Способ получения соли сульфоаденозил-L-метионина Советский патент 1989 года по МПК C12N1/06 

Изобретение относится к химико- фармацевтической промышленности и касается способа получения вещества общей формулы: сульфоаденрзил-Ь-метио- нин п (CH,j). (SO,Hj) ,где до 2, до 12.

Целью изобретения является повышение растворимости целевого продукта по сравнению с аналогом.

Пример 1. Получение 0,2 н. растворов дисульфокислот общей формулы (CH)(SO,H)i.

75 л дистиллированной воды, 20 л этанола и 5 л н-бутанола добавляют к 21,6 кг (100 моль) 1, +- дибромбутана. Добавляют 26,А6 кг (210 моль) безводного сульфита натрия и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 дней. По окончании реакции добавляют 20 л дистиллированной воды и смесь перегоняют до тех пор, пока полностью не удалят спирты. Смесь разбавляют водой до конечного объема 60 л и нагревают до тех пор, пока не происходит полного растворения.

Полученную двунатриевую соль 1,- бутандисульфокислоты оставляют кристаллизоваться в течение ночи при 4 С. Продукт отфильтровывают и промывают 10 л воды.

Маточные растворы концентрируют под вакуумом до объема 20 л и оставляют кристаллизоваться в течение ночи при 4 С. Продукт отфильтровывают и промывают 4 л воды. Кристаллическую массу от двух фильтрований повторно суспендируют в 50 л воды и растворяют в горячих условиях. Раствор оставляют кристаллизоваться в reMeni-ie ночи при . Продукт отфильтровывают и промывают 5 л воды. Нлтриевуи спль Ьу ан

ы

дисульфокислоты высушивают под вакуумом.

Последующую фракцию продукта получают путем концентрирования маточных растворов до 10 л и выдерживания их для кристаллизации в течение ночи при t C с последующим от фильтровыванием продукта и сушки его под вакуумом.

Таким обря13ом пoлyчaюt 25,2 кг двунатриевой соли-1 , 4-бутандисульфо- кислоты, моногидрата (90 моль, 90%- ный молярный выход).

Рассчитано, %: С 17,1, Н 3,6, S 22,9.

C HfeO Cj Naz-HjO

Найдено, %: С 17,1,- Н 3,7, S 22,9.

Готовят колонку, содержащую 200 л смолы Amberlite IR 120, предварительн активированной 6 н. раствором НС1 до тех пор, пока из элюата не исчез ион Na , и промывают ее дистиллированной водой до тех пор, пока из элюата не исчез ион С1 .

25,2 кг двунатриевой соли-1 ,-бу- тандисульфокислоты, моногидрата растворяют в 300 л воды и подают в головную часть колонны. Собирают элюат, содержащий 1,-бутандисульфокислоту, и колонку промывают водой до тех пор, пока значение рН элюата не достигло 4. Элюат разбавляют до конечного объема 900 л, чтобы получить 0,2 н. раствор 1 , -бутандисульфокислоты, которую используют для получения соответству- ющей соли сульфоаденозил-Ъ-метионина.

Действуя аналогично, но используя 20i2 кг 1,3-Дибромпропана в качестве исходного материала, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,3-пропандисульфо- кислоты.

Используя 23 кг 1,5-Дибромпентана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,5- пентандисульфокислоты.

Используя , кг 1 .5-Дибромогек- сана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1 ,6-гександисульфокислоты.

Используя 27,2 кг 1,8-дибромокта- на, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,8-октандисульфокислоты.

Используя 30 кг 1,10-дибромодека- на, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,10-декандисульфокислоты.

П р и м 6 р 2. Получение сол суль фоаденозил-Ъ-метионин 1,5 (1 ,(-бутан- дисульфоната).

220 л эгилацетата и 220 л воды добавляют при окружающей температуре

g

5

д 5

Q

0

5

0

к 1800 кг дрожжей, обогащенных сульфо- аденозил-Ь-метионином (6,88 г/кг) по способу Шленка.

После энергичного перемешивания в течение jO мин добавляют 1000 л 0,35 н. раствора серной кислоты и перемешивание продолжают еще в течение 1,5 ч.

Смесь фильтруют через вращающийся фильтр, который промывают водой, чтобы получить 2800 л раствора, содержащего k,Q г/л сульфоаденозил-Ь-метио- нина, что равно 99(5% от количества, присутствующего в исходном материале.

Раствор сульфоаденозил-Ь-метионина- полученный та.ким образом (рН 2,5) подают в установку ультрафильтрации, где используют трубчатые мембраны с задержкой 10000.

