Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент неорганической пирофосфатазы Советский патент 1991 года по МПК C12N9/16 C12N1/20 

сл

с

Изобретение относится к биотехнологии. Цель изобретения - получение нового штамма, используемого для выделения фермента - неорганической пирофосфата- эы. Штамм Escherichia coli ВКПМ B-4780(LG 88) - продуцент неорганической пирофос- фатазы выделен из сточных вод Новый про- дуцент обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известным. Удельная активность в клеточном экстракте Е. coli ВКПМ В-4780 (LG 88) составляет 8,0-9,0 ед/мг белка, общая активность 1500-1800 ед. на 1000 мл культуральной жидкости. 1 табл

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению нового высокопродуктивного штамма, используемого для получения фермента - неорганической пирофосфатазы.

Целью изобретения является получение штамма Escherichia coil ВКПМ В-4780 (LG 88) - продуцент неорганической пирофосфатазы с более высокой ферментативной активностью.

Штамм Е. coll ВКПМ В-4780 (LG 88) - продуцент неорганической пирофосфатазы - выделен из сточных вод.

Штамм Е. coli LG 88 характеризуется следующими признаками.

Культу рал ьно-морфологические признаки.

Палочковидные клетки с закругленными концами, соотношение длины и ширины клетки 3x1. На мясопептонном агаре развивается в виде слабовыпуклых полупрозрачных, светло-желтых, бежевых колоний, а в самом млсопептонном бульоне вызывает диффузионное помутнение и образование осадка.

Физиолого-биохимические признаки.

Оптимальная температура роста 30- 37°С, рН среды 6,5-7,5, кишечная палочка погибает при 55±2°С в течение 1 ч, а при температуре 60±2°С - в течение 15 мин

Грамотрицательные, подвижные ката- лазоположительные, сбраживающие глюкозу палочки. Желатину не сбраживает

Культура Escherichia coli LG 88 хранится в столбиках МПА под слоем вазелинового масла при 4-20°С в течение 1 года

Пример. Культуру E.coli LG 88, законсервированную в столбике МПА под слоем вазелинового масла, для оживления пересевают на стерильные чашки Петри с агаризо- ванным рыбным гидролизатом и

о ел чэ

N 00

выращивают в термостате при 37°С в течение 2А ч.

Оживленную культуру используют для приготовления инокулята. