Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный для идентификации R--плазмид Советский патент 1989 года по МПК C12N15/00 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации R-плазмид у природных штаммов энтеробактерий, а также в - эпидемиологических исследованиях в качестве эпидемиологического маркера.

Цель изобретения - расширение диапазона идентификации природных R- плазмид.

Сущностью изобретения является выявление R-плазмиды, принадлежащей к группе несовместимости X.

Плазмида была обнаружена у штамма S,sonnei, выделенного от больного острой дизентерией, и получила обо- значение pKMR 242-2. Учитьюая патогенность данного штамма, плазмиду передали в штамм E.coli KI2l53Nal путем конъюгациоиного скрещивания. Штамм депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер В-3351. Штамм с плазмидой может быть использован для идентификации R-плазмид в эпидемиологических исследованиях и в генно-инженерных работах.

Свойства.выявленной плазмиды установлены с использованием генетических, физико-химических и микробиологических методик. Возможность использования плазмиды для идентификации R-плазмид у диких штаммов энтеробактерий апробирована в случае идентифиЗь

vl

СО

сл

с&

кации R-факторов, обнаруженных у дизентерийных больерий, выделенных от больных.

Морфологические признаки.

Клетки имеют вид прямых палочек величиной 1,5-3,0 х 0,3-0,5 мкм, слабо подвижны перитрихи, спор и капсул -не образуют, грамотрицательны.

Культуральные признаки. На мясо- пептонном агаре колонии слегка выпуклые, полупрозрачные, с ровными краями, диаметр колоний 1-3 мм, на кровяном МПА круглые колонии без зоны гемолиза, полупрозрачные, на среде Эндо круглые колонии, окрашенные в темно-красный цвет с металлическим блеском, на голодной среде с метиони- ном и пролином плоские, полупрозрачные колонии размером 1-3 мм (ауксо- троф по метионину и пролину),на мясо- пептонном бульоне образует равномерное помутнение и осадок.

Физиологические признаки. E.coli В-3351 не образует оксидазу, расщеп- лпет глюкозу с образованием кислоты и газа, ферментирует арабинозу, лактозу, мальтозу, маннозу, сорбит, ксилозу, восстанавливает нитраты в нитриты, дает положительную реакцию с метиловым красным, не ферментирует сахарозу, дульцит, мнозит, не усваивает цитрата натрия, не обладает уре- азной активностью, не образует аце- тилметилкарбинола.

Генетические особенности. Штамм В-3351 имеет хромосомную устойчивость к налидиксовой кислоте, ауксо- троф по метионину и пролину. Плазми- да наделяет клетку-хозяина устойчи- востыо к тетрациклину и хлорамфенико- лу (20С мкг/мл), является конъюга- тивной. Частота передачи 1,. Плазмида pKMR 242-2 не наделяют клетки-хозяина чувствительностью к до норспецифическим фагам MS2, Јd, Ј1, Qp,,(u2,Ifl, IRe, PR4, имеет Fi -фено- тип.

Физико-химические свойства. Молекулярная масса плазмидной ДНК 50-Ю6 пШ.

Пример. Отношение вновь выявленных плазмид к группе несовмести

0

п 5

0

мости X изучали по методу Datta. Перенос второй плазмиды в клетки микроорганизмов, несущих одну (резидентную) плазмиду, осуществляли при помощи конъюгационного скрещивания. Селекцию трансконъюгантов проводили на среде Эндо по хромосомному маркеру реципиента и неперекрывающимся маркерам донорной плазмиды. На среде Эндо с антибиотиками расчищали до 10 клонов-потомков, а затем не менее 30 клонов проверяли на свойства, характерные для каждой из плазмид, В том случае, если произошла элиминация резидентной плазмиды, проводили повторную проверку в противоположном направлении.

При скрещивании штамма E.coli С600 Rif с плазмидой R6K ApSm со штаммом E.coli I 53Nal, несущим исследуемую плазмиду с фенотипом ApSmTc, создавали селективную среду ApNal. Установить произошла ли элиминация какой-либо плазмиды оказалось невозможным, так как вводимая и резидентная плазмиды имеют сходный фенотип. Чтобы провести этот опыт в качестве известной плазмиды использовали штамм, несущий плазмиду pKMR 242-2 с фенотипом ТсСт, Скрещивали штамм E.coli С 600 Rif с плазмидой pKMR 242-2 ТсCm со штаммом E.coli 53Nal, несущим исследуемую плазмиду с фенотипом ApSmTc, Для селекции трансконъюгантов создавали селективную среду Эндо с антибиотиками TcCmNal. Получили трансконъюганты с фенотипом TcCmNal, т.е. фенотип резидентной плазмиды утратился вследствие элиминации ее, Следовательно} эти две плазмиды являются несовместимыми.

Таким образом, использование данного штамма позволяет установить принадлежность исследуемых R-плазмид к группе несовместимости X.

Формула изобретения

Штамм бактерий Escherichia coli ВКП М В-3351, предназначенный для идентификации R-плазмид,

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации R-плазмид у природных штаммов энтеробактерий, а также в эпидемиологических исследованиях в качестве эпидемиологического маркера. Целью изобретения является расширение диапазона идентификации природных R-плАзМид. Штамм получен путем трансформации в стандартный штамм E.COLI K12J53 плАзМиды PKMR 242-2. Плазмида первоначально обнаружена в штамме SHIGELLA SONNEI и пОлучилА ОбОзНАчЕНиЕ PKMR 242-2. Плазмида наделяет клетку-хозяина устойчивостью к тетрациклину и хлорамфениколу (200 мкг/мл), является конъюгативной, частота передачи 1,5х10^-5. pKMR 242-2 не наделяет клетки-хозяина чувствительностью к фагам, специфическим в отношении 1пс-групп F,I,N,P, способна ингибировать фертильность (FI⁺). Молекулярная масса плазмидной ДНК 50Х10⁶ MD. Изученная плазмида относится к группе несовместимости X.