Селективная питательная среда для определения принадлежности исследуемых дрожжей к виду CaNDIDa маLтоSа Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/04 C12N1/16 C12Q1/04 C12R1/72 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при микробиологическом контроле производства белково- витаминного концентрата (БВК) на парафинах нефти, а также в медицинской практикео

Цель изобретения - повышение спе- цифично сти, упрощение и ускорение исследования, возможность определения степени доминирования штамма-продуцента „

Изобретение заключается в том, что селективная питательная среда для определения принадлежности исследуемых дрожжей к виду C0raaltosa, включающая

сусло-агар (СА) в виде питательной основы, согласно изобретению дополнительно содержит родамин 6Ж к акрифлавин при следующем соотношении компонентов на 1 л среды

Родамин 6Ж I00-130 мг Акрифлавин10-20 мг

Сусло-агарОстальное

Для приготовления среды к расплав-1- ленному СА добавляются водные растворы красителей до указанных конечных концентраций. В лунки матрицы 50-гнезд- ного штамма-репликатора (предварительно простерилизованного) наливают физиологический раствор. Двух-трех суточные исследуемые колония ч музейоэ

EPIS&S

J 1

ные культуры контрольных штаммов стеклянной палочкой переносят в лунки матрицы и суспендируют. Чашки Петри,, содержащие среду с красителями и СА (контрольная чашка), маркируют, отмечая низ чашки, соответствующий низу матрицы. Щеткой штампа исследуемые культуры переносят на .-эти две чашки. Посевы инкубируют при 34°С в течение 48 ч. На чашке с СА вырастают все исследуемые колонии, на чашке с красителями - лишь C,maltosa в виде гладких имеющих розовый цвет колоний, Для иллюстрации предлагаемого изобретения на среде с красителями изучили рост промышленных и коллекционных штаммов дрожжей.

Перечень использовнных штаммов представлен в таблице.

Пример 1. Указанным способо на СА и чашку с красителями; родамин 6Ж 120 мг/л, акрифлавин 15 мг/л, посеяны штаммы, представленные в таблице. При учете результатов через двое суток на чашке с СА вырастают все исследованные штаммы. На чашке с красителями - лишь культуры C.mal tosa. Рост остальных видов исследованных дрожжей ро Candida отсутствует.

Пример 2. Для посева культур используют среду, содержащую красители в-минимально допустимых концентрациях, мг/лг родамин 6Ж 110, акрифлавин 10,

Через двое суток наблюдают рост дрожжей C.maltosa и очень слабый .рост дрожжей C.rugosa в виде сухого сероватого налета.

Пример 3. Для посева культур используют среду,, содержащую красители в максимально допустимых концентрациях, мг/л: родамин 6Ж 130„ акрифлавин 20„

Через двое суток наблюдают инги- бированный рост штаммов C.maltosa Рост других штаммов отсутствует.

Таким образом, среда с красителями проста в употреблении, дает возможность в течение 2 сут получить результаты, на одной пластинке агара можно изучить до 50 культур дрожжей, среда высЪко специфична,, Оптимальная концентрация красителей в среде: родамина бЖ-120 г/л, акрифла- вина-15 мг/л.

914

Пример 4. Для посева исследуемой коллекции используют среды, содержащие красители в следующих концентрациях, мг/л: родамин 6Ж 100, акрифлавин 5.

При учете через 2 сут наблюдают рост штаммов С, maltosa, C.rugosa, C.scottii, т„е, среда утрачивает свою специфичность.

Пример 5. Посев осуществляют на среду, содержащую красители в концентрациях, мг/л: родамин бЖ 135, акрифлавин 25.

При учете через 2-4 сут рост исследуемых штаммов, в том числе C.maltosa отсутствует, т.е повышение концентрации красителей приводит к выраженному ингибирующему эффекту.

Таким образом, предлагаемая среда является селективной для основного продуцента БВК на парафинах неф- ти дрожжей С,maltosaо Она проста в употреблении и приготовлении, позволяет в тече ше 2 сут, определить принадлежность исследуемых дрожжевых культур г. виду С. maltosa. Использование 50-гнездного штамма-репликатора дает возможность провести широкий скрининг исследуемых культур и определить уровень доминирования дрожжей C.malcosa непосредственно в практических лабораториях (без подключения дополнительных исследований - изучения утилизации, и асимми- ляции углеводов).

Формула изобретения

Селективная питательная среда для определения принадлежности исследуемых дрожжей к виду Candida maltosa, включающая сусло-агар как питательную основу, о тличающаяся тем, что, с целью повышения специфичности, упрощения и ускорения исследования, а также возможности определения степени доминирования штамма-продуцента, среда дополнительно содержит

красители родамин 6Ж и акрифлавин , при следующем содержании компонентов на 1 л среды, мг:

Родамин 6Ж110-130

Акрифлавин10-20

Сусло-агарОстальное

Видовая принадлежность штаммов

C.maltosa

С.tropicalis

C.rugosa C.utilis

C.albicans C.krusei

C.valida C.lambica

C.scottii

Коллекционные номера штаммов

BKM -1506, (ЦМПМ) У-241), ВСБ-744, ВСБ-774 (ЦМПМ-У-197), ВСБ-777 (ЦМПМ У-194), 788 (ЦМПМ У-195), ВСБ-779 (1МПМ У-196), ВСБ-855 (НП-4), ВСБ-899, ВСБ-905, ВСБ-930

ВСБ-166(К-41). ВСБ-167(К-155), ВСБ-637, ВСБ-909 (ЦМПМ У-291), вСБ-928 (ЦМПМ У-444), ВСБ-932, ВСБ-933, ВСБ-934, ВСБ-935

ВКН У-67, ВКМ У-1151, ВСБ-558, ВСБ-576, ВСБ-845, ВСБ-892, ВСБ-925, ВСБ-926

ВКМ 7-33, ВКМ у-74, ВКМ У-766, ВСБ-651 (ЦМПМ У-277), ВСБ-726 (ЦМПМ У-263),

ВКМ У-2085, ВКМ У-2085 (Р-форма) ВКПГ ВСБ-896 (ЦМПМ У-286), ВКПГ-2134 .ВКМ-У-1493, ВКМ У-2328, ВСБ-825 ВСБ-579 (ЦМПМ У-264).

ВСБ-665, ВСБ-770, ВСБ-880

##-

-4337

Коллекционные номера штаммов

(ЦМПМ У-27

##-

-4337

Изобретенпз относится к микробиологической промышленности и медицине и может быть использовано для определения принадлежности исследуемых дрожжей к виду Candida malcosa Целью изобретения является повышение специфичности,, упрощение и ускорение исследования, а также возможность определения степени номинирования штамма-продуцента. Изобретение заключается в том, что питательная среда, приготовленная на сусло-агаре, содержит красители родамин 6Ж (11С-- 113 мг/л) и акрифлавин (10-20 мг/л)« Из исследованных видов дрожжей рода Candida на этой среде вырастают лишь штаммы C.maltosa в виде окрашенных в розовый цвет гладких колоний„ 1 табл. с « «каа %ео&

- Всесоюзная коллекция микроорганизмов. - Музей живых культур ВНИИсинтезбелок. - Центральынй музей промышленных микроорганизмов. # - Всесоюзная коллекция патогенных грибов.