Способ получения пептидов Советский патент 1989 года по МПК C07K5/93 A61K38/06 

Изобретение относится к способу получения пептидов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - получение новых пептидов - малотоксичных соединений, обладающих более высокой иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью.

Пример 1 .- Ы-Гептаноил-1 - -гамма-глутамил-глицил-П-аланин

(R,-CH,(CH)5, Rt - Н

D

. И Rj - -NHCH(CHj)COjH).

А. К-Гептаноил-О-гамма-глутамил (альфа-бензиловый эфир)-глицин.

К раствору 897 мг (13,0 ммоль) глицина и 1,3 г (13,0 ммоль) триэтил- амина в 10 мл воды добавляют 5,0 г (11,2 ммоль) Н-гептаноил-В-гамма-глу- тамил(альфа-бензиловый эфир)-окси- сукцинимидного эфира в 100 мл диок- сана. Полученную реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 80 ч. Этот раствор затем выливают в 300 мл этилацетата, отделенную органическую фазу промывают 10%-ной хлористоводо-. родной кислотой, водой и раствором

ел

о ю

N9

СМ

3150

рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума до сухого состояния. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэти-- лового эфира и фильтруют под слоем азота 3,43 г (выход 74%).

В. М-гептаноил-В-гамма-глутамил- -глицил-О-аланин.

К раствору 2,0 г (4,78 ммоль) Н-гептаноил-0-гамма-глутамил(альфа- -бензиловый эфир)-глицина. 1,75 г (5 ммоль) соли паратолуолсульфокис- лоты сложного бензилового эфира D-аланина, 506 г (5 ммоль) триэтил- амИна и 675 мг (5 ммоль) 1-оксибен- зотриазола в 100 мл тетрагидрофурана добавляют 3,03 г (7,17 ммоль) 1-цик- логексил-3-(2-морфолиноэтш1)карбоди- имидного мета-п-толуолсульфоната. Эту реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч и выливают в 300 мл этилацетата после чего органическую фазу отде- ляют и промывают 10%-ной хлористоводородной кислотой, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом маг ния и концентрируют в условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота 2,7 г. 2 г твердого вещества в 75 мл метанола с 400 мг 10%-ной гидроокиси палладия на древесном угле взбалтывают в атмосфере водорода при начальном давлении, равном 50 фунтам на 1 кв.дюйм в течение 4 ч. Катализатор фильтруют фильтрат выпаривают при пониженном давлении, после чего остаток растворяют в воде и лиофилизируют с обра- зовайием 1,23 г (выход 90%) целевого продукта в виде белого твердого ве- щества. Полученное сое 1инение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроско- пии.

Пример 2. Н-Гептаноил-В- -гамма-глутамил-глицил-глицин

{R 1 - СНз(СНг); Rj - Н

и RJNHCH CO H),

А. Сложный оксисукцинамидный эфир Ы-гептаноил-В-гамма-глутамил (альфа-бензиловый эфир)-глицина.

5 0 5 0 с о г

0

К холодному раствору () 13,0 г (31 ммоль) Ы-гептаноял-О-гамма-глу- тамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина и 3,91 г (34 ммоль) N-оксисукцинами- да в 400 мл тетрагидрофурана добавляют 7,0 г (34 ммоль) дицикпогексил- карбодиимида. Эту смесь оставляют для перемешивания при в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 18 ч. Твердые вещества фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота с образованием 15,4 г (98%) целевого промежуточного продукта.

В. Ы-Гептаноил-П-гамма-глутамил-ГЛИЦШ1-ГЛИЦИН

К 2,0 г (3,07 ммоль) сложного ок- сисукцинимидного эфира N-гептаноил- -D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина в 100 мл диоксана добавляют 446 мг (5,95 ммоль) глицина и 0,55 мл (3,9 ммоль) триэтиламина в 10 мл воды. Полученную реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 13 ч. Этот раствор выливают в 100 мл этилацетата, после чего органический слой промывают 2,5%-ной хлористоводородной кислотой, водой и раствором рассола. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют до сухого состояния. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота с образованием 1,7 г белого твердого вещества. 1,5 г твердого вещества в 75 мл метанола, содержащего 200 мг 10%-ной гидроокиси палладия на древесном угле, встряхивают в атмосфере водорода при давлении 50 фунтов на 1 кв.дюйм в течение 3 ч. Катализатор фильтруют, фильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток растворяют в воде и лиофилизируют с образованием 1,12 г (выход 90%) целевого продукта. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.

Пример 3. Ы-Гептанол-П-гам- ма-глутамил-глицил-В-серии

(RT - СНз(СНг) j; Кг - Н и Rj - -NHCH(CH,OH)).

5

Используя в качестве исхойньтх пдуктов 2,0 г (3,98 ммоль) сложного оксисукцинамидного эфира N-гепта- ноил-D-гамма-глутамил(альфа-бензил вый эфир)-глицина, 780 мг (4,02 ммо О-бензил-О-серина и 0,556 мл (4,02 ммоль) триэтиламина при выпонении процедуры, описанной в примере ЗВ, получают 902 мг (выход 76%) целевого продукта, т.пл. 130-132 0 Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.

Пример 4. К-Гептаноил-О- -гамма-глутамил-глицил-В-альфаамин масляная кислота (R, - CH.(CH)j;

ВЦ - Н и RJ --NHCH(CHjCH3)COjH) .

