Способ получения иммобилизованной уреазы Советский патент 1988 года по МПК C12N11/14 

00

00

00

Изобретение относится к биотехнологии, касается иммобилизации уреазы и может быть использовано при определении мочевины.

Цель изобретения - увеличение стабильности иммобилизованной уреазы при хранении.

Способ заключается в том, что к иммобилизованной на углях СКН уреа- зе из Staphylococcus saprophyticus добавляют стероидные гликозиды - капсикозид или мелангозид в 4-5-кратном по отношению к белку фермента весовом избытке. На нативную уреазу гликозиды не оказывают стабилизирующего действия, тогда как у иммобилизованной уреазы в их присутствии увеличивается стабильность при хранении Вероятно, адсорбированные на углях гликозиды изменяют микроокружение уреазы, что приводит к стабилизации фермента. При хранении полученного по предлагаемому способу препарата уреазы в течение 87-153 дней не происходит потери активности, тогда как в отсутствие гликозидов активность ферментов полностью исчезает.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Способ иммобилизации уреазы на углях СКН осуществляется следующим образом. Смесь уреазы в буфере (0,06 М Na-фосфатном рН 6,8) при 0°С перемешивают на шут- теле с углем CKIio- Затем многократной промывкой полученного препарата удаляют неадсорбировавшуюся уреазу.

К 100 мл иммобилизованной на угля СКНр уреазе из Staphylococcus зарго

phyticus (активность 60 ед/г) добавляют 5 мг- капсикозида (соотношение белок уреазы:капсикозид 1:5, см.таблицу № 1) в 2 мл 0,06 М Na-фосфатног буфера, рН 6,8 и 300 мг азида натрия Плотно закрытые колбы помещают в холодильник () . Через 87 и 153 су в отобранных пробах определяют уреаз ную активность и сопоставляют ее с исходной активностью. Уреазную активность определяют при 37°С, инкубируя в течение 30 мин при встряхивании 20 мг иммобилизованной уреазы с 0,5 м 3%-ного раствора мочевины в 0,5 мл 0,06 М фосфатного буфера, рН 6,8. За единицу активности принимают та- кое количество белка фермента, которое катализирует образование 1 мкмол аммиака за 1 мин при 37 С. Через

0

5

0

5

0

5

87 сут хранепия сохраняется 114% исходной активности, а через 153 сут - 150%, т.е. наблюдается повышение активности исходной уреазы.

Пример 2, Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только в качестве гликозида используется мелонгозид (таблица № 1). Через 87 и 153 сут хранения сохранялась 100% исходной активности.

Примеры Зи4. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только соотношение белок уреазы: гликозид 1:4 (таблица № 2).

Примеры 5-8. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только соотношение белок уреазы:гликозид 1:3, 1:6 (таблица № 3 и № 4). Примеры иллюстрируют нецелесообразность осуш,ествления способа при данном соотношении.

Примеры 9-12. Порядок вы- лолнения операций аналогичен примеру 1. Только активность иммобилизованной на углях СКНр уреазы 40 ед/г носителя, соотношение белок уреазы: гликозид 1:5, 1:4 (таблица № 5 и № 6).

Примеры 13-16. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только активность иммобилизованной на углях CKHp уреазы 40 ед/г носителя, соотношение белок уреазы: гликозид 1:3, 1:6 (таблица № 7 и 8). Примеры иллюстрируют нецелесообразность осуществления способа при данном соотношении.

Примеры 17-20. Порядок выполнения операций аналогичен примеру 1. Только активность иммобилизованной на углях СКНд уреазы 30 и 70 ед/г носителя (таблица № 9 и 10). Примеры иллюстрируют нецелесообразность осуществления способа при данной активности иммобилизованного пре парата.

Результаты сведены в таблицу.

Таким образом, предлагаемый способ получения иммобилизованной на углях CKHjj уреазы позволяет получить препарат, сохраняющий при хранении в течение 153 сут 100% исходной активности при использовании мелонгозида и увеличить активность до 150% при использовании капсикозида, тогда как в известном способе за такой срок хранения активность уреазы снижается до нулевых значений. Увеличение сроков

хранения позволяет эффективно использовать препарат уреазы в биотехнологии.

Формула изобретения

Способ получения иммобилизованной уреазы, заключающийся в связывании уреазы, выделенной из Staphylo

coccus saprophyticus,с окисленным углем СКН(,, отличающийся тем, что, с целью увеличения стабильности целевого продукта при хранении, после связывания уреазы с углем к полученному препарату добавляют кап- сикозид или мелонгозид в 4-5-кратном избытке по отношению к количеству белка уреазы по массе.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении иммобилизованной уреазы. Цель изобретения - увеличение стабильности иммобилизованной уреазы при хранении. Способ заключается в том, что к иммобилизованной на окисленном угле СКНд уреазы из Staphylo- COCCUS saprophyticus добавляют 4-5- кратный по отношению к белку фермента избыток капсикозида или мелонго- зида. Гликозиды, адсорбированные на угле, стабилизируют фермент, который не теряет активности при хранении в течение 5 мес. 1 табл. с (Л