Способ определения теофиллина в плазме крови Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии.

Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Плазму крови осаждают смесью вода - серная кислота - вол ьфрамат натрия в соотношении 1:1:1, центрифугируют, центри- фугат обрабатывают последовательно растворами хлорамина Б и щелочным раствором тимола, нагревают и фотометрируют полученный окрашенный раствор нм.

Способ быстро выполним, используемые реактивы доступны и дешевы. Точность способа составляет 0,77%, прототипа 9,60%. Нижняя граница определения 2 мкг теофиллина на 2 мл плазмы крови.

Способ является избирательным, основанным на высокоспецифической химической реакции. Определению теофиллина не мешают кофеин, кофеин-бензоат натрия, теобромин, дипрофиллин, мочевая кислота, мочевина, аллоксан, пуриновые и пиримидиновые основания и их нуклеозиды и нук- леотиды, барбитураты, этилендиамин, ряд других лекарственных препаратов.

Пример. К2 мл плазмы крови прибавляют 2 мл дважды перегнанной воды, перемешивают, прибавляют 2 мл 2/3 N серной кислоты и снова перемешивают. После этого по каплям прибавляют, перемешивая, 2 мл 10%-ного раствора вольфрамата натрия. Смесь хорошо перемешивают и центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин. Надосадоч- ную жидкость сливают, отмеривают 6 мл и переносят в пробирку, прибавляют 3 мл 10%-ного водного раствора хлорамина Б, перемешивают и оставляют в штативе. Че- Гез 2-3 мин прибавляют 1 мл 0,4%-ного водного раствора тимола в 15%-ном растворе гидроксида натрия, смесь перемешивают и помещают в водяную баню на 20 мин при 60°С. Окрашенные растворы охлаждают и измеряют оптическую плоти эсть при 458 нм, например, на ФЭК-56М (светофильтр Ns 4, кювета толщиной слоя 20 мм) относительно раствора сравнения, который представляет смесь реактивов: 2 мл 2/3 N серной кислоты.

сл

с

c о

сл

00

|2 мл 10%-ного вольфрамата натрия, 2 мл (ВОДЫ и т.д., как указано. Количественную оценку концентрации теофиллина проводят ino калибровочному графику, для его постро- |ения в пробирки вносят различные объемы стандартного раствора теофиллина с содер- 1жанием 1 - 80 мкг (при определении тера- Ьевтйческих доз теофиллина в крови }достаточно интервала 1 - 30 мкг), доливают водой до 6 мл и проводят определение, как описано. При нахождении содержания теофиллина в анализируемой пробе вычитают величину 0,07 (поправка на оптическую плотность контроля - плазмы крови без те- офиллина) от измеренного значения оптической плотности.

Результаты определения теофиллина в модельных водных растворах и статистическая обработка приведены в табл.1.

Предлагаемый способ позволяет определять от 1 до 80 мкг теофиллина в 10 мл конечного .объема. Время определения до 25 мин (при 45 мин по прототипу).

Способ прост и доступен в выполнении, позволяет проводить серийные анализы.

По разработанному способу было взято несколько различных образцов донорской крови, из которой центрифугированием отделяли плазму, в отдельные пробы которой добавляли разные количества теофиллина,

а далее поступали, как описано. Данные приведены в табл.2.

Метрологическая характеристика указывает на хорошую воспроизводимость и точность результатов определения, теофиллина. .

Расчет содержания теофиллина X в 1 мл плазмы крови проводят по формуле

W

Сх

8

б -2

где Сх - концентрация теофиллина (мкг), найденная в анализируемой пробе по калибровочному графику.

Формула изобретения Способ определения теофиллина в плазме крови путем последовательной обработки анализируемой пробы химическими реагентами и фотометрированием полученного окрашенного раствора, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, осаждение плазмы крови проводят смесью вода - 2/3 N

серная кислота - 10%-ный раствор вОльфра- мата натрия в соотношении 1:1:1, а обрабатывают центрифугат хлорамином, затем щелочным раствором тимола, нагревают и фотометрируют при А 458 им.

Таблица 1

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической биохимии. Способ включает обработку плазмы крови смесью вода-серная кислота- вольфрамат натрия, центрифугирование пробы, обработку центрифугата хлорамином, щелочным раствором тимола и фотометрируют при λ=458 HN. Способ обладает высокой чувствительностью (0,2 мкг/мл), простотой и доступностью выполнения (время определения 25 мин) и может быть использован в клиникобиохимических исследованиях, контрольно-аналитических лабораториях.