Штамм бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII - продуцент рестриктазы Р S @ I Советский патент 1989 года по МПК C12N1/14 C12N9/14 C12R1/01 

не образуется. Тесты на метиловьш красный и феиилаланиндеаминазу положительные, а орнитиндекарбоксилазу и реакцию Фогес-Проскауэра - отрицательные. Индол образуется, а сероводород не образуется. Строгие аэробы. Культуральные признаки. Штамм растет на твердой питательной среде, содержащей 3,5% агара сухого питательного и воду, при 35-37 С в течение 16-18 ч.

Рост штамма Providencia stuartii (17) ВКПМ В-4076 умеренный, штрих четковидный. Характер края колоний гладкий, блеск поверхности колоний матовый, характер поверхности - гладкий .

Профиль штриха - выпуклый. По оптическим признакам колонии являются опаковыми, т.е. не проеве- -чиваюидамися.

Штамм Providencia stuartii 17 имеет специфичный запдх, колонии этого штамма по консистенции являются маслянистыми.

Хорошо растет на жидкой питатель ной среде, содержащей рыбный гидрали зат 50 г/л; воду до 1,0 л, рН 7,2 - 7,4. На такой питательной среде штамм растет при 35-37 С в течение 5-6 ч.

При.вырагдавании 1чтамма на питательной среде данного состава происходит помутнение среды, что свидетельствует о сильном росте культуры. Рост глубинный и пленки на поверхности не образуется. Осадок, состоящий из клеток Providencia stuartii 17 тягучий, при воздействии на него ли- зоцимом быстро происходит лизис клеток. Количество осадка обильное,цвет осадка - светло-серьот.

В отрличие от известного предлагаемый штамм дает выход рестриктазы Pst 1 40000-45000 ед/г биомассы или 300000-400000 ед/л культуральной ; жидкости; имеет высокую стабильность а именно: сохраняет способность- про ду1дировать фермент при хранении не менее 5 лет без селекционной работы. При выра1цивании культуры на питательной среде известного.состава рН 7,4; температуре 37°С; аэрации 40 л/мин ферментацию ведут до достижения значения рН 8,0. Выход биомассы: 7,5-8,0 г/л культуральной жидкости. Выход рестриктазы Pst 1,:

20000-22500 ед/г биомассы; 150000 - 180000 ед/л культуральной жидкости. Сравнение стабильности содержания рестриктазы Pst 1 при хранении представлено в таблице.

0

5

0

5

0

5

0

Пример Г. Для получения

штамма с высоким содержанием рестриктазы Pst Г велась непрерьшная селекционная работа с отбором вари- 5 антов, имеющих высокую продуктивность рестриктазы Pst 1.

Селекция велась в чашках Петри по твердой среде, содержащей 3,5% агара cyxofo питательного и воду.

Проверка продуктивности штамма Providencia stuartii 17 ВКПМ В-4076, ползд1енного селекционным путем, велась в сравнении со штаммом Providencia stuartii (164) ВКПМ В-1789, . которьй апробирован в производственных условиях.

Готовят среду следующего состава, г /л:

Рыбньй гидролизат 50

Вода1 ,0

Оживление штамма Providencia stuartii ВКПМ В-4076 осуществляют на сухом питательном агаре (сухой питательный агар 35 г/л, вода 1 ,0 л) в чашках Петри. Инкубируют в термокамере при З7 с в течение 18 ч.

С поверхности агара в чашках Петри культуру переносят бактериологической петлей в качалочные колбы с питательной средой данного состава, рН 7,4.

Выращивают посевной материал при 37°С в течение 18 ч на качалке.

Ферментацию культуры проводят на питательной среде данного состава при рН 7,4; температуре 37 С; перемешивании 200 об/мин; подаче воздуха - 2 объема воздуха на 1:объем питательной среды,выращивают до дос5 1472493о

тижения оптической плотности бакте-В-4076 по сравнению с известным спориальной суспензии 1,5 опт. ед. (ФЭК,собой выход рестриктазы Pst 1 возф.ильтр № 6, кювета 0,5 см).растает с 400-600 ед/г биомассы до

Выход биомассы: 7,5-8,0 г/л куль-40000-А5000 ед/г. туральной жидкости.

Выход рестриктазы Pst I 40000 -Формула изобретения 45000 ед/г биомассы; 300000

400000 ед/л культуральной жидкости.Штамм бактерий Providencia stuarТаким образом, при использовании ™ В-4076 - продудент рестрикштамма Providencia stuartii ВКПМтазы Pst 1 .

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой штамм, который используется для получения рестриктазы PST 1. Цель изобретения - получение нового штамма, обладающего более высоким уровнем синтеза рестриктазы. Предлагаемый штамм PROVIDENCIA STUARII 17 ВКПМ В-4076 дает выход рестриктазы PST 1 4000-45000 ед/г биомассы или 300000-400000 ед/л культуральной жидкости и имеет высокую стабильность, а именно сохраняет способность продуцировать фермент при хранении не менее 5 лет без селекцционной работы. В результате использования предлагаемого изобретения выход рестриктазы PST 1 возрастает с 400-600 ед/г биомассы до 40000-45000 ед/г биомассы или с 3000-4800 ед/л культуральной жидкости до 300000-400000 ед/л культуральной жидкости. 1 табл.