Способ получения кератиназы Советский патент 1990 года по МПК C12N9/50 C12N9/50 C12R1/465 

Изобретение относится к получению препаратов кератиназы и может быть применено в биотехнологии, биохимии микроорганизмов, медицине.

Целью изобретения является увеличение выхода фермента и сокращение времени ведения процесса культивирования.

Способ культивирования Strepto- myces chromogenes S.g. ЛИА 0832 осуществляют следующим образом.

В среде состава, мае.%: картофельный крахмал 50; соевая мука 5; перо 10, углекислый кальций 4j фосфорнокислый калий однозаметенныл О,Я, сульфат железа 0,01; сульфат цинка 0,02; водопроводная вода остакыюр. доводят величину рН 1 н. нртрмм до 10,0-11,0. Затем стерилизуют при давлении 0,1 МП а в течение 1 о. После охлаждения засевают 5% 48-часового посевного материала Stropto- myres chromogeres S.g. JIJIA 0832 и культивируют в колбах объемом мм, содержащих по 100 мл среды на ю- чалке (220 об/мин) при 2/°Г в TI u - ние 48 ч. Конечное значение рН К - 6,8.

СП

о

СП

ос

00

оо

За единицу протеолигической ак- вности принимают такое количество ермента, которое за 1 мин при 30°С атализирует переход в неосаждаемое ГХУ состояние количество казенна, содержащее микроэквивалент тирозина. За единицу кератиназной активности принимают такое количество фермента, которое в результате протеоли- за 200 мг кератина при 37°С в течение 3 ч в присутствии 5 мл О,Ш бо- ;затного буфера рН 9,2, 0,5 мл хлорида магния и дистиллированной воды (для доведения объема до 10 мл) дает повышение оптической плотности опытных проб над контрольными, равное 0,1, при измерении на спектрофотометре ( Л 280 ммк)„

Пример 1. Продуцент кера- иназы S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 ыращивают в течение 11 сут при на™ альном значении рН 7,8. Протеолити- еская активность через 11 сут со- тавляет 0,142 ед/мл, а кератиназная равна нулю.

Пример 2. S.chromogenes S.g ЛИА 0832 выращивают 48 ч, Протеоли™ ическая активность составляет 0,158 ед/мл, а кератиназная 0,8 ед/мл Условия культивирования аналогичны примеру 1.

Пример 3. S.chromogenes S.g ЛИА 0832 выращивают 120 ч. Условия культивирования аналогичны примеру 1 Протеолитическая активность 0,996 ед/мл, кератинаэыая 1,1 ед/мл.

Пример 4. S.chromogenes S.g ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 9. Протеолитическая активность 1,956 ед/мл, кератиназная 2,1 ед/мл.

Пример 5. S.chromogenes S0g ЛИА 0832 выращивают 120 ч при началь

Q 5

5

°

0

5

ном значении рН 10. Протеолитическая активность 2,622 ед/мл, кератиназная 2,7 ед/мл.

Пример 6. S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 11,0. Протеолитическая активность 3,111 ед/мл, кератиназная 8 ед/мл.

Пример 7. S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 выращивают 48 ч при начальном значении рН 11,0. Протеолити- ческая активность 6,044 ед/мл, кера-, тиназная 34 ед/мл.

В таблице представлены результаты, показывающие преимущества предлагаемого способа по сравнению с известным.

Выращивание S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 в предлагаемых условиях повышает пратеолитическую активность в 5,2 раза, а кератиназную в 11,3 раза по сравнению с известным способом и сокращает время выращивания на 9 сут.

Формула изобретения

Способ получения кератиназы, предусматривающий культивирование - продуцента на питательной среде, содержащей минеральные соли, источники углеродного и азотного питания и воду, при оптимальной температуре до достижения максимальной активности фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и сокращения времени ведения процесса, в качестве продуцента используют штамм актиномицета Strep- tomyces chrotnogenes S. graecus ЛИА 0832, а культивирование осуществляют при начальном значении рН 10-11.

Изобретение относится к получению препаратов кератиназы и может быть применено в микробиологической промышленности, биохимии микроорганизмов и медицине. С целью сокращения времени ведения процесса и увеличения выхода кератиназы в качестве продуцента используют STREPTOMYCES CHROMOGENES S. GRAECUS ЛИА 0832, культивирование которого осуществляют на питательной среде, содержащей минеральные источники азота и углерода и воду, при начальном значении PH от 10 до 11. Предлагаемый способ получения кератиназы позволяет повысить выход фермента в 11 раз (34 ед/мл) и сократить время культивирования с 9 сут. до 48 ч по сравнению с известным способом. 1 табл.