Способ очистки липосом Советский патент 1988 года по МПК A61K47/00 

СО

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - повышение стабильности целевого продукта. Ионообменную смолу вводят в колбу с липо- сомной суспензией и перемешивают. Смесь фильтруют и чистую липосомную суспензию лиофилизируют. Способ позволяет получить высококонцентрированные липосомные суспензии, которые не подвергаются осаждению. 1 табл.

00 а

vj

00

оо

сн

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения и очистки фармацевтических составов (лиофильные липосомы).

Целью изобретения является повышение стабильности липосомы за счет очистки липосомной суспензии с помощью ионообменных смол.

Способ осуществляется следующим образом.

Ионообменную смолу, например, из группы стирола, дивинилбензола, акриловой и метакриловой кислоты вводят непосредственно в колбу с липосомной суспензией, после чего,содержимое колбы перемешивают 10-60 мин. Затем фильтруют через фильтр из спекшегося стекла, способного -зйдержи- вать ионообменную смолу, на которой адсорбировался незахваченньм препарат. Получаем чистую липосомную суспензию, которую затем лиофилизируют. Предложенный способ очистки позволяет получать высококонцентрированные липосомные суспензии (до ,5 мг/мл хлористоводородного доксорубицина),которые не могут быть получены посредством, хроматографии на колонке с молекулярным ситом (максимум 0,3мг/мл Кроме того, данная липосомная суспензия является б.олее устойчивой и не подвергается осаждению в отличие от суспензий, полученных ультрацент ри- фугированием.

и мер 1. В колбе для омыления растворяют в хлороформе следующее количество липидов: 1,5 г яичного лецитина, 0,4 г холестерина и 0,2 дицетилфосфата, и вьшаривают в условиях вакуума до сухого состояния, Раствор хлористоводородного доксорубицина (с концентрацией 10 мг/мл) и 0,007 Н буферный раствор фосфата выливают в колбу, после чего полученную суспензию подвергают ультразвуковому перемешиванию в течение 1 мин. Суспензию отстаивают 30 мин под слоем азота при комнатной температуре. Затем в нее добавляют 2 г смолы, предварительно активированной в муравьинокислом натрии и полученной посредством полимеризации метил- метакрилата, образовавшего поперечную связь с дивинилбензолом, обладающей функциональностью карбоновой кислоты и имеющей макропористую структуру, что позволяет ее использовать также в гидрофобных растворах, имеющих фирменное наименование IRC 50 (сухой вес эквивалентен 5 мл наполненной смолы). Содержимое колбы перемешивают 30 мин, после чего суспензию фильтруют через пористый лист, размер G 1. Липосомы, размер которых изменяется от 0,5 до 2 мк и содержащие около 60% начального количества доксорубицина,стабилизируют посредством лиофилизации.

П р и м е р 2. Используют те же количества липидов и те же условия проведения растворения, что в приме- ре 1. Затем в колбу добавляют раствор доксорубицина и перемешивают полученную суспензию в течение 10 мин для получения липосом с размером менее 1 мк. Поскольку размер липосом был неоднороден, применяют негранулированную смолу, которая также выполняет и функцию сита. Поэтому добавляют 10 мл смолы с торговым знаком Дауэкс-50-Х4 (100-200 меш),пред- варительно активированную в муравьинокислом натрии. После фильтрования бьша получена суспензия, содержащая липосомы с размером 0,2-0,8 мк и , включающая 75% исходного доксорубици-- на. Липосомы стабилизируют лиофили- зацией. . , .

Пример 3. Раствор 5-фторура- цила с концентрацией 10 мг/мл в 0,007 Н буферном растворе фосфата при рН 8 выливают в колбу для омыления,со- держащую также липидную фазу, полученную аналогично примеру 1. Полученную суспензию обрабатывают по примеру 1 с использованием 10 мл фильтрующей смолы, имеющей фирменное наименование Амберлит IRA 400 (С1), предварительно активированной в хлоргидра- те. Полученные липосомы стабилизировали лиофилизацией.

П р и м е р 4. Липосомы готовят аналогично примеру 1, используя следующие липиды: 1,5 г яичного лецитина, 0,4 г холестерина и 0,2 г сте- ариламина. Для очистки использовали 10 мл смолы Дауэкс-1 (50-100 меш), которую предварительно активировали. Полученные липосомы стабилизировали лиофилизацией.

П р и м е р 5. Все операции про- водят аналогично примеру 1, за исключением того, что для очистки исполь- зуют 15 г смолы Дауэкс-50ЫХ (100 - 200 меш), при этом время перемешивания увеличивали до 40 мин. После

3

фильтрования через фильтр из спекшегося стекла G 1 была получена суспе зия липосом, содержащая около 50% первоначального количества доксоруби цина. Липосомы стабилизировали лио- филизацией.

Пример 6. Все операции проводят аналогично примеру 1, за исключением того, что для очистки используют IRC 50 (эквивалентную 5 г сухой смолы), перемешивание проводят 1ч, после чего липосомную суспензию фильтруют на фильтре из спекшегося стекла с последующей лиофилизацией продукта.

Предложенный способ является менее дорогостоящим (за счет экономии времени и материала) по сравнению с известным. Кроме того, он пригоден для промьшшенного использования. Полученный продукт более концентрирован (в соотношении не менее 1:20 к продукту, полученному с применением гель-фипьтрации), в процессе использования гель-фильтрации продукт получают в 20 раз более разбавленный ,

более стабилен, что очень важно для промьшшенного применения и обусловлено тем фактом, что диализ, используемый в известном способе, требует не менее 24 ч. В данном способе процесс осуществляется за 30 мин. Поскольку данный продукт меньшее время остается в растворе, то он более стабилен.

Сведения о стабильности и других характеристик липосом, а также условий обработки приведены в таблице.

15Фор мула изобретения

Способ очистки липосом, включающий обработку препаратов с последующей лиофилизацией, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности целевого продукта, обработку проводят встряхиванием в течение 10-60 мин с ионообменной смолой: Амберлит IRC 50 или Дауэкс-50, или Амберлит IRA 400 (С1), или Дауэкс-1 или Даузкс-50ЫХ, а затем фильтруют через стеклянный .

„- ё § «I

а u ID nan

и ё н - V о 9 ж о, - ш с; S п а «

«

я n «

n

о

vO

s

о

о

1Л

см W1

о « Ри о

о м

о

U-I

гч

I о

о, ь

I

ш о

., . но, о ш к о с;

П П, я) g о

а; и ш

CQ

о S ш «1 к it It &

СЧ

м

1Л

г:2

Й

о н

о п

о

п

S

S

и

йй

I 5Й

о

о

о о

о

55 я. Si

о & в

о о ts

о о ч

о

00

око S о к с( сх

г

г о о

о

00

о

S

1Л