Изобретение относится к гибридам- ной технологии и касается получения моноклональных антител.
Штамм получают следующим образом.
Мышиные миеломные клетки гибриди- зуют с клетками селезенки мьшей BALB/C, иммунизированных вирусом карельской Jшxopaдки штамм Leiv-9298. Гибридные клоны культивируют на селективной среде ГАТ. С помощью ре- кции непрямой иммунофлуоресценции выявляют клоны, продуцирующие моноклональные антитела к вирусу карельской лихорадки. Путем серийных пассажей клетки одного из . наиболее продуктивных клонов Карел-34 выводят в массовую культуру. Штамм Карел-34 депонирован под номером
ВСКК(П) № 227D и характеризуется следующими культуральными признаками.
Среда для культивирования - среда Дульбекко с 15%-ной эмбриональной телячей сьгеоротки, пируватом натрия, 4,5 г/л глюкозы, 2 мМ глю- тамина, 5 х 10 М 2-меркаптоэтано- ла антибиотиком гентамидином
50 мкг/мл, 0,2 ед/мл инсулина 10 мм MEPES. Характер роста - стационарная суспензия. Метод снятия - встряхивание. Частота пассирования - через 2-4 сут. Посевная доза - 150- 200 тыс. клеток в 1 мл среды роста. Кратность рассева 1:3 - 1:5. Культура состоит из слабо прикрепленных к субстрату округлых клеток различсд со ю ел
00
|С
UA.
н1эй величины с ядрами, занимающими бэльшую часть клеток. Ядрышки крупнее, встречаются двухъядерныеклетки Цитоплазма имеет вид тонкого ободка пи смещена 5здром к одной из стенок.
Культивирование гибридомыв организме животного: мыши BALB/c, доза клеток при прививке (1-2) х 10 клеток. Ливотные предварительно сенсибилизированы -пристаном. Асцитная опухоль образуется через 10-12 сут.
Специфичность и активность анти- ел: вирус карельской лихорадки, итр в РТГА 1:640000, РНИИФ 1:100000. 1 онтаминация: бактерий нет, грибов
дрожжей нет, микоплазмы нет, виру- ы - обнаружены частицы А и В, ана- огичные частицам родственного штам- :а клеток NSO.
Класс продуцируемых иммуноглобу- :инов: IgM.
Стабильность продукции антител: родуцируют моноклональные антитела а протяжении 30 пассажей в культуре i 5 пассажей на мьш1ах (срок наблюдения) .
Криоконсервирование: ростовая среда, 90% ЭТС, 10% DMSO. Условия хранения - жидкий азот, не способность гибридных клеток после размораживания 60-80%.
Пример. В культуральные матрасы объемом 250-500 мл засевают гибридные клетки Карел-34 в концентрации 150-200 тыс./мл в среде Дуль- бекко с 15%-ной змбриональной теля- |чьей сывороткой, 4 г/л глюкозы, 12 мМ глютамина, 50 мкг/мл гентами1532582 4
цина. Культуры инкубируют при в стационарном состоянии 3-4 сут и используют как образцы культураль- ной жидкости. Осадок клеток ресуспен- дирзпот в 1 мл среды без сыворотки и вводят в брюшную полость мьнией BALB/C. Через 10-12 сут образуется асцитная жидкость (опухоль), которую
Q используют как образец асцитной жидкости после осаждения клеток.
Определение активности монокло- нальных антител, пpoдyциpye ttllx штаммом гибридных клеток Карел-34 в
5 серологических реакциях.
Образцы индуцированной гибридными клетками Карел-34 асцитной жидкости и культуральной жидкости исследуют в реакции непрямой иммунофлю20 оресценции (НФМА) и реакции торможения гемагглютинации.
Результаты типовых опытов представлены в таблице.
Результаты показывают, что монокло25 нальные антитела Карел-34 специфически реагируют с антигенами вируса карельской лихорадки и не взаимодействуют с вирусами осповакцины, венесуэльского энцефаломиелита лошадей,
30 японского энцефалита, гриппа, а также антигенами незараженных клеток.