Повторяют процедуру, описанную примере ЗВ, сиспользованием в качестве исходных продуктов 2,0 г (3,98 ммоль) сложного N-гептаноил- -D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицилоксисукцинамиднога эфира, 400 мг (4,02 ммоль). D-альфа- -аминомасляной кислоты и 0,556 мл (4,02 ммоль) триэтиламина, в резултате чего получено 632 мг (выход 57%) целевого продукта, т.пл. 140- 141 С. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.

Пример 5. Ы-Гептаноил-О- -гамма-глутамил-глицил-3-аминопро- пионовая кислота (R , - CH3(CH2)j , R - Н и R 3- -NH(CH,),CO,H).

При выполнении процедуры, опи- сануой в примере ЗВ, с использованем в качестве исходных продуктов 1,5 г (3,0 ммоль) сложного оксисукцинамидного эфира М-гептаноил-В-га ма-глут.амил (альфабензиловый эфир)- -глицина, 350 мг (3,9 ммоль) 3-ами пропионовой кислоты и 0,55 мл (3,9 ммоль) триэтиламина, получено 500 мг (выход 43%) целевого продук та, т.пл. 135-138°С. Соединение охрактеризовано с помощью ЯМР-спектрскопии.

Пример 6. Ы-Гептанонл-П- -г.амма-глутамил-глицил-4-аминомас- ляная кислота (R ,- CH,(CH)5i R, - Н и R J - -NH(COj) ) .

Повторяют процедуру, описанную в примере 6, при замене -З-аминопро пионовой кислоты на 410 мг (4,0 ммо 4-аминомасляной кислоты, в результате чего получено 600 мг (выход 50%) целевого продукта, т.пл. 140- . Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.

0

П р и к е р 7. К-Гептаноил-О- -гамма глутамил-глицил-5-амин( пента- новая кислота (R , - CH3(CH,)j-, К, - Н и R J - -НН(СН,)/СОгН) .

В результате замены 3-аминомасля- ной кислоты 470 мг (4,0 ммоль) 5-ами- нопентановой кислоты и выполнения процедуры, описанной в примере 6,получено 520 мг (выход 42%) целевого продукта, т.пл. 122-124 0. Соедине- . ние охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.

Пример 8. Н-Гептаноил-О- 5 -гамгма-глутамил-глицил-6-аминогекса- новая кислота (R, - CHj(CH)fi Rj-H и Rj - -NH(CH,)).

Снова повторяют процедуру, описанную в примере 6, с заменой 3-амино- 0 масляной кислоты 530 мг (4,0 ммоль) . 6аминогексановой кислоты, в результате чего получено 520 мг (выход 40%) целевого продукта в виде белой , пены. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.

Проведены биологические исследования соединений, полученных предлагаемым способом, и соединений сравнения на мышах Balb С, зараженных Kleb- siella, вызывающих пневмонию. Результаты прив едены в таблице, где указан метод введения испытуемых соединений, процент выживания, т.е. процент животных, выживших при введении испытуемых соединений, и плацебо, т.е. процент животных, выживших в случае, когда проперат не вводился.

5

0

5

Испытуемые соединения вводились за 24 ч в указанных дозах перед заражением и в указанных дозах во время заражения. Испытания проводились в сравнении с известным соединением FK-156. Что касается токсичности,то в испытуемьВс дозах предлагаемые соединения не проявляли таковой, их

можно отнести.к категории малотоксичных соединений.

Проведенные испытания показали, что предлагаемые соединения малотоксичны и обладают более высокой иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью, повышая выживаемость мьшей Balb С Klebsiella, вызывающей пневмонию.

55

Формула изобретения

Способ получения пептидов общей формулы

9

D /COOH

CH t

I

0

и

(CH7)7CONHCHC-R3 .

де R - C,-Cj-алкил R - водород;

R. - остаток аминокислоты формулы

. О

-I H-CH-CCH VCOOH I

X

где X - водород, С, кил или оксиметил , п 0...4, целое число,

тличающийся тем, что

оединение общей формулы

R.CONH /СООЯц О

5(pH2)2CONHCHC-OH

R,

где К и R имеют указанные значения;

R - бензил,

10 в виде сукцинимидного эфира подвергают дегидратирующему взаимодействию с соединением формулы

15

D H2NCH-(CH)nCOOH

X

где X и п имеют указанные значения, с последующим в случае необходимости избирательным удалением защитных групп путем гидрогенолиза над окисью палладия.

Изобретение касается пептидов , в частности, получения соединений общей формулы 1: R₁-C(O)-N H-CHK-C(O)OH, где K--(CH₂)₂-C(O)NHCHR₂-C(O)R₃

R₁-C₁-C₆ - алкил

R₂-H

R₃ - остаток аминокислоты: -NH-CHX-(CH₂)_N-C(O)OH

X - H, C₁-C₂ - алкил, оксиметил

N=0-4, обладающих иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и менее токсичных веществ указанного класса. Синтез ведут дегидратацией соединения формулы 2: R₁C(O)NH-CHY-C(O)OR₄, ГДЕ Y--(CH₂)₂-C(O)NH-CR₂H-C(O)OH

R₁ И R₂ СМ.ВЫШЕ

R₄- БЕНЗИЛ, В ВИДЕ СУКЦИНИМИДНОГО ЭФИРА С ПОМОЩЬЮ СОЕДИНЕНИЯ ФОРМУЛЫ 3: NH₂-CHX-(CH₂)_N-C(O)OH, где N и X см.выше, с последующим при необходимости избирательным удалением защитных групп путем гидрогенолиза над окисью алюминия. Новые вещества малотоксичны и обеспечивают выживаемость от пневмонии (у мышей) до 100%. 1 табл.

RjCONH D COjRij

L (CHi )2CONHCHCOR3 RI