

Вещество не растворяется в воде, но растворяется в 0,1 н HCl (1 г в 25 мл). При добавлении к раствору трис-амина до рН 3,5-4,5 вещество остается в растворе. Такие водные растворы используют для биологических испытаний. На холоду трудно растворяется в обычных органических растворителях, растворяется в диметилсульфоксиде (7%), при нагревании легко растворяется в этиловом, изопропиловом и н-пропиловом спиртах.

Вещество однородно по данным ТСХ, тонкослойной хроматографии. Условия ТСХ: адсорбент силуфол, растворитель для нанесения диметилформамид (сушат при 110^oС 5 мин), подвижный растворитель метиловый спирт 3 н. водный аммиак, 10: 1 по объему. При просматривании в УФ-свете на пластинке обнаруживается единственное темно-синее пятно с Rf 0,59.

Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, а также ПМР- и УФ-спектров.

Найдено, C 54,79, 54,98; H 5,58, 5,54; N 22,51, 22,67; S 8,76, 8,48.

C₁₇H₂₀N₆O₂S.

Вычислено, C 54,82; H 5,51; N 22,56; S 8,61.

УФ-спектр в спирте, λ_макс, нм lg ε: 265 (4,568), 343 (4,104). Спектр снят на приборе СФ-20. Положение полос поглощения характерно для 3-S-алкильных производных 1,2,4-триазино[5,6-b]индола.

Спектр ПМР в ДМСО-d⁶, 7,2% 60 МГц, t, м.д. Ar-H 1,73-2,79 (м. 4Н), NHCO 6,03 (c. 1H), CH₂O, CH₂S 6,49-6,95 (м. 6Н), CH₂N 49-7,81 (м. 8Н).

Ниже приведены результаты исследования биологической активности и токсичности соединения I и данные, характеризующие его структурный аналог - N-(2-N-пиперидиноэтил)амид 1,2,4-триазино[5,6-b]индолил-3-тиогликолевой кислоты (соединение формулы II) (табл. 1 и 2).

Влияние соединений I и II на физическую выносливость в условиях гипоксии.

Исследование биологической активности соединения I проводили на самцах беспородных белых мышей массой 20-25 г.

Вещество растворяли в 0,1 н. HCl, рН доводили трис-амином до 5,0. Использовали 1%-ный раствор исследуемого соединения. Препарат вводили внутрибрюшинно в дозе 80 мг/кг за 1 ч до предъявления нагрузки. Контрольным животным вводили 0,1 н. раствор HCl, также оттитрованный трис-амином до рН 5,0.

Физическую нагрузку в условиях гипоксии моделировали плаванием с грузом, равным 4% от массы тела, при температуре воды 26^oС. Гипоксию создавали динамической подачей в замкнутое пространство (бассейн) смеси 95% азота и 5% кислорода (по объему).

Исследуемое соединение существенно повышает длительность плавания подопытных животных по сравнению с контролем (табл.1). Известно вещество, повышающее физическую выносливость в условиях гипоксии, являющееся химическим аналогом соединения I это N-(2-N-пиперидиноэтил)амид 1,2,4-триазино[5,6-b] индолил-3-тиогликолевой кислоты (соединение II). Сопоставление биологического эффекта соединений II и I выявило преимущество последнего.

Определение токсичности.

Определение токсичности соединения I проводили на взрослых самцах беспородных белых мышей массой 20-25 г. Препарат вводили внутрибрюшинно однократно, применяли 1%-ный раствор, который готовили в 0,1 н. HCl, затем рН доводили трис-амином до 5,0.

Наблюдения за 78 животными проводили в течение 14 дней. Среднесмертельная доза составила 820 мг/кг.

Таким образом, установлено, что соединение I при однократном предварительном введении существенно увеличивает в эксперименте длительность выполнения "работы" в условиях недостатка кислорода (на 37%) и в этом отношении проявляет большую активность, чем аналог II (увеличивает на 29%).

Соединение I имеет по сравнению с аналогом меньшую токсичность, его ЛД₅₀ составляет 820 мг/кг, а соединения II 250 мг/кг.

Изобретение касается замещенных триазино[5,6-b]индолила, в частности N-(2-N-морфолиноэтил)амида 1,2,4-триазино[5,6-b]индолил-3-тиогликолевой кислоты (1), повышающего физическую работоспособность в условиях гипоксии, и может быть использовано в медицине. Для выявления активности среди замещенных триазино[5,6-b]индолила получено новое соединение I из эфира замещенной тиогликолевой кислоты и 2-морфолиноэтиламина в среде пропанола при нагревании не выше 100^oС 1 ч. Выход 83%, т.пл. 208-208,5^oС. Испытания показывают, что соединение I проявляет лучшую активность в отношении повышения физической выносливости в условиях гипоксии, чем известный N-(2-N-пиперидиноэтил)амид 1,2,4-триазино[5,6-b] индолил-3-тиогликолевой кислоты. Токсичность 820 мг/кг, против 250 мг/кг для указанного аналога. 2 табл.

N-(2-N-Морфолиноэтил)амид 1,2,4-триазино [5,6-b]индолил-3-тиогликолевой кислоты формулы

повышающий физическую работоспособность в условиях гипоксии.