Среда для репродукции вирусов гриппа в культуре клеток Советский патент 1987 года по МПК C12N7/00 

Из 113рс гение . ОТНОСИ ; ii к O -io i о х;; о- .Ч01П1И, н частнос п . y -:ii, и 1 жет ohiTb ( спользг)вано длч ;м )Мь ции виругл в гриппг; ,

Цепь 1ПОбрСЧЧ НИ - VIipO ;a4 l l l:lif

ды с сохранением с таС)п:П И)1 -: ii,)K:-ix титров ьируг.оп .

II р и м с р 1 , При1 ( :ч : ;АМ1М.. пан; реатичсскогс) г-н;;рО-И1ч, i л :у; И-- ных эмбрнонор (ГК 5) ,

Туики 14-днепных , тьи рио- НОИ вместе с голоиамд (vn осл аллантоисной вируссс;д.: р ка;11,ей ruaiKoc

I V собирают в ЧИС 1 У1 3 ГДН уДу,. O i Mblib iют трехкра Н,гм кодичестн.ом дис--;и: ли- роваиной нодь Д(-1 npociu-Tjiei HH промывных жидкостсч. iicnojn зуют для гцдролнза соазу H-J:H хранят н замороженном сос 1 ояиии 1П И - ,20 23) (. В последнем слх чае -ia (гутки до гидролиза их оттаивают ::pvi (4-8)

Измельчение произно;1ят г- о.1огени заторе (или любом другом ir мельчите - ле ткан(й) , в длойн(1м ло ju-c / об ьему количеч тве тркдистиллиропаипой :-io. u-,

Гомо1 епат pa nojiii i под,1;г рет; И /ю би(три) дис тиллиронаи;1 К гкхдоч S соотношении 1:3, ; o--.tci: ью Ох - ю едкого ) рН гя, ;г1опич :тч смеси ;i,o 8,3, затег-: ино/яч лайкре- атин (45 ед. ак- иипосл :0 а количегтве 20 г/п. идролиз луокод гг и гелс- ние 3,5-4 л нри , :: л ргч.д.иче :к л перемешивая и дон(;ди pii ;л-:дро; 1 л; смеси до 8.5. Время оконч;ллия Д Дрелиза определяют по ст1 ле11и iap/ ci4i- нип аминнснч) азота.

Г идролиз нрекра цлю- г 1 ;лт:с П ем .i i до 4,5-4,7 1Л%-лым pfic Ti oi.vo -: с:оля:;с; кисл{5ТЫ, гюсле че:о г: ое:им ление н очис-тку ()) uvrcM его клпи чения в течение 3 мин . лк ч;якрои и-:- ным (марки А) и количест: 20 на литр. Образованилпл;-я г-с-чдсл- ;;;-- фильтровывают череч дчагслггльшмй фильтр или миткалевое половлю, лизацию полученного i ;1;1)олиза га iMiy- щестпляют через асбесто Мме iL.ru,- (чли( типа ЕК - 2( предварительно 1:11омь:т; е би (три) диетиллироваи}:ок , л расчета 0,5-1 л ноды на ка;кг-и,ч литр 1 и,дропичата. Можно фидьтролачл; и через нитроцеллю;:.,озн1,е мемб1за1-1Ь гипа фи-льтров Милл1- ::ор с диамсгг лог лор 0,22-0,45 мкм Б чистую стерил1 стекляннуго пос уду., обработл. а.У Я клеточи.1,гх культур ,

;-: риных эм5;.;1п i- i н и л ;л : ал Л-; мин л (дeнo ii 1,,бл,2. С -/и i оЛ н л t/ 6e i-аКЮЙ ОСИОНЬ: ; них ДЛЧ, ко---); - о;:о- nei-(T;iveT О , З - -ному г ; л гч ;;и ;л, г v ла

га.гптбумина -л:ч 35-4Г MI-/ л-- ил11ого -1 -1О-;- ;. ,

Изготовлен л( ;:рел..1 pi л ;рсъ1у к л,5и; вирусов л . ку-1;.-гу1;е кле-гокПрим е р 2, (ГЮ) (-лдержи-;- 230 гл амиьл.а ij . Лл;: приг то: лечия сред.; р-чи-лели л г -i г-иодя- г с(-:Сггн(( , л ::)ИНГ:.л,е л л --лбл . К

vcTaKaHjinraH-i г рЬ / , ;: (-; Nal:CO , ..

3 -rc:6j :4 мри-;еделк: ,и-гл1от1П И-- ; о:ц1:(; (ГЕ) и л4il;c-iv:.:,i4)4льк- ( ;)1-11 } вируса гргллл ; --л лм Л/ Тсхас ;. характера -:икл N-onocjiOj; к.-К : очек хомякл т рк )-( л зог л ; л ч ;;а;;- вариан- а с De: ь,.

II р и М .. р л с ЛЛДТЮЛИ -

( иеду rciTOB -; лрк ci л-;- мл л-лллл ;лелии ког-чк-л 1:лг; о л 1 ГгЛз.-./, ,

т-имлл ьно Л; }(ариант- ллел-;.