Проникающий поток, прошедший через мембраны, собирают в подходящем сосуде, в то время как концентрат непрерывно рециркулируют до конечного объема 200 л. В этом месте добавляют дистиллированную воду и продолжают рециркулирование до тех пор, пока полностью не экстрагируют сульфоаде- нозил-Ъ-метионин.

Получают 3500 л лизата, значение рН которого доводят до рН 5 путем добавления 2 н. раствора NaOH.

Готовят колонку, содержащую kQO л смолы Amberlite CG 50 в Н форме, которую тщательно промывают дистиллированной водой.

Лизат пропускают через колонку смолы со скоростью 800 л/ч, которую поддерживают постоянной в течение всей процедуры.

Затем последовательно пропускают 400 л дистиллированной воды, 3200 л 0,1 моль/л уксусной кислоты и 00 л дистиллированной воды.

Сульфоаденозил-Ь-метионин элюируют 800 л 0,2 н. раствора 1,-бутанди- сульфокислоты. 800 л полученного таким образом элюата содержит приблизительно 10 кг сульфоаденозил-Ь-метио- нина.

Готовят колонку, содержащую 400 л смолы Amberlite ХА 4, которую предва рительно активируют 800 л 0,1 н. раствора NaOH и 800 л 0,1 н. раствора HjS04, а затем тщательно промывают дистиллированной водой.

Ранее полученный раствор сульфо- аденозил-Ь-метионинэ пропускают через колонку со скоростью 200 л/ч.

15

причем скорость поддерживают постоянной в течение всего процесса. Затем через нее пропускают ЦОО л 0,02 н. раствора 1 , -бутандисульфокислоты. Собирают элюат, содержащий сульфоаде- нозил-Ь-метионин (примерно 1000 л, содержащих 10 кг сульфоаденозил-L- метионина). Раствор, полученный таким образом, подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. В этом устройстве раствор сульфоаденозил-Ь-метионина концентрируют до 80 л, содержащих 9,Э кг суль- фоаденозил-Ь-метионина. Добавляют 5 л 2 н. раствора бутандисульфокис- лоты. Раствор, полученный таким образом, подают в распылительную осушительную установку, в которую подают

воздух при 1бО с. Сухой продукт непрерывно выводят их установки.

Получают 18 кг порошкообразного продукта, имеющего при анализе следующий состав, %:

Сульфоаденозил-Lметионин5 .9

1 , 4-Бутандисульфокислота

HjO

,Э 0,2

соответствующий соли сульфоаденозил- L-метионин. 1,5 (1 , -бутандисульфо- нат) .

Продукт имеет вид кристаллическог белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.% с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.

С помощью тонкослойной хроматографии найдено, что продукт не содержит каких-либо примесей.

Рассчитано, %: N 11|6; С 3,7, 5,1.

С(,5С,НадОб32

Найдено, %: N 11,5; С 5,1.

Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в буфере при рН ) при 258,5 нм с Е... 193.

П р и м е р 3. Получение Соли сульфоаденозил-Ь-метионин «1,5 (1,3 пропандисульфоната).

Следуют методике примера 2, но используют 1,3-пропандисульфйкислоту вместо 1,-бутандисульфокислоты.

Получают 17, кг порошка, который при анализе показывает следующий состав, %:

Н

Н

3.8;

Сульфоаденозил-L- метионин 1,3-Пропандисуль- фокислота

соответствующий соли сульфоаденозил- L-метионин 1,5 (1,3-пропандисульфо- нат) .

Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.% с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.

Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких примесей.

Рассчитано, Н А,8.

С, 1.5 C HgOeSi

Найдено, %: N Н i,8.

Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в бу- фере при рН k) при 258,5 нм с Е, 199.

П р и м е р . Получение соли суль- фоаденозил-Ь-метионин 1,5 (1,5-пентан- дисульфоната).

Следуют методике примера 2, но используют 1,5-пентандисульфокислоту вместо 1 , -бутандисульфокислоты. Получают 18,5 кг порошка, который при анализе показывает следующий состав.

N 11,9; С 33,2;

11,9; С 33,1,

СульфоаденозилL-метионин53,3

1,5-Пентадисульфокислота(,5

,2

соответствующий соли сульфоаденозил- L-метионин 1,3 (1,5 пентандисульфо- ната).

Продукт имеет форму кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.% с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.

Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких приМесей.

Рассчитано, %: N 11,3, С 36,2, Н 5,.

