1
(21)4495837/13
(22)20„10„88
(46) 30о04и91„ Бюп„ № 16
(71)Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии и Институт микробиологии и вирусологии АЛ УССР
(72)В0В„ Смирнов, фЄ Резник, И„Б, Сорокулова, В.М„ Крамаров, В„В0 Смолянинов и Н,И„ Матвиенко
(53)577„15(088,8)
(56) Pv.oberts Rolo Pa; strict ion enzymes and their isoshisomerso Hurl „ Acids. Res. v. 16, Sequem-e Supplu pa 271- 313, 1988o
(54)LITAMM БАКТЕРИЙ BACILLUS CEREUS - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКПЕАЗЫ ВСЕ 751 1
(57) Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии, Целью
изобретения является получение штамма В. cereus ВКПМ В-4246 (751 1), продуцирующего сайт-специфическую эндонук- леазу Все 751 1, способную узнавать на ДНК последовательность нуклеоти- дов 5 „ 0 .GGATCC.,. „3 . Для получения биомассы культуру засевают в колбу объемом Зл, содержащую 700 мл среды, содержащей, г/л воды: дрожжевой экстракт 5, триптон 5, натрий хлористый 5, и инкубируют в условиях качалки до средней логарифмической фазы, затем клетки отделяют центрифугированием при 10000 g0 Выход фермента 10000 ед/г биомассы. Активность эндо- нуклеазы определяют по гидролизу ДНК фага, продукты реакции анализируют электрофорезом в геле 0,8%-ной агарозьь
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Штамм бактерий BacILLUS LIснеNIFоRмIS-продуцент рестриктазы В @ 49 I | 1988 |
|
SU1659479A1 |
| ШТАММ БАКТЕРИИ Paenibacillus sp., ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ Psp1009I | 2007 |
|
RU2340663C1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS COAGULANS - ПРОДУЦЕНТ САЙТ - СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛАЗЫ, СПОСОБНОЙ УЗНАВАТЬ И РАСЩЕПЛЯТЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НУКЛЕОТИДОВ 5′-CTCTTC-3′ | 1993 |
|
RU2054040C1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS COAGULANS - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ, УЗНАЮЩЕЙ И РАСЩЕПЛЯЮЩЕЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НУКЛЕОТИДОВ 5'-GATNNNNATC-3' | 1994 |
|
RU2057806C1 |
| ШТАММ БАКТЕРИИ Kocuria rosea - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ KroI | 2009 |
|
RU2394099C1 |
| Штамм @ @ -4994-продуцент сайт-специфической эндонуклеазы | 1982 |
|
SU1040794A1 |
| Штамм бактерий PaRacoccUS DеNIтRIFIсаNS-продуцент эндонуклеазы рестрикции Р @ 121 | 1988 |
|
SU1532583A1 |
| Штамм бактерий BacILLUS SрнаеRIсUS-продуцент рестриктазы BSI 1 | 1991 |
|
SU1784642A1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SPECIES - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ, СПОСОБНОЙ УЗНАВАТЬ И РАСЩЕПЛЯТЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НУКЛЕОТИДОВ 5`-(A/G) CCGG (T/C)-3` | 1992 |
|
RU2037522C1 |
| РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК РВТN II, ОПРЕДЕЛЯЮЩАЯ СИНТЕЗ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСЕКТИЦИДНОГО ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА CRY IIIA-ТИПА, СПОСОБ ЕЕ КОНСТРУИРОВАНИЯ И ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS PUTIDA, СОДЕРЖАЩИЙ РЕКОМБИНАНТНУЮ ПЛАЗМИДУ ДНК РВТN II-ПРОДУЦЕНТ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСЕКТИЦИДНОГО ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА CRY IIIA-ТИПА, АКТИВНОГО ПРОТИВ НАСЕКОМЫХ ОТРЯДА COLEOPTERA | 1995 |
|
RU2103363C1 |
Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии и представляет собой итамм, продуцирующий эндонуклеазу Все 751 1, используемую как инструмент для получения фрагментов ДНК, картирования молекул ДНК и конструирования векторных молекул ДНК,
До настоящего времени не обнаружено среди вида Bacillus cereus штамма, продуцирующего эндонуклеазу, способную узнавать на ДНК последовательность 5,..ССАТСС.,Л о
Цель изобретения - получение штамма В. cereus ВКПП В-4246 (751 1), про д уцируюцего сайт-специфическую эндонуклеазу Все 751 1, способную узнавать
на ДНК последовательность нуклеоти- дов 5 „„о(гСАТСС0„о 3 итамм Восегеив выделен из почвы и характеризуется следующими признакамио
Морфологические признаки. Прямые палочки, размер клеток 18 часовой культуры 3,5x1,1 мкм, Клетки располагаются одиночно или цепочкой Эллипсовидные споры располагаются в клетке центрально. Клетки при спорообразовании не раздуваются.