Д р V. м е р . i- -i 1 о- ;л;ле::1 с с;и-/ ь релродукдии лри л акс ль:л,;л, лоо-; о- и:еиии компоиен-|--лс1 ,

идролизал- -гугл-к ;-:yp;4;h:x - содерж г- 182 ;-г л :i :-iH}i -(-i , л-ллг-л.

В a6jvH if-- 8 лрглилле- м ги-гл;-. ло-л- :-:г- уггам а вируса 1-рил :л па c- f-j.u-, л риго г OBj-ieH -:oH пр;-: -л i ;л ;:тлльЛ м лЛ О:чо111ении комлон гггС В - Как видно ил laOjn-in - , 3 :л 8, л ли иснользовании -r;:je. ьл :);|,тч-; он лсчродукглии из -; ;лрол л -а-г-U i л;1ек , уРИНЫХ ЭМбрКо-ОМ Ос ;о;;:(;м;и: -,,. 1-рИЛГ1а КуЛ тГ1-Л(- чЛ:.-- -ОК il,-4:.v КЛ -ЛЛ-:а ripoHCxoiH-iji;.- ; j ,о.- л (Л лнт-Л :CHliHOC-r.ii i ;- О--л;иКЛОЛе HilCM )Ж1Л- ,

, inrroiieTf-; лс л о i . лл:йС Л{ия 1Л л , .

р4-ЛиС1,ДуК дни .

ереда длл релродлкалл нлрлчл- pj-rnna в )е л-и. лл1;л1Л. :пс: иc-гoч ик белкл- ;:1л; - --.р .-л : аенол 7вы( к ра лч; . л, :: и

3374

би(три)дистиллированную воду, о т - л и ч я ю щ а я с я тем, что,с целью уирогцения среды с сохранением стабильности высоких титров вирусов, она , дополнительно содержит 0,25%-ый раствор трипсина на фосфат}1ом буфере и аминопептид, в качестве источника белка она содержит панкреатический гидролизат тушек куриных эмбрионов Q с содержанием 35-40 мг% аминного азота, при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Панкреатический

гидролизат15

Гидролизат лактальбу- мина (5%-ный концентрат)

Гидролизат куриных эмбрионов для микробиологическихцелей

67 i 32.

326,5 t 44,4 1,0 1 0,2 0,305l

to,200

70 -t 10,0

300,0t30,0 1,3t 0,2

0,3001

Таблица 2

Аминокислотный состав ГЛА и ГКЭ одинаковой концентрации

Аспарагиновая кислота

Треонин

4

х мл) лво

150 - 220

99 - 101

,6 50

2.0 100

0,5 - ,0

До 1 литра,

Таблица

0,481

0,3001

to,roo

0,566

Аминопептид

Канамицин

(100 тыс.ед.

на мл)

Би(три)дистиллированная вода

6,2

клеток (из-за 1111. ;)

Сетчатая структура монослоя вирусного происхождения

ГЕ - титры представляют величину, обратную разведеннк вируса

в реакции гемагглютинацни; si-iUj - логарифмы инфекционных 50% доз вируса на куриных эмбрионах,

яычисленные по Риду и Менчу: 1ПД - цитопатогенное действие вируса на клетки.

Ингредиенты

Гидролизат тушек куриных эмбрионов

Раствор Хенкса

50 мкг/мл

Т а б л и ц а 4

Таблица 5

Содержание; мл/ 1 л

179 37,6 мг %

аминного азотг

то

Обычная

5 м к г / м

Амино: ептиц

Б и ( т р и ) д и с ти л ,п и - рованная нода

Изобретение относится к области вирусологии и касается среды для репродукции вирусов грипг а в культуре клеток. Цель изобретения - упрощение среды с сохранением стабильных высоких титров вирусов. Среда для репродукции вирусов гриппа содержит панкреатический гидролизат т-, кури- ньк эмбрионов 150-220 г (35-40 мг% аминного аэота); раствор Хенкса с фе- ноловы 1 красным 99-101 г; 0,25%-ый раствор трипсина в фосфатном буфере 1,6-2,0 г; аминопептид 50-100 г; канамицин (100000 мкг/мл) 0,5-1,0 г; би(три)дистиллированн ю воду до 1 л; рН среды 7,4-7,5. Гемагглютинирующ1 Й титр на 3-4 день репродукции 16-32; ЭВД 50 5, 1-6,55.. 8 табл. со со 4:;

1 Ь

идроли: ат тушек куриных экбрионои

а б J и ц а

К оке ч -: а я кон- центрг.ция , едишщь изме-- рел1ия

0,25%-н::,1Й раст- нср трипсина

Ам яног-елтид

Раствор канамииина

(100000 мкг/мл)

Би(три)дистиллированная вода

О О

100 г на 1 мл

Ло л

Т а б л и ц а

Сплошной монослон

Признак}-: дегетгера- ини отдельных клеток

16 6,0

32 6,5;

Редактоо М.Товтии

Составитель А.Маныкнн Техред M.XoAaHi-f4

Закз- 4097/23Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий И 3035, Москва, Ж-35, Раушская наб , , д.ч/5

Произно.чственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, vл .Проек пая, 4

Более вьфаженняя сетчатая структура (Ш10)

Корректор С.Черни