Способ получения зимозана Советский патент 1989 года по МПК C12P19/04 

Изобретение относится к биот .хно- логии, а именно к способу получения зимозана, который находит применение в иммунологии и медицине для определения уровня пропердина в сыворотке крови.

Цель изобретения - увеличение выхода и повышение активности зимозана.

Способ осуществляют следующим образом.

Дрожжи в виде водной суспензии инкубируют при 35-55 С в течение 1-7 сут. В этих условиях происходит процесс лизиса клеток с помощью их ферментативных систем с накоплением в осадке зимозана. При времени инкубации, большем или меньшем указанного интервала, и температуре ниже

35 С выход зимозана снижается. Увеличение температуры инкубации приводит к дезактивации ферментативных систем, и зимозан не образуется. Длительность процесса более 7 сут нецелесообразна, так как не приводит к дальнейшему увеличению выхода и активности зимозана. По окончании инкубации суспензию подкисляют до рН 3 и фильтруют через сульфокатио- нит. Зависимость выхода зимозана от режима инкубирования представлена в табл.1.

После пропускания через сульфо- катионит суспензию центрифугируют, осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой.

Для испытания зимозана в качестве иммунологического агента образцы.

полученные по предлагаемому способу, фирмы Сигма (США) и Реахим Г.Олайне (СССР) подвергаются кипячению на водяной бане в течение 1 ч и 6-8- кратному центрифугированию при 10000 g в забуференном физиологическом растворе.

Полученный реагент добавляют к сыворотке крови человека до концент-

рации 2 мг/мл. Смесь инкубируют 1 ч при 37°С, после чего реагент удаляют центрифугированием 20 мин при 5000 g. О степени активации пропердинового комплемента судят по его остаточной активности и путем определения им- мунохимическим методом образовавшегося белка С За. Результаты 1спытани в сравнении с имеющимися коммерческими препаратами представлены в табл„2.

Пример 1. В промытый и про- стерилизованный аппарат заливают 250 мл дистиллированной воды, загружают 1 кг свежих прессованных пекарских дрожжей, инкубируют при 35 С в течение 7,0 сут при непрерывном перемешивании.

По окончании времени инкубации водную суспензию подкисляют до рН 3 и пропускают снизу вверх через колонку с катионитом КУ 2x8 в Н -форме (1,9x10,5 см) со скоростью 75 мл/ч.

Нерастворимый зимозан, прошедший через колонку, отделяют от элюата центрифугированием в течение 10 мин при 10000 об.мин. Препарат промывают 5 раз 96%-ным этиловым спиртом (2л), экстрагируют в экстракторе Соксклета 8 ч абсолютным спиртом, сушат на вакуумсушилке.

Из 1 кг прессованных дрожжей получают 83 г зимозана, что составляет 33,3% в пересчете на сухие дрожжи.

Т

5

0

5

0

0

5

5

П р и м е р 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, но инкубацию ведут при 55 С в течение 1 сут.

Выход зимозана 68 г, что составляет 27,2% в пересчете на сухие дрожжи.

ПримерЗ. В промытый аппарат заливают 60 мл дистиллированной воды, загружают 250 г прессованных некондиционных пекарских дрожжей, содержащих 65% дрожжей Candida micoderma, и инкубируют 36 ч при 48°С и непрерывном перемешивании. Последующую обработку проводят согласно примеру 1. Получают 21 г зимозана, что составляет 33% в пересчете на сухие дрожжи.

П р и м е р 4. Способ осуществляют согласно примеру 1, но инкубацию ведут в течение 1,5 сут при 50°С, а в качестве сульфокатионита используют Амберлит ИР-120.

Выход зимозана 85 г, что составляет 34% в пересчете на сухие дрожжи.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет более чем в 10 раз увеличить выход зимозана и более чем в 2 раза сократить время получения. Активность полученного препарата на 5-10% выше известных коммерческих препаратов.

Формула изобретения

Способ получения зимозана, предусматривающий лизис дрожжевых клеток с последующим вьщелением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода зимозана и ускорения процесса, лизис дрожжевых клеток осуществляют путем инкубации водной суспензии дрожжей при температуре 35-55 С в течение 1-7 сут, а выделение целевого продукта проводят фильтрацией суспензии через сульфокатионит.

ц а 1

б л и

Таблица2

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения зимозана из дрожжей. Цель изобретения - увеличение выхода зимозана и ускорение процесса получения. Водную суспензию дрожжей инкубируют при температуре от 35 до 55°С в течение 1-7 сут. После инкубации суспензию пропускают через колонку с сульфокатионитом, центрифугируют. Полученный осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой. Выход зимозана составляет 34% в пересчете на сухие дрожжи. 2 табл.

Сыворотка

крови

Зимозан

Реахим Зимозан

Сигма Зимозан по предлагаемому способу

3

30

35

38