Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/04 

И юОретенне относится к :е;;и; И : -- кой микробиологии J ;-i ,сл I.U:TH i собам определении чувствитпл ьнсс -/-и микроорганизмов к мембр пнотг С-ли - -i ли-- тибиотикам,Цель изобретение; - rLi)ibii ::fHne чуист вительности способа и РГО vciKoi ). Сущность cnocc6i;i своди ; : к I ONi y., что во флуоресцентнуго к. пнсту внося: 10 клеток тecт; pye sc Л ;1 :iiTaN M;. микроорганизмон я фосфатноь- б уферс- рН 6,5-7,5, содержапсн 100-150 х,м NaC 1 , 1-5 мМ КС 1 и и (хчучае иеогхо1:,и- мости для иормальног О (Ч якл.конирова- ния данного штамма л.рут ие ИС Н Ы (Са , Мд и т,п в коннеьгграпииу , не лре- вь 1лаюи;их 1 мМ) К1 не ге ногщоржипг.ю : температуру, onTHMajit nyra роста культуры., Затем л кк;нету Biiori.HT lO -iO t (в зависимости от увстВИТеЛЬНОСТГГ флуОрИМе Г рс ) (ЬлгуОреСП, Л Гного красителя 3 , З-дипролил - 2 . 2-тис:- дикарбоцианип иодид idis С J..n i: регистрируют флуоресл1е1{дию л.,- 650 и , 670 КМ 1ип-;:а вь г;зралня красителя во-збу;кп. щел з ме на превышать 1 им) . Затем и .yci;en- зию вводят антибиотик в И ;:следу ам( коице т;ра1ши, иредва.ритстилю не имеет ли он собстпепно ; ф.чуорс-сдс ции в данной области, и р(мл- : рмру11: : изменение уро чня флуоресг епгис.-;,, .,-п аг тибиотик не повреждает мембрану исследуемого микроор Гг- г;изм, .,, изменений в уровне ф нуоресденлии не наблюдается , если же N eM6paJ-ia по:вреж; :,ена 3 результате иоиофорного ил.-1 щего действия антибиотика, измеиеьгие уровня Флуорс ;лде;: : л;, CHJ;- заиное с изменение траН :;мС мС jani нч ; ) готенци -и;а клетки „

Трансмембранный 110те1Л11:;а..г я влмс-т -: зажнейшим показатс лем жиз лес х: с;;б ас /- ти клеток и резко изменяется гри чо -- д ействии, нарушану.дем мембрапс. г :ик;з1 ;-- организмов,. Таким образом, :. и л. iluiyOpt-(Л),еЛГ).И1; С.уД.ЯТ о

чувствитчит 1 ности даниогс- ;пта. г-:а организма к исследу а 1тг б(С1 ик . Чре.дложенный спос об нояно гяс : опредс1)еделения вместе с: лодг;)тпвк( й зани-- I lafiT не более 10 О-Т Лили- ел, особенностью данного снссоба является то, что в суспензик :-слет;ч, тести;.

е.МЫХ культур Г- .ИКрООрТ аНИЗМО : H3Mt.:iniiразницу уровней ф туорес.аемдра- краси е с. е ни я а н ти б и о ти BacMlus sub ri is 720 н фосфатном бу- г:.с )е 6,5. содс:ржл цем 150 NaCl :- .: мМ КС 1 , Оаределение проводят при , к кювету вводят lO М V, 1 Д1тролил ;-нкабро 1,ианин йодида :: 5 -С, л 1ег -1стрнру;от флуоресденцию прм , j.jf 6 к) и .,(,, 670 нм Загс 5 н суслснзик рт о;:1ят антибиотик

: Г 1ли 1идигг S г Кпннентралии 2 И) М :i К ги с пирур) г изменение флуо- :)- .лгенили .

:| р и м е р / . : dnyopecnenTHym

Kiii;u:Ty инося ; клеток культуры i с occocus в фосфа Г:к;м буфере р11 7.1. сол.(П ч 1)0 мМ NaC я 5 мМ .(- , Определение нротнодят при 37(.

