Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор, несущих гомоиммунные умеренные фаги Ш гетероиммунной категории Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/02 C12Q1/02 C12R1/63 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холеры.

Цель изобретения - упрощение способа.

Для осуществления способа используют три штамма холерных вибрионов в качестве тест-системы рестрикции- модификации.

Штамм Vibrio cholerae 145 (P-l ) депонирован под номером КМ-20 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-мо рфолог ич еские признаки.

Подвижные слегка изогнутые палочки длиной 1,2 - 2,7 мкм, диаметр 0,2 - 0,4 мкм с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. Грамотрицательны.

На плотных средах - агар Мартена и агар Хоттингера, рН 7,610,2 - образует полупрозрачные колонны с голубоватым оттенком, 3 t 0,5 мм в диаметре.

В жидких средах - бульон Мартена и бульон Хоттингера, 1%-ная пептон- ная вода, рН 7,8tO,2 - образует равномерную муть, тонкую пленку на поверхности среды.

Биохимические свойства.

Разлагает до кислоты без газа . маннозу, сахарозу, глюкозу, маннит; не разлагает арабинозу. Окисляет и ферментирует глюкозу на среде Хью- Лейфсона. Образует декарбоксилазу лизина, не образует дигидролазу аргинина. Ферментирует крахмал и желатину. „ Серологические свойства.

СП СП

8

00

Агглютинируется 0-агглютинирующей холерной сывороткой и сывороткой Инаба.

Штамм несет систему рестрикции- модификации (РМ), специфичную для эпидемических классических и эльтор холерных вибрионов.

Штамм Vibrio cholerae eltor 485 депонирован под номером КМ-21 и ха- рактеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Морфология штамма 485 не отличается от штамма 145 ().

На плотных средах образует полупрозрачные колонии с уплотненным центром 4± 0,5 мм в диаметре. Биохимические свойства. Биохимическая активность штамма 485 аналогична штамму 145 (Р-1). Серологические свойства. Агглютинируется холерными агглютинирующими сыворотками 0 и Огава.

Штамм несет систему РМ, специ-

фичную для неэпидемических вибрионов эль то р.

Штамм Vibrio cholerae eltor 574 депонирован под номером КМ-22 и характеризуется культурально-морфологи ческкми признакмми, биохимическими и серологическими свойствами, аналогичными штамму 485,

Штамм 574 также несет систему РМ, специфичную для неэпидемических

вибрионов эльтор,

Пример. Исследуемый штамм выращивают в 1 00 мл любой жидкой питательной среды в течение 18-20 ч при 37°С. Полученную культуру фильт- руют через бактериальные керамические фильтры (Ф-3, Ф-5). Фильтрат титруют методом Грациа на каждом из трех штаммов тест-системы РМ - 1 45, 485 и 574. Для этого готовят после- довательные десятикратные разведе- ния фильтрата в любой питательной жидкой среде до , 0,5 мл цельного фильтрата и каждого его разведения , ( 10) соединяют с 0,5мл бульонной культуры каждого тест-штамма, выращенной при 37°С в течение 3 ч, добавляют в смесь 5,0 мл 0,7%-ного

расплавленного агара Мартена рН 7,6 и выливают на 2%-ную пластинку того же агара в чашке Петри. После застывания второго слоя чашки перевертывают, инкубируют 18-20 ч при и учитывают результаты. Подсчитывают количество колоний фага на газоне каждого из тест-штаммов. Если фаг формирует негативных колоний на газоне штамма V. cholerae 145 (Р-1) в 10 - 10 раз больше, чем на V.. eltor 574, то исследуемый штамм относят к эпидемическим вибрионам. Если фаг формирует негативных колоний на газоне V. eltor 485 в 10г - 10 больше, чем на штамме V. cholerae 145, исследуемый штамм относят к неэпидемическим вибрионам эльтор.

Эффективность посева умеренных фагов холерных вибрионбв представлена в табл. 1 и 2.

Использование способа позволит упростить и повысить эффективность эпидемических расследований при об- следовании территорий, угрожаемых по холере,

Формула изобретения

Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор, несущих гомоиммунные умеренные фаги III гетероиммунной категории, включающий накопление фага исследуемых холерных вибрионов и определение его рестрикционного профиля с помощью тест-системы рестрикции-модификации, отличающийся тем, что, с .целью упрощения способа, в качестве тест-системы используют тест-штаммы Vibrio cholerae KM-20, Vibrio cholerae eltor KM-21 и Vibrio cholerae eltor КМ-22, рестрикционный профиль фага определяют путем инкубирования фильтрата культуральной жидкости исследуемых холерных вибрионов, содержащего фаг, t каждым тест-штаммом и по чувствительности фага к тест- штаммам дифференцируют эпидемические и неэпидемические холерные вибрионы,

Таблица 1

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холеры. Цель изобретения - упрощение способа. Культуру холерного вибриона выращивают в питательной среде, фильтруют и фильтрат, содержащий фаг, используют в качестве исследуемого материала. В качестве тест-системы рестрикции-модификации применяют три штамма холерных вибрионов - КМ-20, КМ-21, КМ-22. Готовят серии разведений фильтрата и инкубируют их с каждым тест-штаммом по методу Грациа. По чувствительности фага к тест-штаммам дифференцируют эпидемические и неэпидемические вибрионы эльтор. 2 табл.

Примечание. В скобках дана абсолютная

концентрация.

Таблица 2

1(2-10)

1(24Q5)

1(4-Ю3)

1(8-Ю5)

1(4-10)1(2-Ю4)

1(3-103)

1(2-10)

1(2-Ю3)

1(1-Ю7)

1(2-Ю3)

.1(4-Ю3)

1(10)

10 10 10

-f

-з

ог

10-э

ю- ю- ю-1 ю-1 ю-1 ю-1 ю-

СГ2 л

10 10

-Э

-3

0 0

л

ю-3 ю-з

10-3 10-з

ю-3

ю-3

ю-

103

ю-3

15589 78

Продолжение табл.2

Примечание. В скобках дана абсолютная

концентрация.