Способ определения белка в листьях растений Советский патент 1989 года по МПК A01G7/00 G01N33/48 

Изобретение относится к биологическим исследованиям, а именно к определению белка в свежих листьях селектируемых растений, и может быть использовано в растениеводстве.

Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Приготавливают биуретовый реактив, для чего в 0,2 н. (0,8%) растворе щелочи растворяют 9 г К, Na винокисло- го и 3 г сернокислой кеди (CuSO) В 10 мл этого раствора растирают в ступке навеску пробы 0,1 г листьев до мазеобразного состояния. Затем

эту смесь центрифугируют при 8000 об/мин в течение 1-2 мин. Полученный раствор зеленого цвета фотометрируют при синем светофильтре (длина волны 430± 10 нм). Процентное содержание белка в листьях рассчитывают по формуле

X D 20,

где D - показатель оптической плотности;

20 - коэффициент перевода в проценты.

Пример 1. Берут навеску 0,1 г листьев терескена, помещают в фарфоровую ступку, растирают с 10 мл биуретового реактива состава: 8 г К, Na винокислого и 2 г uSO

(У1

00

со о:

3150

и растворяют в 0,175 н. (0,7%) растворе щелочи. Затем в течение 2 мин центрифугируют при 8000 об/мин и центрифугат фотометрируют на ФЭКгЗбМ в кювете 10 мл при синем светофильтре и получают показатель оптической плотности реакционной смеси, равньш 0,97. Подставляя в формулу, получают содержание белка в листьях 19,4%.

Пример 2. Берут навеску 0,1 г пробы листьев терескена, помещают в фарфоровую ступку, растирают с 10 мл биуретового реактива состава 9 г K,Na винокислого и 3 г CuSO

и ра т вЬряют в 0,2 н, (0,8%) растворе щелочи. Затем в течение 2 мин центрифугируют при 8000 об/мин и центрифугат фотометрируют на ФЭК-56М в кювете 10 мл при синем светофильт- ре и получают показатель оптической плотности реакционной смеси, равный 1,00, подставляя в формулу, получают процентное содержание белка в листьях терескена 20%.

При максимальном количественном соотношении компонентов реактива процентное содержание белка больше 20%, что не соответствует действительности,

В табл. 1 приведены сравнительные ДчУИные по содержанию белка в растениях аридной зоны, определенные по методу Кьельдаля и предлагаемому способу.

Как видно из табл. 1, величина ошибки определения лежит в интервале 1-3%.

Процентное содержание белка стандартных растворов, определяемое по

представлено

предлагаемому способу,

в табл. 2.

По табл. 2, не проводя математических расчетов, можно определять процентное содержание белка, зная оптическую плотность раствора. Например, для терескена получают оптическую плотность, равную 1,00, после расчета получают 20% белка. Если найти в табл. 2 данную оптическую плотность, то ей соответствует 20% белка.

Предлагаемьш способ является объективным способом определения содержания белка в листьях растений и на проведение анализа затрачивается 45-50 мин.

Сокращение времени определения достигается за счет отсутствия операций осветления и фильтрования через фильтр с пористой пластинкой. Формула изобретейия

Способ определения белка в листьях растений, включающий измельчение пробы, ее взвешивание и обработку би- уретовым реактивом, центрифугирование и фотометрирование центрифугата, о т- личающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, пробу обрабатывают водным раствором.биуретового реактива с добавкой К, Na винокислого, а полученный окрашенный центрифугат фотоколориметрйруют на синем светофильтре и определяют содержание белка по формуле

X D 20, где X - содержание белка, %

D - оптическая плотность раствора-,

20 - коэффициент перевода, %.

Изобретение относится к биологическим исследованиям, а именно к определению белка в свежих листьях селектируемых растений, и может быть использовано в растениеводстве. Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения. Навеску листьев измельчают, взвешивают и обрабатывают биуретовым реактивом, содержащим K, NA - винокислый при следующем соотношении компонентов, г/л: CUSO₄ 2-4, NAOH - 7-9, K, NA - винокислый 8-10, вода дистиллированная до 1 л. Полученный окрашенный центрифугат фотометрируют на синем светофильтре и определяют содержание белка по формуле: X=D^.20, где X - содержание белка, % D - оптическая плотность раствора

20 - коэффициент перевода, в %. 2 табл.

Таблица 1

Камфоросма стандартнаяСаксаул черный Терескен Изень каменистый Чогон Камфоросма фаришская Камфоросма джам- бульская

0,0001

0,0002

0,0003

0,0004

0,0005

0,0006

0,0007

0,0008

0,0009

0,001

0,0011

0,0012

0,0013

0,0014

0,0015

0,0016

0,0017

0,0018

0,0019

0,002

0,0021

0,0022

0,0023

0,0024

0,0025

0,0026

0,0027

0,0028

0,0029

0,003

0,0031

0,0032

0,0033

0,0034

0,0035

0,0036

7,9

4,00

20,00

10,40

11,80

9,40

8,8

Таблица 2

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

1,8

2,0

2,2

2,4

2,6

2,8

3,0

3,2

3,4

3,6

3,8

4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

5,2

5,4

5,6

5,8

6

6,2

6,4

6,6

6,8

7,0

15089968

Продолжение табл.2

150899610

Продолжение табл.2