; в юовет;. вводит : О М diS C 1 pui л(.:грирукг г д1-1уоресие1итию при тех же .и.зинах но. л, и сгуслелзию вводят аг ;1сиотик (лшитиалнн в кслл1елтрадии ; .Ми ре i и ст|)гр Ю т изменение уров

Г ) и м е j i 3 , (, К :вия лрозедения : сс ьек ис с. и: ;;ов;11П :.я согласно приме- ; У . , Б к;1 -14; Tic алт} биотика вводят ; с --:инилил S ; ксацс лт:г)алии 1 : 1 О М и a(ciFHiaj )-: и: ме1кл{; е уровня флуорес- :. с лл;1 ,

а 1 и м г р -, ( :вия проведения . 1:с аект (г. как в примере / , ) ап:и ГСП Пи(-:-;ч валипоминин : : с ми(Л1 :ралии . . : и наблюдают с а.; .лк. ;;ис viKjiru: ф 1уо;)е слендии ,

а К1мсил:тра::ии :а регистрируют yja .а;ел;ци - „ 15зм(Л1ение уров- ;{)i i :c;y(peciiCH) лг i :аб.:а-1дается , так ка;; ; , Влс, уст ойчн- а к

i зул с;агП| предс та)::-ЛИ;; в таблиде ,

ях ,

так и в п1кробиоло1 ичес лслпюсти, и в медицииско) п качестве у1шверсального спо одновременного определения собности клеток микроорг ани чувствительности их к антиб

Формула

- 1337

биотика, при которой выявляется эффект действия последнего на заданное количество микроорганизмов - мишеней, Эффект действия в заданном способе определяется по изменению трансмембранного потенциала, который выражается в изменении уровня флуоресденпии красителя dis-C. (5) Достоверным изменением считается 10%-ный сдвиг уров-iQ ня флуоресценции при добавлении антибиотика .

Применение данного способа позволяет определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в концентра- 5 биоти-ком, отличающи ции 10 М. В прототипе эффект действия на клетки наблюдается при концентра1щи антибиотика на 2 порядка больше и в течение 240-360 мин. Получение результатов с помощью предлага емого способа достигается в течение 10-15 мин„ Способ позволяет осуществлять выявление антибиотиков мембрано- тропного действия. Он прост в осуществлении, тестирование одного антибиотика вместе с подготовкой заниобре

0

Способ определения чувст ти микроорганизмов к антиби включающий инкубирование су микроорганизмов с красителе

тем, что, с целью повьш1ения вительности способа и его у в качестве красителя исполь дипропил-2,2-тиодикарбоциан предварительно измеряют уро оресценции смеси суспензии м низмов с красителем, затем д раствор антибиотика, после и вания повторно измеряют уро оресценции смеси и определяю вительность микроорганизмов биотику по разности уровней ценции до и после внесения а ка .

мает не более 10 мин, поддается автоматизации и может быть широко использован как в лабораторных условиСравнительные данные.по определению

чувствительности микроорганизмов к

антибиотикам

МикроорганизмВыявленный эффект действия антибиотика, М

(2 10 клеток)г

по предлагаемому способу по прототипу ,

Грамицидин SПолимиксин Грами -лщин S I Полимиксин

Bordatella bronchiseptica4,5-10- 7,2- 0 6-10 7 10

Escherichia coli 3-10 1,5-10 S-IO 0,8 10Micrococcus lysodeikticus 2-10-88 ,3-106,5-10Составитель Г.Смирнова Редактор М.ТовтинТехред М.ХоданичКорректор Н.Король

Заказ 4097/23. Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская набо, Д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

ях ,

так и в п1кробиоло1 ической промьш - лслпюсти, и в медицииско) практике в качестве у1шверсального способа для одновременного определения жизнеспособности клеток микроорг анизмов и чувствительности их к антибиотикам,,

Формула

обретения

биоти-ком, отличающи

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику, включающий инкубирование суспензии микроорганизмов с красителем и антий с я

тем, что, с целью повьш1ения чувствительности способа и его ускорения, в качестве красителя используют 3,3- дипропил-2,2-тиодикарбоцианин йодида, предварительно измеряют уровень фпу- оресценции смеси суспензии микроорганизмов с красителем, затем добавляют раствор антибиотика, после инкубирования повторно измеряют уровень флуоресценции смеси и определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику по разности уровней флуоресценции до и после внесения антибиотика .

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику. Цель изобретения - повышение чувствительности способа и его ускорение. Сущность способа сводится к тому,что во флуоресцентн то кювету вносят суспензию исследуемого микроорганизма, затем в кювету вносят флуоресцентный краситель 3,З-дипропил-2,2-тиодикарбо- цианин йодида и регистрируют флуоресценцию. Затем в суспензию вводят антибиотик в исследуемой концентрации, смесь инкубируют при температуре роста микроорганизмов и измеряют уровень флуоресценции. Определяют разницу в уровнях флуоресценции до и после внесения антибиотика, по которой определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотику. Время исследования 10-15 мин, чувствительность - концентрация антибиотика 10 -10 М, 1 табл. e (Л со ОО Ч 4