Способ получения иммунной сыворотки к липотейхоевой кислоте стрептококка группы А Советский патент 1991 года по МПК G01N33/531 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано при оценке прогноза течения ряда инфекционных заболеваний и иммунопатологических состояний

Цель изобретения - повышение активности целевого продукта и упрощение способа за счет использования непатогенного штамма микроорганизма,

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве антигена используют разрушенную ультразвуком биомассу штамма Streptomyces levoris K-3053. которым иммунизируют животных.

П р и м е р 1. Двухсуточный мицелий Streptomyces levoris K-3053, отмытый от среды 3-кратно забуференным физиологическим раствором (ЗФР), разрушают на ультразвуковом дезинтеграторе УЗДН-1 при 22 кГц 3 раза по 1 мин. Суспензию разрушенного мицелия прогревают трижды по 30 мин при 60°С с 24-часовым интервалом, хранят при 4°С, при введении животным разводят его стерильным ЗФР до оптической плотности (ОД)0,16, определенной при длине волны (Я) 650 нм.

Беспородным морским свинкам весом 200 г вводят 1 мл разрушенной ультразвуком биомассы штамма Streptomyces levoris К-3053 (ОД -0,16 при 650 нм), при этом 0,75 мл вводят внутрибрюшинно, а 0,25 мл - подкожно в область шеи. Путем однократной инъекции в неделю, курс иммунизации продолжается 3 недели. В процессе иммунизации из сердца свинок берут пробы крови для определения титров антител в РПГА против липотейхоевой кислоты (ЛТК) стрептококка группы А. После отделения от эритроцитар- ной массы полученные сыворотки прогревают 30 мин при 56°С и сохраняют в

О (Л

о

Јь

сл о

стерильных ампулах при проверяют в РПГА по общепринятой методике следующим образом: 2%-ный раствор бараньих эритроцитов отмывают дважды ЗФР (5 мин при 1000 об/мин) и доводят до первоначального объема, после чего смешивают с равным объемом раствора ЛТК в ЗФР (концентрация 2 мкг/мп)и инкубируют при постоянном перемешивании 30 мин при 37°С. Эритроциты отмывают ЗФР от неприсоединившейся ЛТК 3 раза. РПГА проводят в микротитраторных шлашках. При этом к 0,2 мл последовательным разведениям испытуемых сывороток добавляют 1 каплю сенсибилизированных эритроцитов и инкубируют при 37°С 1 ч и 2 ч при 4°С. Результат реакции учитывают визуально. Титр антител в сыворотке был равен 14,41.

Полученная антисыворотка может быть использована для изучения циркуляции антигена в крови больных с различной стрептококковой этиологией, что дает возможность оценить прогноз течения заболевания.

Таким образом, упрощение предлагаемого способа (по сравнению с известными)

достигается за счет использования непатогенного штамма стрептомицета, позволяющего получить специфические антитела к ЛТК стрептококка группы А. что в свою очередь приводит к увеличению в несколько раз титра специфических антител.

По сравнению с прототипом увеличивается титр антител в липотейхоевой кислоте в 16 раз (титр антител, получаемый по прототипу, равен 10,39 ±2,3 Ig2, а по предлагаемому способу - 14.41 ± 1,02lg2).

Формула изобретения Способ получения иммунной сыворотки

к липотейхоевой кислоте стрептококка группы А, включающий культивирование микро- бов-продуцентов, разрушение их, иммунизацию животных, забор крови, выделение целевого продукта, отличзющийс я тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и упрощения способа за счет использования непатогенного штамма микроорганизма, в качестве микроба-продуцента используют штамм Streptomyces

levoris K-3053 и перед иммунизацией клетки микроба разрушают ультразвуком.

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для получения антигенов стрептококка группы А, используемых в диагностике заболеваний. Цель изобретения - повышение активности целевого продукта и упрощение способа за счет ис- пользования непатогенного штамма -- продуцента. Выращенную культуру штамма Streptomyces levoris K-3053 перед иммунизацией им животных подвергают воздействию ультразвука в режиме 22 кГц трехкратно в течение 1 мин. Затем разрушенной культурой иммунизируют животных и получают сыворотки со специфической активностью. По сравнению с прототипом повышается активность целевого продукта в 16 раз. Ё