Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR источник умеренного фага XI серотипа XII гетероиммунной категории Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

(46) 1.ПЗ.С .. Г,™-. w Ю

(21)4718624/13

(22)11.07.89

(71)Всесоючный научно-исследовательский противочумным институт Микроб и Ростовский научно-исследовательский противочумный институт

(72)Т.Л.Кудрякова, Л.Д.Македонова, Н Л1.Остроумова, Г.И.Коровкина, В.П.Лороч и Б.Ч, Дегтярев

(53)616.038 Г088.8)

(56)Авторское свидетельство СССР

№ 822543, кл. С 12 N 7/00,1979 (не- публик.).

Авторское спидетельствоСССР

Я 761560, кл. С 12 N 7/00,1978.

(54)ПТАНМ ГАКТЕРИЙ VFBRIO CHOLERAE ELTOR - ИСТОЧНИК УМЕРЕННОГО XI СЕРОТИПА XII ГЕТЕРОИММУННОЙ КАТЕГОРИИ

(57)Изобретение относится к микробиологии, в частности к лябораторной диагностике. Целью изобретения является дикий лизогенный неэпидемический штамм 9966 Vibrio cholerae eltor, несущий фаг ранее ННКРМ HP описанной XII гете- роиммунной категории 9966, отличающийся от фагов I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI гетероиммунных категорий спецификой иммунитета, соэ. даваемого при лизогенизации, и пригодной для усовершенствования системы Tetr-культур, применяемой в способе

фаготишфования холерных вибрионов классического и эльтор биотипов. Штамм 9966 получен из воды открытого водоема. При культивировании в бульоне Мартена (рН 7,6iO,2) при (37+1 )°С в течение (20+2) ч штамм 9966 продуцирует умеренный фаг 9966. При лизо- генизации реципиентного штамма Vib- .rio cholerae eltor 570 фаг 9966 создает специфический иммунитет. Клетки, ЛИЗОГ-ИНЫР. по фагу 9966, устойчивы к гомсшммунным флгам XII гетер чтммун- ной категории и чувстви ел н к гете- роиммуннмм фггам I-XI катего,. «и. Суб- куггьтуру 570/99С6, ли з о генною по фагу 9066, включают в систему тест-культур, несущих гетероимм шг.1е ф,1гм одиннадцати категорий и i оп- ченныч путем лизогенизацин peunn-ieHT T.ix гатаммов эльтор 485 и 570, которую ис- попьзуют для прямого фаготипирования с цепью дифференциации холер мх виб- рнонол эльтор различной -эпидемической значимости (эпидемические и не тщеми- ческие). Штамм 9966 обладает типичны- im для вида Vibrio cholerae культу- рально-морфологическими и физиологическими признаками, относится серологически к серовару Отава. Фаг 9966 относится к XI серотипу холерных фагов III морфологической группы. 1 табл.

§

(Л

а ьэ

00

Изобретение относится к микробиологии, в частности к лабораторной диагностике.

Целью изобретения яяпяетгч дикий лизогенный че мтилемич ский пттамм

9966 Vibrio cholerae eltor, несущий фаг р. пиее никем не описанием XII ге- тероиммунной категории 9966, отличающийся от фагоя I, П, I1T, IV, V, VI, VII, VITI, IX, X и Т гртергчп мУ ньгх

категорий спецификой иммунитета, создаваемого при лизогенизации, и при- годноП для усовершенствования системы тест-культур, применяемой в способе фаготипирования холерных вибрионов классического и эльтор биотипа. С помощью его искусственной лизогени- зацин реципиентного штамма Vibrio cholerae eltor 570 получают мовую тест-культуру 570/9966, которую включают в указанную систему тест-культур, благодаря чему увеличивают прО7 цент фаготипирующих штаммов холерных вибрионов эльтор при ее использовании на практике.

Характеристика типа иммунитета умерен-ного фага штампа V. eltor 9966 пр 1ведена в таблице.

Для получения такого штамма изучено 35 штаммов вибрионов эльтор.

Полученный ттамм 9966, депонированный в музее живых культур Всесоюзного иаучио-исследопательского проти- вочумногб института Микроб под номером Л 112(9966) по большинству морфологических и физиологических характеристик соответствует микроорганизмам вида Vibrio cholerae.

Культурально-мореологические признаки.

Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,3-2,2 мкм в длину и 0,2-0,3 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образует, грамотрицятельны.

На тиердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера 7,6Ј0,2) образуют через 18ч пыращи ваийя при температуре 37+1°С круглые, диаметром 3,4±0,1 ми полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром. На жидких питательных средах (бульон Мартена, 1%-ная пептонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8tO,2) через 6 ч выращивания при температуре образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности, Физиологические признаки. Тест на оксидазу положителен, разлагает до кислоты без газа маннозу, глюкозу, сахарозу, маннит, не разлагает арабпнозу, инозит, лактозу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона, ферментирует крахмал, желатину, не образует дигидролазу аргинина, образует ДРкарбоксилазы лизина и оонитнна, не р.ттет при повышен

0

5

0

5

0

35

40

45

50

55

нон (7-10%) концентрации хлорида Натрия, гемолизирует эритроциты барана по Грейгу, агглютинирует куриные эритроциты, не чувствителен к поли- миксину.

Серологические свойства.

Агглютинируется до титра холерными сыворотками О и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками RO ч Инаба.

Главным отличительным признаком от прототипа является способность спонтанно продуцировать умеренный фаг 9966 ранее неизвестной XII гетероиммунной категории, который лизирует культуры холерных вибрионов, лизогенные по фагам I-XI категорий, при лизогенизации чувствительной культуры холерных вибрионов 570 создает у нее иммунитет (резистентиость) только к фагам своей иммунной категории и фагам VI иммунной категории и не создает иммунитета к фаглм I-XI иммунных категорий. Фаг 9966 используют при получении специ- фическои тест-культуры 570/9966, применяемой для прямого фаготипирования (дифференциации по умеренному фагу) холерных вибрионов биовара эльтор различной эпидемической значимости по эпидпокаэанннм.

Умеренный фаг 9966 по электронно- микроскопической структуре относится к III морфологической группе, по серологическим свойствам принадлежит к XI серотнпу холерных фагов.,На газона индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor 570 образует типичные колонии с мутным центром, окруженным узкой зоной неполного лизиса 2,4±0,5мм н диаметре.

Ра тжожают штамм 9966 на бульоне и агаре Мартена рН 7,6±0,2, хранят в лиофилизированном состоянии.

Для получения специфической тест- культуры 570/9966 готовят фильтрат (фильтрацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37°С штамма 9966 и в количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста индикаторного штамма 570 и 5,0 мл 0,7% аглра Мартена (расплавленного и охлажденного до Д5°С), перемешивают и вылипают на 27, агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть и инкубируют 18ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную ко- лонию фага. Уколом платиновой иглы в

5

центр негативкой колонии забирают фагорезнстентные вибрионы и переносят в пробирку с 1,0 мл бульона, из которого готовят десятикратные разведения в бульоне. Из каждого разведения высепают на агаровые пластинки в чашках Петри по О,1 мл и распределяют шпателем по поверхности агара. Через 13 ч инкубирования при 37°С на поверхности агара обнаруживают изолиХарактеристика типа иммунитета умеренного фага штамма V.eltor 9966

Примечание: плюс - культура чувствительна к фагу;

нинус - культура резистентна к Фагу.

1623205

рованные колонии л изо генных по фагу 9966 клонов штамма 570, отбор которых ведут по известному методу.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor KM 112 9966, источник умеренного фага XI серотипа XII гетеронммун- ной категории.