ШТАММ БАКТЕРИЙ SALMONELLA DUBLIN 160, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ТЕЛЯТ Советский патент 1995 года по МПК C12N1/20 A61K39/112 C12N15/00 C12R1/42 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов.

Целью изобретения является создание нового штамма, который хорошо приживается в организме животных и обладает сниженной токсичностью.

Штамм бактерий Salmonella dublin получен путем обработки исходного штамма С-96 мутагеном. Штамм депонирован в коллекции ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича под N 160 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Грамотрицательная палочка на плотных средах: МПA, минимальная среда с глюкозой, агар Хоттингера, колонии в S-форме, средних размеров правильной округлой формы с ровными краями через 18 ч роста при 37^оС. На жидкой среде (МПБ) равномерное помутнение через 4-6 ч. На полужидком агаре диффузный рост через 18 ч.

Физиолого-биохимические признаки. Оптимум температуры роста и рН типичный для сальмонелл. Не образует индол. Продуцирует сероводород, не дезаминирует фенилаланин, декарбоксилирует орнитин и лизин, не декарбоксилирует аргинин. Не утилизирует лактозу, сахарозу, раффинозу, адонит, инозит. Сбраживает с образованием кислоты и газа глюкозу, сорбит, мальтозу. Замедленно (на 24 ч позже родительского штамма) сбраживает рамнозу, маннозу, утилизирует агар на среде Симменса, глицерин на бульоне Штерна. Ауксотрофность никотиновая кислота, 50 мкг/мл.

Серологические свойства. Агглютинируется "0" сыворотками 1, 9, 12; "Н" сыворотками gP, P. Отношение к фагу Р₂₂ чувствителен, образует ясные бляшки. Остаточная вирулентность для белых мышей массой 12-14 г; ЛД₅₀ 3,2х10⁷ клеток при внутрибрюшинном введении.

Энтеротоксигенная активность отсутствует.

Иммуногенность. ЕД₁₀₀ 10₂² клеток при внутрибрюшинном введении и ЕД₅₀ 10⁷ клеток при пероральном введении защищают белых мышей массой 12-14 г от инфекции, вызванной 10ДС исходного вирулентного штамма.

Приживаемость в организме. Персистирует в организме мышей в течение 40 дней.

Стабильность. В результате 5-кратных последовательных пассажей штамма S. dublin 160 через оpганизм мышей его вибрулентность не повышается.

Измерение внутриклеточного уровня ц-АМФ показывает, что штамм 160 имеет 16 пикомМ/2˙10¹⁰ клеток.

Генетически показано, что мутант S.dublin 160 обладает супрессированной мутацией суа (п-АМФ-дефицитностью, восстанавливаемой экзогенным ц-АМФ), которая котрансдуцируется с частотой 2% совместно с локусом ilv. Супрессия выражается в способности замедленно утилизировать рамнозу, цитрат, глицерин, маннозу, которая восстанавливается добавлением экзогенного ц-ГМФ и повышенной чувствительности к экзогенному ц-АМФ.

Использование штамма S.dublin 160.

П р и м е р. Штамм S.dublin С-44 выращивают 18 ч на матрасах с МПа, с которых делают смыв бактериальной массы стерильным обезжиренным молоком. Бактериальную суспензию разливают дозатором в стерильные ампулы и лиофильно высушивают. Перед употреблением содержимое ампулы растворяют в физиологическом растворе до требуемой концентрации по стандарту мутности. Каждая ампула содержит 200 млрд микробных тел.

Иммунизирующую дозу разводят молозивом, которое дают выпить теленку, после чего теленку еще спаивают 1 л молозива (молока). Двукратная иммунизация с интервалом в 3 дня перорально дозами по 100 млрд микробных тел не оказывает болезнетворного влияния на телят.

Для оценки иммуногенных свойств вакцины из штамма S.dublin 160 в отношении телят, у иммунизированных вакциной телят определяют количество Т-лимфоцитов в крови. Контрольную группу (24 теленка) составляют телята, которым вместо вакцинного препарата в молозиво добавляют физиологический раствор. Перед вакцинацией уровень Т-лимфоцитов в крови телят составлял 31 ± 1,32% Вакцинацию производят перорально двукратно дозой 100 млрд микробных тел с интервалом 3 дня. Через 8 дней после первой иммунизации уровень Т-лимфоцитов в крови контрольных телят составляет 33 ± 2,2% а в крови иммунизированных телят (16 голов) 45 ± 2,3% Через 2 мес после иммунизации в контрольной группе уровень Т-лимфоцитов составляет 35 ± 1,3% а в группе вакцинированных животных 47 ± 2,5%
Данные по вирулентности и иммуногенности штамма представлены в таблице.

Таким образом, введение вакцины штамма S.dublin 160 активизирует клеточный иммунитет у телят на протяжении 2 мес.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при производстве вакуумносывороточных препаратов. Цель изобретения повышение выхода биомассы и сокращение времени культивирования. Питательную среду для культивирования Legionella pneumohpila готовят следующим образом: 8-10 г сернокислотного гидролизата рыбной кормовой муки; 0,8-1,2 г KH₂PO₄ и 0,7-1,0 г K₂HPO₄ растворяют в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят 2-3 мин. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при 121°С 15 мин. Водный раствор L-цистеина стерилизуют отдельно и добавляют к среде в количестве 0,2-0,4 г/л среды, pH 6,9-7,0, содержание аминного азота 55 мг(% ). За 32-36 ч культивирования накапливается 1,3·10¹⁰-1·10¹² КОЕ/мл. 1 табл.

Штамм бактерий Salmonella dublin 160 (Коллекция ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича), используемый для изготовления вакцины против сальмонеллеза телят.