Культуральные признаки. На твердом мясопепетонном агаре через 18 ч роста при 37°С образуются колонии молочного цвета со слегка волнистым краем. Образование спор начинается через 48-72 ч при выращивании на
%
СП N9
СО СО
мясопептонном агаре при 37дС« После роста на глюкозном агаре в протоплазме обнаруживаются глобулы. Рост на : жидкой питательной среде характери- зуется равномерным помутнением.
Физиолого-биохимические признаки Грамположительные аэробные спорооб- разуюцие палочки Продуцируют ката- лазу Культура ферментирует глюкозу, арабинозу, маннит с образованием кислоты, ксилозу не использует Утилизирует цитрат и пропионат, гидроли- зует крахмал, в анаэробных условиях из нитратов газ не образует, дает положительную реакцию Фогес-Проска- уэра, обеспечивает метиленовую синь Растет в анаэробных условиях
Ытамм продуцирует сайт-специфическую эндонуклеазу Все 751 1, узна- ющую на двухнитевой ДИК последовательность нуклеотидов 51 0 с „GGATCC. „ „ 3 „
Пример Получение сайт-специфической эндонуклеазы Все 751 1
Цтамм В. cereus 751 хранится в пробирках на агаризованной среде под вазелиновым маслом. Для оживления культуру пересевают на скошенный мясо пептонный агари инкубируют в термостате при 37 С в течение 24-36 ч Для получения биомассы культуру засевают в колбу объемом Зл, содержащую ТОО мл среды, содержащей, г/л, дрожжевой экстракт 5; триптон 5; натрий хлористый 5 и инкубируют в условиях качалки до средней логарифмической фазы, затем клетки отделяют центрифугированием при 10000 g.
0
5 о
5
0,5 г клеток суспендируют в 0,5 мл буфера А (0,2 М Had; 0,01 М К-фос- фат; рН 7,0; 2 мМ дитиотрейтол; 0,1 мМ ЭДТА) разрушают ультразвуком при охлаждении льдом, клеточные стенки осаждают при 40000 g Надосадочную жидкость хроматографируют на колонке 1,5x30 см с Toyopearl HW-55, уравновешенной в том же буфере со скоростью 20 мл/ч, фракции 0,8 мл Активность эндонуклеазы определяют по гидролизу ДНК фага , продукты реакции анализируют электрофорезом в геле 0,8%-ной агарозы. Фракции, содержащие эндонуклеазу, объединяют, диализуют против буфера А, содержащего 50% глицерин и хранят при Выход фермента 10 тыс ед/г биомассы.
Специфичность эндонуклеазы Все 751 1 определяли по гидролизу ею различных ДНК с известной первичной структурой (ДНК фагов , М13, 0X174, плазмиды pBR322).
Установлено физическим картированием, что эндонуклеаза Все 751 1 узнает и гидролизует ДНК pBR322 и точках с координатами 375 п„о, ДНК фага 9l -5505, 72346, 27972, 41732 ДНК 0X174 не гидролизуется„ Анализ этих данных приводит к заключению, что эндонуклеаза Все 751 1 узнает последовательность нуклеотидов GGATCC.
Формула изобретения
Цтамм бактерий Bacillus cereus ВКГО1 В-4246 - продуцент эндонуклеазы Все 751 1.
