4-Йодфениллаурат,меченный радиоизотопами йода,в качестве радиоактивного средства определения ферментативной активности липазы в организме и промежуточный продукт для его получения Советский патент 1987 года по МПК A61K51/04 C07B59/00 C07C69/17 A61K101/02 A61K123/00 

Изобретение относится к органической химии, конкретно к новым химическим соединениям: 4-иодфениллаура- ту, меченному радиоизотопами иода, формулы I:

D -(о)-ОС01Ш2)1оСНз (П

и промежуточному продукту для его получения, 4-иодфениллаурату, формулы II

130

К раствору 11,0 г (0,05 М) 4-иод- фенола в 50 мл абс.бензола прибавляют 6,0 мл (0,075 М) пиридина и затем 16,4 г (0,075 М) хлорангидрида лаури- новой кислоты. Реакционную смесь нагревают час при 55-60°С при перемеO/OCOlCH IinCHa (11) шивании, охлаждают до комнатной тем Меченое соединение может найти применение как средство определения ферментативной активности липазы в организме.

Цель изобретения - выявление соединений, обладающих повышенной точностью при определении ферментативной активности липазы в организме, а также выявление соединений, позволяющих получить соединение формулы I с высоким выходом.

Синтез целевого продукта проводят по следующей схеме. А-Иодфениллаурат получают взаимодействием 4-иодфенола с лауроилхлоридом в молярном соотношении 1:1,5 в бензольном растворе в присутствии пиридина с последующим нагреванием реакционной смеси при 50- и выделением кристаллического продукта П. 4-Иодфениллаурат, меченный радиоизотопами иода, получают реакцией изотопного обмена f адиоиоди- да натрия с 4-иодфениллауратом в этиловом спирте в присутствии одновалент ной меди при рН 6-7.

Поскольку липаза секретируется поджелудочной железой и гидролизует субстраты в двенадцатиперстной кишке вве- денный перорально (внутрижелудочно) 4-иодфениллаурат, меченный радиоизотопами иода, может быть использован для исследования внешнесекреторной функции поджелудочной железы как в Физиологических, так и патологически

условиях. Метод позволяет прижизнен- CQ тографии в системе бутанол:аммиак:

ные исследования с помощью наружной регистрации гамма-излучения радиоизотопов иода стандартной аппаратурой, применяемой в медицине и биовода - 45:1:15.

Пример 3. С целью прекращения выделения липазы в кишечник крысам производят операцию перевязки логин. Методика исследования заключа- f протока поджелудочной железы. Кон- ется в сравнительном измерении радио- тролем служат интактные .(нормальные) активности в моче и в эталоне и может г крысы. Крысам обеих групп внутриже- быть выполнена с помощью простейшего . лудочно вводят с помощью зонда 4-иод- радиометрического прибора. Кроме то- фениллаурат, меченный иодом - 125,

03598 го

fO

предполагаемое соединение может найти применение в исследованиях на человеке, так как оно содержит радиоизотопы иода, разрешенные к исследованию в практической медицине.

Пример 1. 4-Иодфениллаурат.

К раствору 11,0 г (0,05 М) 4-иод- фенола в 50 мл абс.бензола прибавляют 6,0 мл (0,075 М) пиридина и затем 16,4 г (0,075 М) хлорангидрида лаури- новой кислоты. Реакционную смесь нагревают час при 55-60°С при переме

пературы, выливают в ледяную воду, выпавший осадок отфильтровывают, сушат . Полученный 4-иодфениллаурат пе- рекристаплизовывают из гексана,т.пл. 43-44 0. Выход 7,0 г (70% от теор.). Найдено,%: С 53,21, Н 6,58, J 31,67. Вычислено для ,, %: С 53,73, Н 6,71, J 31,59.

Пример 2. 4-Иодфениллаурат, меченньй радиоизотопами иода.

В одногорлую колбу емкостью 10- 15 мл помещают 50 мг 4-иодфениллау- рата, 3 нл этилового спирта, 2 мг однохлористой меди и 0,2 мл раствора иодида натрия ( J или .Т) без носителя общей активностью 20 мКи, Реакционную смесь доводят уксусной кислотой до рН 6-7, нагревают с обратным холодильником 3 ч при 80-90 0, фильтруют, разбавляют 20 мл воды. Выпавший продукт отфильтровывают, про мы- вают холодной дистиллированной водой и растворяют в эфире. Эфир испаряют досуха и целевой меченый продукт растворяют в подсолнечном масле, доводя до нужной радиоактивной концентра

ции.

в табл. 1 приведены условия полу- чения, радиохимический выход и радиохимическая чистота 4-иодфениллаурата, меченного радиоизотопами иода.

Идентификацию меченного радиоизотопами иода целевого продукта и определение его радиохимической чистоты проводили методом бумажной хрома- 31303598

в растворе подсолнечного масла в оОъе- липазы, ме 0,2 мл и в дозе 10 мкМи по радиоактивности. Животных забивают через 1-24 ч после введения вещества, отбирают мочу и пробы органов и подвергают их прямой радиометрии сравнительно с эталоном, содержащим равное введенному количество радиоактивности. Данные выражают в % по отношению к введенному количеству вещества.

