Способ определения гидрозида изоникотиновой кислоты Советский патент 1993 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно, к способам количественного определения гидразида изоникотиновой кислоты, применяемого в качестве химиоте- рапевтического противотуберкулезного средства (тубазид, изониазид, ГИНК).

Цель изобретения - повышение чувствительности и точности определения,

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения гидразида изоникотиновой кислоты анализируемую пробу обрабатывают вначале растворами роданида аммония и хлорамина Б ведут в кислой среде, создаваемой 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты, а в качестве органического соединения, содержащего метиленовую группу, используют 2% спиртовый раствор димедона в присутствии универсального буферного раствора рН 6,8-7,2 с последующим фото- метрированием окрашенного раствора при 525 нм.

Способ осуществляют следующим образом. Анализируемую пробу препарата последовательно обрабатывают 1% раствором роданида аммония, 2% раствором хлорамина Б и 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты; через 10-15 мин прибавляют 2% спиртовый раствор димедона, универсальный буферный раствор рН 6,8-7,2 и фотометрируют при 525 нм. Подчинение закону Бера соблюдается в пределах от 0,20 до 2,00 мг препарата в 25 мл раствора. Чувствительность реакции 0,5 мкг препарата в 1 мл раствора.

Пример 1, Качественное определение гидразида изоникотиновой кислоты. Около 3-5 мг препарата растворяют в 0,5 мл воды, прибавляют 0,5 мл 1 % раствора роданида аммония, 2 мл 2% раствора хлорамина Б, 0,5 мл 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты и оставляют на 10-12 мин, Полученный раствор нейтрализуют, прибавляя по каплям 0,5 н. раствор гидроксида натрия, и добавляют 0,5 мл 2% спиртового раствора

00

I

СЯ О

димедона. Через 3-5 мин появляется розово-фиолетовое окрашивание. Предел обнаружения 5 мкг препарата.

Пример 2. Определение содержания гидразида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате.

В одну пробирку вносят 1 мл раствора стандартного образца, 1 мл которого содержит 0,5 мг гидразида изоникотиновой кислоты, а, в другую - 1 мл испытуемого раствора препарата (0,05-100). В обе пробирки последовательно вносят по 0,5 мл 1 % раствора роданида аммония, 2 мл 2% раствора хлорамина Б, 0,5 мл 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты и оставляют на 15 мин; доводят реакцию среды до нейтральной добавлением по каплям 0,5 н. раствора гид роксида натрия, - и прибавляют 0,5 мл 2% спиртового раствора димедона. Объемы доводят до 10 мл универсальным буферным раствором рН 6,8 и через 20- 25 мин измеряют оптическую плотность на СФ - 26 в кюветах с толщиной слоя до 10 мм при 525 нм; в качестве контроля используют воду.

Содержание гидразида изоникотиновой кислоты в граммах рассчитывают по формуле:

Сх

Dx

100

Do р 1

где DX - оптическая плотность испытуемого раствора;

Do - оптическая плотность раствора стандартного образца;

Со - содержание препарата в 1 мл раствора стандартного образца, г;

р - точная масса препарата, взятая на определение, г.

Результаты количественного определения гидразида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате сведены в.табл. 1.

Пример 3. Определение содержания изониазида в таблетках. Точную массу порошка растертых таблеток изониазида (0,025 г) обрабатывают 20 мл воды в мерной колбе вместимостью 50 мл, интенсивно перемешивая в течение 5 мин; доводят объем водой до метки и фильтруют, отбрасывая первые и последние 5-8 мл фильтрата испытуемый раствор. В одну пробирку вносят 1 мл раствора стандартного образца гидразида изоникотиновой кислоты (0,05-100), а в другую - 1 мл испытуемого раствора; далее определение проводят по методике (см. пример 2).

Содержание иэониазида в граммах, считая на среднюю массу одной таблетки, рассчитывают по формуле:

D,

b -50

Do р 1

(2)

где Dx - оптическая плотность испытуемого раствора;

Do - оптическая плотность раствора стандартного образца;

Со - содержание препарата в 1 мл раствора стандартного образца, г;

р - точная масса порошка растертых

15 таблеток изониазида. г;

Ь - средняя масса одной таблетки изониазида, г.

Результаты определения изониазида в таблетках сведены в табл.1.

20 П р и м е р 4, Определение содержания суммы метаболитов иэониазида в крови. Для осаждения белков 2,5 мл сыворотки крови смешивают с 2,5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты и центрифугиру25 ют при 3000 об/мин в течение 10-15 мин. Далее, к 3,6 мл полученного центрифугата прибавляют 0,4 мл 0,005% раствора стандартного образца гидразида изоникотиновой кислоты, в 1 мл которого содержится

30 0,02 мг препарата. Определение проводят по калибровочной кривой. Построение калибровочной кривой.

В ряд пробирок вносят соответственно 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1; 0,16; 0,2 мл стан35 дартного раствора иаониазида, прибавляют по 0,5 мл 1 % раствора роданида аммония, 2 мл 2% раствора хлорамина Б и оставляют на 10-15 мин. Нейтрализуют полученный раствор вначале 10%, а, затем, 0,5 н. раствора40 ми гидроксида натрия, прибавляют по 0,5 мл 2% спиртового раствора димедона и доводят до 10 мл универсальным буферным раствором рН 6,8.

Через 15 мин измеряют оптическую

45 плотность на СФ - 26 в кюветах с толщиной слоя до 10 мм при 525 нм. В качестве контроля используют воду.

Предлагаемый спектрофотометриче- ский метод в 200 раз более чувствителен по

50 сравнению с известным (прототип). Точность количественных определений выше в 2-4 раза; способ применим для определения суммы метаболитов гидразида изоникотиновой кислоты в крови (см. таблицу 2).

55

Формула изобретени.я

Способ определения гидразида изрни- -котиновой кислоты путем обработки знализируемой пробы растворами роданида аммония и хлорамина Б в кислой среде, а затем органическим соединением, содержащим метиленовую группу, измерения оптической плотности окрашенного раствора, по которой рассчитывают концентрацию определяемого вещества, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и точности определения, обработку анализируемой пробы растворами роданида аммония и хлорамина Б ведут в кислой среде, создаваемой 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты, а в качестве органического соединения, содержащего метиленовую группу, используют 2%-ный спиртовой раствор димедона в присутствии универсального буферного раствора рН 6,8-7,2 с последующим фотометрированием окрашенного раствора при 525 нм.

Сущность изобретения: раствор анализируемой пробы под расщеплением реагентов - роданида аммония и хлорамина Б в кислой среде образует производное глюта- конового альдегида, последний конденсируется со спирто-водным раствором димедона в нейтральной среде рН 6,8 с образованием окрашенных продуктов, которые фотометрируют при 525 нм. 2 табл.

Таблица

. .. - .««.

Определение содержания гидразида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате

и в таблетках (из 5 определений).

Т а б л и ц а 2

Результаты количественного определения суммы метаболитов изониаэида в крови (из А определений).