С,5НцМб05В -1,5

Найдено, %: N 11 ,, С 36,2,

Н 5,3.

Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН ) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е((.

П р и м е р 5. Получение соли сул фоаденоэил-Ь-метионин 0,5 (1,6-гекса дисульфоната).

Следуют методике примера 2, но используют 1,6-гександисульфокислоту вместо 1 , -6утандисульфокислоты. Получают 19 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, %:

Сульфоаденозил-L-

метионин51 ,8

1,6-Гександисульфокислота Q

,2

соответствующий соли сульфоаденозил- L-метионин 1,5 (1,6-гександисульфо- ната).

Продукт имеет вид кристаллическог белого порошка, который растворим в воде до 30 вес,% с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях

Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаки примесей.

Рассчитано, °4: N 0,9; С 37,6; Н 3,6.

,5 2iN60sS.1,5 СбН„ОбВ-г

Найдено, %: N 10,8, С 37,5, Н 5,6.

Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН ) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с ,..

П р и м е р 6. Получение соли сульфоаденозил-Ь-метионин 1,5 ( октандисульфоната).

Следуют методике примера 2, но 1,8-октандисульфокислоту используют вместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 20 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, %:

Сульфоаденозил-Lметионинч9,3

1 ,8-Октандисульфокислота50,5

н,.о

0,2

Продукт имеет вид кристаллическог белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.% с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях

Тонкослойная хроматография показывает, что продукт свободен от каких- либо примесей.

Рассчитано, %: N 10,; С ,0 Н 6,0.

C. 58-1,5 CgHieOfiS

Найдено, %: N Ю,; С 39,9; Н 5,9.

Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е)у 173.

П р и м е р 7. Получение соли сульфоаденозил-Ь-метионин 1,5 (1,10- декандисульфоната).

Следуют методике примера 2, но 1,10-декандисульфокислоту используют вместо 1 , 4-бутандисульфокислоты. Получают 21 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, %:

Сульфоаденозил-Ь- метионин 46,8

1,10-Декандисульфокислота 53

,2

соответствующий соли сульфоаденозил- Ь-метионин,5 (1,1 0-деканд - гульфона та).

Продукт имеет вид кристаллическог белого порошка, который растворим в воде до 20 вес.% с образованием бесцветного раствора и не раст ворим в обычных органических растворителях

Тонкослойная хроматография показывает, что продукт свободен от каких- либо примесей.

Рассчитано, 1: N 9,8; С 2,3; Н 6,5.

. С,,Н,,0,8г

Найдено, N 9,9; С 2,4; Н 6,5.

Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН k) показывает максимум при 258,5 нм с Е,16.

По1|Ожительный эффект заключается в повышении растворимости по сравнению с аналогами, поскольку полученны соединения в 10 раз более растворимы

Формула изобретения

Способ получения соли сульфоадено зил- /.-метионина общей формулы

n(CH2)n,-(SO,H),, , где П - 1 .. .2;

га - 3...12,

заключающийся в том, что добавляют культуры дрожжей Saccharomyces Сеге- visial, Torulopsic utilis, Candida utilis к целевому продукту, лизируют клетки раствора воды и этилацетата при соотношении 1:1, затем 0,35 н. серной кислоты, очищают лизат ультрафильтрацией через мембраны с пределом пор 100UO дальтон, пропускают лизат через колонку со слабокислотной ионообменной смолой в Н-форме при рН 3,5 7 при скорости пропускания 1-3 объема

1530100

жидкости в 1 ч на один объем смолы,го продукта из элюага, затем коицснтэлюат пропускают через колонку с ам-рируют ультрафилырстцией на мембраберлитом со скоростью 0,-1 объеманах полиамидного типа 100-200 г/л,

жидкости в части на объем смолы и, высушивают распылением при 1 0-200 с,

промывают 20 млн раствором дисульфо-при этом температура воздуха на выхоновой кислоты до исчезновения целево-де составляет 40-100°С.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Исходные дрожжи обогащают сульфоаденозил-L-метионином. Клетки лизируют. Лизат очищают ультрафильтрацией через мембраны с пределом пор 10000 дальтон, пропускают через колонку со слабокислотной ионообменной смолой. Элюат пропускают через колонку с амберлитом со скоростью 0,2 - 1,0 объема жидкости в 1 ч на объем смолы и промывают через колонку с амберлитом. Затем промывают раствором дисульфоновой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюата. Раствор подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. Полученный раствор высушивают распылением при 140-200°С. Растворимость целевого продукта повышается в 10 раз.