Формул
изобретения
35
Штамм гибридных культивируемых клеток животных Musmusculus ВСКК(П) № 227D - продуцент моноклонального антитела к вирусу карельскойо лихорадки.
Формул
изобретения
Штамм гибридных культивируемых клеток животных Musmusculus ВСКК(П) № 227D - продуцент моноклонального антитела к вирусу карельскойо лихорадки.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS MUSCULUS - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ПРОСТОГО ГЕРПЕСА I ТИПА | 1991 |
|
RU2031117C1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных -MUS мUSсULUS -продуцент моноклональных антител к возбудителю амиотрофического лейкоспонгиоза | 1987 |
|
SU1527257A1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый для получения моноклональных антител к гемагглютинину вируса гриппа А /Краснодар/ 101/59(Н @ N @ ) | 1987 |
|
SU1446156A1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., используемый для получения моноклональных антител к нуклеопротеидному структурному белку вируса бешенства | 1989 |
|
SU1631073A1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., продуцирующий моноклональные антитела к 146 S-компоненту вируса ящура А @ (Алье) | 1991 |
|
SU1751202A1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., используемый для получения моноклональных антител к гликопротеидному структурному белку вируса бешенства | 1989 |
|
SU1631072A1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L - продуцент моноклональных антител к М - белку вируса гриппа типа А | 1989 |
|
SU1652340A1 |
| Штамм гибридных клеток животных Mus musculus 1F1 - продуцент моноклонального антитела к нуклеокапсидному белку N вируса SARS-CoV-2 | 2021 |
|
RU2769817C1 |
| ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS MUSCULUS L. - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К ПРЕПАРАТУ БЕЛКОВ БРУЦЕЛЛ С МОЛЕКУЛЯРНЫМ ВЕСОМ 18 И 38 КД | 1996 |
|
RU2113475C1 |
| Штамм гибридных клеток животных MUS MUScULIS, используемый для получения моноклональных антител к гемагглютинину вируса кори | 1987 |
|
SU1518369A1 |
Изобретение относится к гибридомной технологии и касается получения моноклональных антител. Штамм носит название "КАРЕЛ - 34" и депонирован под номером ВСКК(П) N 2279D. Продуцирует мон АТ, относящиеся к классу JDM. Продукция мон АТ сохраняется на протяжении 30 пассажей в культуре и 5 пассажей на мышах. Клетки "КАРЕЛ - 34" продуцируют в культуре моноклональные антитела в титрах 1:1000 в реакции непрямой иммунофлюоресценции. Введенные в брюшную полость мышей они индуцируют образование асцитной жидкости с высоким содержанием антител в реакции НФМА до 1:10000. Благодаря активной продукции антител клетки "КАРЕЛ - 34" могут быть использованы для приготовления диагностических препаратов. 1 табл.
арел КЖ № ЮК № КЖ № АЖ № АЖ № АЖ № ОЖ
1280
2560
5120
10000
10000
5120
1280
10 10 10 10 10 10 10
10 10 10 10 10 10 10
онтр ол и:
ИАЖ к ВКЛ 512 АЖ гибридомы ОКА, содержащая антитела к вирусу оспо- вакцины 10 ИАЖ к вирусу гриппа
А/СССР/90/70 10 ИАЖ к вирусу японского энцефаломиелита 10
10
10
10 1280
10
,10
10
10
Примечание; Титры антител даны в величинах, обратных разведениям
сыворотки, использованным в НФМА.
ИАЖ - иммунная асцитическая жидкость, ОЖ - отмывоч- ная жидкость, ВКЛ - вирус карельской лихорадки. КЖ - культуральная жидкость, АЖ - асцитная жидкость.
Продолжение таблицы
10
10
10
10
10
10
10 10
10
10 1280
10 10
512
/ 10
10
10
