Способ выделения тиреоглобулина Советский патент 1991 года по МПК A61K35/55 

Изобретение относится к биохимии и медицине, в частности к выделению тиреоглобулина, который может быть использован в качестве компонента диагностических наборов для определения тиреоглобулина в сыворотке крови человека.

Дель изобретения- упрощение Способа выделения тиреоглобулина.

Способ осуществляется следующим образом.

Экстракт щитовидной железы подвергается ионообменной хроматографии на аминогидроксипропил-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия в натрий- фосфатном буфере. Выход гомогенного тиреоглобулина по отношению к содержанию его в экстракте составляет 20-30%.

Пример. Экстракция тиреоглобулина.

10 гткани щитовидной железы человека измельчают и гомогенизируют в 20 мл 0,01 М натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), содержащего 0,15 М NaCI, 0,02% NaNa, в течение 5 мин с минутным перерывом в ножевом гомогенизаторе при 2000 об/мин при 2-8°С. Полученный гомогенат фильтруют через 2 слоя марли и перемешивают на магнитной мешалке в течение 35 мин при 2- 8°С. Затем гомогенат центрифугируют при 30000 g в течение 30 мин при температуре ротора 2-8°С. Надосадочную жидкость (экстракт) осторожно сливают и используют для выделения тиреоглобулина. Обьем полученного экстракта составляет 20 мл.

Ионообменная хроматография на АНР- сефарозе.

Экстракт наносят на колонку (2,5x20 см) с АНР-сефарозой, уравновешенную 0,01 М натрий-фосфатным буфером (рН 7,4), содер(Л

с

ел о

ы ю

жащим 0,15 М NaCI. 0,02% NaNa, со скоростью 50 мл/ч. Колонку промывают 2 л этого же буфера со скоростью 50 мл/ч. Элюцию тиреоглобулина осуществляют 0,2 М NaCI в 0,01 М натрий-фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем 0,02% NaNa, со скоростью 20 мл/ч. Объединенную фракцию ( 80 мл), содержащую тиреоглобулин, диализируют против 0,005 М трис-НС1 (рН 7,4) и лиофили- зируют.

Количество выделенного тиреоглобулина (концентрацию тиреоглобулина определяли спектрофотометрически, используя для расчетов значение циента поглощения равное А280нм 10, а также с помощью коммерческого набора SB-HTG фирмы CIS International составляет 300 мг или 25% от содержания его в экстракте.

При хранении в лиофилизованном состоянии при -20°С препарат тиреоглобулина сохраняет физико-химические и иммунологические свойства в течение не менее 1,5 лет.

Предлагаемый способ в отличие от прототипа позволяет упростить процесс выделения тиреоглобулина за счет сокращения стадий. Способ гарантирует выделение гомогенного, стабильного препарата тиреоглобулина в препаративных количествах с хорошей воспроизводимостью, что делает возможным серийный выпуск диагностических наборов для определения тиреоглобулина в сыворотке крови человека, основным компонентом которых является тиреоглобулин.

Формула изобретения Способ выделения тиреоглобулина, включающий измельчение щитовидной железы человека, экстракцию хлоридом на- трия, центрифугирование, ионообменную хроматографию, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения количества стадий, непосредственно после центрифугирования проводят ионообменную хроматографию надосадочной жидкости на аминогидрок- сипропил-сефарозе.

Изобретение относится к биохимии и медицине, конкретно к производству радиоиммунологических диагностических наборов. Цель - упрощение способа за счет сокращения стадий. Способ заключается в экстракции тиреоглобулина из ткани щитовидной железы человека хлоридом натрия и последующей ионообменной хроматографии экстракта на АНР (аминогидроксипро- пил)-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия 0,15-0,2 М в 0,01 М натрий-фосфатном буфере. Полученный по данному способу тиреоглобулин может использоваться в качестве антигена для получения высокоспецифической антисыворотки, для приготовления стандартных растворов и меченного радиоактивными изотопами тиреоглобулина.