Штамм бактерий VIвRIо сноLеRас еLтоR-продуцент умеренного фага П серотипа у1 гетероиммунной категории Советский патент 1988 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/63 

со 00

00

N9

СО

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холеры.

Цель изобретения - новый штамм Vibrio cholerae eltor, несущий фаг У1 гетероиммунной категории.

Штамм Vibrio cholerae eltor депонирован в коллекции микроорганизмов Института Микроб под номером КМ-17 (611). Штамм получен из воды открытого водоема.

Культурально-морфологические Признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,4-2,9 мкм в длину и 0,3- 0,6 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. Грамотрицательны,

На твердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингара рН 7,6+0,2) образует через 18 ч выращивания при 37±1 С круглые,диаметром 3,0+0,6 мм, полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем,слегка уплотненным центром.

На жидких питательных средах (бульон Мартена, 1% пентонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8+0,2) через 6 ч выращивания при 37+l c образуют равномерную муть и нежную пленку на поверхности.

Физиологические признаки. Тест на оксидазу положителен. Разлагает до кислоты без газа манко-- ЗУ, глюкозу, сахарозу, маннит, не разлагает 1-арабинозу, инозит, лактозу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона. Ферментирует крахмал и желатину, не образует дигидролазу аргинина, образует декар- боксилазы лизина и орнитина.

Не растет при повышенной (7-10%) концентрации хлорида натрия. Гемоли- зирует эритроциты барана по Грейгу. Серологические свойства. Агглютинируется до титра холерными сыворотками О и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками РО и Инаба.

Штамм способен спонтанно продуцировать умеренный фаг 611 У1 гетероиммунной категории, который мезирует холерные вибрионы, лизогенные по фа10

нитета к фагам 1-У иммунных категорий Фаг 611 используют при получении специфической тест-культуры МЕ-7/611 применяемой для прямого фаготипирова- ния холерных вибрионов классического и эльтор биовара при проведении эпидемиологического анализа.

Умеренный фаг 611 по электронно- микроскопической структуре относится к У морфологической группе, по серологическим свойствам принадлежит к П серотипу холерных фагов. На газоне индикаторного штамма Vibrio cholerae

15 eltor 692 образует типичные колонии с плотным центром, окруженным узкой зоной неполного лизиса, 2,5+0,5 мм . в диаметре.

Размножают штамм Vibrio cholerae

20 eltor KM-17 (611) на бульоне и агаре Мартена рН 7,6+0,2, хранят в лиофиль- ном состоянии.

П р и м е р. Для получения специфической тест-культуры МЕ-7/611 гото25 вят фильтрат (фильтрацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37 С штамма 611 ив количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры 3 ч роста индикаторного штамма 692 и 5,0 мл 0,7% агара Мартена, перемешивают и -выливают на 2% агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть.и инкубируют 18 ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в центр колонии фага переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона. Туда же добавляют индикатор40 ный штаим 692 и 0,7% агар, как указано Bbmje, Содержимое каждой пробирки

выливают, на отдельную .агаровую пласотинку и инкубируют 18 ч при 37 С,

после чего в каждую чашку добавляют 4g по 10 мл бульона и шпателем переме-, шивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано выше. Полученный концентрированный фаг 611 (10 - 10 корпускул в 1 мл) в количестве 1,0 мл соединяют с 0,2 мл реципиент- ного штамма ME-7. добавляют 0,7% агар и выливают на агаровую пластинку. Через 18 ч инкубирования при 37 С на

30

35

50

гам 1-у категорий, и при мезогениза- gg поверхности реципиентного штамма об- ции чувствительной культуры холерных наруживают негативные колонии моди- вибрионов создает у нее иммунитет фицированного фага 611, из центра (резистентность) только к фагам своей которых высевают клоны, лизогенные иммунной категории и не создает иммупо фагу 611 (МЕ-7/611),

нитета к фагам 1-У иммунных категорий. Фаг 611 используют при получении специфической тест-культуры МЕ-7/611, применяемой для прямого фаготипирова- ния холерных вибрионов классического и эльтор биовара при проведении эпидемиологического анализа.

Умеренный фаг 611 по электронно- микроскопической структуре относится к У морфологической группе, по серологическим свойствам принадлежит к П серотипу холерных фагов. На газоне индикаторного штамма Vibrio cholerae

5 eltor 692 образует типичные колонии с плотным центром, окруженным узкой зоной неполного лизиса, 2,5+0,5 мм . в диаметре.

Размножают штамм Vibrio cholerae

0 eltor KM-17 (611) на бульоне и агаре Мартена рН 7,6+0,2, хранят в лиофиль- ном состоянии.

П р и м е р. Для получения специфической тест-культуры МЕ-7/611 гото5 вят фильтрат (фильтрацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37 С штамма 611 ив количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры 3 ч роста индикаторного штамма 692 и 5,0 мл 0,7% агара Мартена, перемешивают и -выливают на 2% агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть.и инкубируют 18 ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в центр колонии фага переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона. Туда же добавляют индикатор0 ный штаим 692 и 0,7% агар, как указано Bbmje, Содержимое каждой пробирки

выливают, на отдельную .агаровую пласотинку и инкубируют 18 ч при 37 С,

после чего в каждую чашку добавляют g по 10 мл бульона и шпателем переме-, шивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано выше. Полученный концентрированный фаг 611 (10 - 10 корпускул в 1 мл) в количестве 1,0 мл соединяют с 0,2 мл реципиент- ного штамма ME-7. добавляют 0,7% агар и выливают на агаровую пластинку. Через 18 ч инкубирования при 37 С на

0

5

0

поверхности реципиентног наруживают негативные ко фицированного фага 611, которых высевают клоны,

по фагу 611 (МЕ-7/611),

31388423

Применение лнзогенного клор1а Формула изобретения МЕ-7/611 в качестве тест-культуры Штамм бактерий Vibrio cholerae при фаготипировании холерных вибри- eltor КМ-17 (611) - продуцент умеонов ;повышает t качество эпидемио- ренного фага П серотипа У1 гетероим- логических расследований при холере, мунной категории.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностик ке холеры. Целы изобретения - новый штамм V.cholerae eltor, несущий фаг У1 гетероимнунной категории. Штамм 611 получен из ВОДЫ-открытого водоема, депонирован под номером КМ-17 (611). При культивировании в бульоне Мартена (рН 7,6 ± 0,2) при 37 ± в течение 20 ± 2 ч штамм 611 продуцирует умеренный фаг 611 ранее неизвестной У1 гете- роиммунной категории. При лизогениза- ции реципиентного штамма Vibrio cho- lerae eltot ME-7 фаг 611 создает специфический иммунитет. Клетки, лизо- генные по фагу 611, устойчивы к гомо- иммунным фагам У1 категории и чувствительны к гетероиммунным фагам, фагам 1-У категорий. с S (Л