Способ получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот Советский патент 1990 года по МПК C12N1/08 C12P19/38 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, применяемых в кормопроизводстве и пищевой промышленности, а также к способу получения нук- леозидрв, которые могут быть применены как препараты в медицине и в научных исследованиях.

Целью изобретения является расширение функциональных возможностей способа за счет получения нуклеозидов.

На чертеже приведен график, поясняющий способ.

Способ осуществляют следующим образом.

Суспензию дрожжей Saccharomyces cerevisiae прогревают на кипящей водяной бане в течение 15-30 мин, промывают водой, вводят в качестве гйдролизующего агента препарат из культуры Actinomyces coelicolor и проводят гидррлиз при 37-40GC, pH 9,0 - 10,5 в присутствии хлористого магния в течение 5-6 ч. При этом одновременно получают два продукта: нуклеозиды и дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот.

Используемый ферментный препарат получают на основе известного штам- ма Actincmyces coelicolor ВКПМ S-464

Пример 1. Навеску дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 60 г разводят в воде (1:5) и нагревают.на кипящей водяной бане в те- чение 15 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой и берут навеску в количестве 38 г, разводят ее водопроводной водой до 48 мл и подщелачивают водным раствором амми- ака до рН 10,0.

0,8 г ферментного препарата Actinomyces coelicolor (активность .кзонуклеазы 55800 ед/г и фосфа- тазы 1036 ед/г) растворяют в 5 мл воды. .

К полученной дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата 51 -экзонуклеазы и щелочной фос- фатазы и выдерживают при 37°С в течение 5 ч. В суспензию добавляют хлористый магний концентрации 5-10 М через 30 мин после начала процесса. По окончании процесса осадок - дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды, разделяют центрифугированием при 5000 об/мин в те- течение 15 мин. Остаточное содержание нуклеиновых кислот в дрожжах 0,53%, степень гидролиза нуклеиновых кислот 88%.

Надосадочную жидкость качественно анализируют с помощью жидкостной хроматографии под давлением в 0,05 М Na-формиатном буфере с рН 4,65 - 4,8. Результаты анализа показывают наличие в надосадочной жидкости нук- леоэидов: гуанозина (2), аденози- на (3), цитидина (4), уридина (1) (см. чертеж).

Пример 2. Навеску дрожжей Saccharomyces cerevisiae разводят в воде (1:5) и нагревают на кипящей во

5

0

5

0

5

0

дяной бане в течение 20 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой, и берут навеску в количестве 24,3 г и разводят в 52 мл воды, водным раствором аммиака подщелачивают , до рН 9,0.

0,4 г ферментного препарата (активность 5 -экзонуклеазы 45000 ед/г, активность фосфатазы 915 ед/г) Acti- romyces coelicolor суспендируют в 5 мл воды.

К дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата, раствор хлористого магния концентрации , гидролиз проводят при 40°С в течение 6 ч. Остаточное содержание нуклеиновых кислот в дрожжах 0,72%, степень гидролиза нуклеиновых кислот 90%.

Надосадочную жидкость качественно анализируют с помощью жидкостной хроматографии под давлением, как в примере 1 . Результаты анализа показывают наличие в надосадочной жидкости нуклеозидов: гуанозина, аденози- на, уридина, цитидина (см. чертеж).

Пример 3. Навеску дрожжей Saccharomyces cerevisiae разводят в воде (1:5) и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой, берут навеску в количестве 47,3 г и разводят в 65 мл воды, водным раствором аммиака подщелачивают до рН 10,5.

0,55 г ферментного препарата Actinomyces coelicolor (активность 5 -экзонуклеазы 51800 ед/г, фосфатазы 1036 ед/г) растворяют в 5 мл воды,

К дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата и выдерживают при 38,5°С в течение 5,5 ч. Через 30 мин после начала гидролиза добавляют хлористый магний концентрации 7,. Осадок от надосадочной жидкости отделяют как в примере 1. Остаточное содержание нуклеинов ых кис.лот в дрожжах 0,98%, степень гидролиза нуклеиновых кислот 87%.

Надосадочную жидкость качественно анализируют как в примере 1. Результаты показывают наличие в надосадочной жидкости нуклеозидов: гуанозина (2), аденозина (3), уридина (1), цитидина (4) (см. чертеж).

Характеристика качества получаемого белково-углеводного продукта, который может быть испольэсван в кормопроизводстве и в пищевой промышленности, дана в табл. 1 и 2.

5 10-ЭМ - 1-1 при 37 - АО°С

хлористого магния в течение 5-6 ч. Таблица 1

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, применяемых в кормопроизводстве и пищевой промышленности, а также к способу получения нуклеозидов, которые могут быть применены как препараты в медицине и в научных исследованиях. Цель изобретения - расширение функциональных возможностей способа: получение из дрожжей одновременно двух продуктов - дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот и нуклеозидов. Способ обработки дрожжей заключается в следующем: дрожжевую суспензию нагревают в течении 15-30 мин на кипящей водяной бане, затем осадок отделяют центрифугированием, промывают его, разводят водой, устанавливают PH=9,0-10,5. К дрожжевой суспензии добавляют ферментный препарат 5Ъ - экзонулеазы и щелочной фосфатазы из ACTINOMYCES COELICOLOR смесь при непрерывном перемешивании выдерживают при температуре 37-40°С. Спустя 30 минут после начала процесса гидролиза, в дрожжевую суспензию добавляют хлористый магний в концентрации 5^.10^-3 - 1^.10^-2 М. Длительность гидролиза 5-6 ч. Дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот отделяют от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды. 2 табл., 1 ил.