В табл. 2 приведена динамика радиоактивности в моче и щитовидной железе после введения А-иодфениллаура- та, меченного иодом-125, нормальным крысам и крысам с перевязанным про- током поджелудочной железы. Средние величины из 1.0-1 1 крыс на точку .10

Из нных табл. 2 следует рация препятствует ферментативному гидролизу испытуемого вещества и накоплению радиоактивной метки в моче и щитовидной железе.

Пример А. Для исключения влияния неспецифического операционного стресса крыс подвергали перевяз ке протоков поджелудочной железы или ложной операции (лапоротомии). 4- -Иодфениллаурат, меченный иодом-125, вводил и внутрижелудочно, животных забивали, активность регистрировали через 3 ч после введения метки. Эти материалы представлены в табл, 3.

Из данных таблицы следует, что ложнаяNiGTKa у KOTOplM O ВСаСЫ: ЛОТСЯ

и выволнтся с .

Биохимические методы o iiu :ie;ieHU4 активности липазы виг cvoгnниз iл требуют инкубации субстрата и фep 5GHтa в искусственной сре;те и эму.чьгпрояа- ния субстрата, Помимо ряда противопоказаний для зондирования, качество этих методов до настоящего времени неудовлетворительное, что метает широкому их применению и сказываются на истинности результатов, анализ занимает несколько часов, требует спе- циальной аппаратуры и реагентов.При15 менёние предлагаеьюго принииииально нового субстрата лишает метод указанных недостатков, так как рас цепленме субстрата происходит в физиологпчес- что one ких условиях и точно отражает уровень

20 активности и секреци ; л1-шазы в лудочной железе. Время анализа - несколько минут. Таким oбpaзo J, биохимическая адекватность, простота, быстрота, доступность, точность и от25 сутствие противопоказаний лрр. приме- - нении этого соединения делают возможным массовые скрининговые исследования.

Диагностическая точность и эффек30 тивность метода определения активности липазы с лримененр ем J-4- -иодфениллаурата существенно выше по сравнению с прототипом. Так, при определении с помощью известного соедианалогичньк модельных услооперация не влияет на гидролиз меченно- 35 нения в

го соединения и накопление метки в моче, виях (перевязка протоков поджелудочной железы у крыс и безбелковь й рацион у обезьян) активность панкреатической липазы оценивается- сниженной

тогда как истинная операция резко снижает накопление метки в моче на протяжении 5 сут после операции.

Изучение острой токсичности на мы- 40 вдвое, тогда как активность предла- шах показало, что внутрижелудочное гаемого фермента уменьшена в 3-4 ра введение максимально возможной дозы (табл. 1 и 2, примеры 3 и 4), 4-иодфенИллаурата (500 мг/кг), в 143000 раз превьшающей потенциальную

раза

Формула изобретен li я

45

1. 4-Иодфениллаурат, меченный радиоизотопами иода, формулы I

максимальную клиническую дозу, не вызывает признаков токсического поражения и гибели животных.

В таблице 3 показано влияние ложной и истинной операции на накопле S

ние метки J-4-иодфениллаурата в

50 в качестве радиоактивного средства определения ферментативной активности липазы в организме.

2, 4-Иодфениллаурат формулы II

моче. Средние данные из 5 крыс на точку.

Таким образом, представленные материалы говорят о том, что 4-иодфенил- 1-/О -ПРП/Ог-Г гч-. е лаурат, меченный иодом-125, при внут- 2).З (И) рижелудочном введении подвергается в качестве промежуточного продукта по- ферментативному расщеплению в тонком лучения 4-иодфениллаурата, меченного кишечнике как специфический субстрат радиоизотопами иода.

аналогичньк модельных услоа-ра

раза

вдвое, тогда как активность предла- гаемого фермента уменьшена в 3-4 ра (табл. 1 и 2, примеры 3 и 4),

Формула изобретен li я

40 вдвое, тогда как активность предла- гаемого фермента уменьшена в 3-4 ра (табл. 1 и 2, примеры 3 и 4),

45

1. 4-Иодфениллаурат, меченный радиоизотопами иода, формулы I

ОСО(СН2.оСНз (Л

50 в качестве радиоактивного средства определения ферментативной активности липазы в организме.

2, 4-Иодфениллаурат формулы II

Т а .6 л и ц а 1

Таблица 2

Изобретение касается арилпроиз- водных лауриновой кислоты, в частности 4-йодфениллаурата, меченного радиоизотопами йода (ФЛ), который может быть использован в качестве радиоактивного средства определения ферментативной активности липазы в организме, и немеченного 4-йодфениллаурата (НФЛ) - промежуточного продукта для синтеза ФЛ. Для выявления соединений, обеспечивающих точность определения ферментативной активности липазы, были получены новые ФЛ и НФЛ. Последний получают реакцией йодфенола с лауроилхлоридом при 50-60 С в среде бензола в присутствии пиридина. ФЛ получают радиоизотопным обменом радиоактивного йодида натрия с НФЛ. Выход НФЛ 70%, т.пл. 43-44 0. Радиохимический выход ФЛ 80-82%, чистота 96-98%. ФЛ дает возможность с высокой точностью оценить внешнесекре- торную функцию поджелудочной железы (активность липазы) по измерению радиоактивности мочи. В сравнении с известным 4-нитрофениллауратом активность липазы снижается в 3-4 раза с ФЛ против снижения активности в 2 раза. . с.п. ф-лы, 3 табл. & (Л со о оэ от со оо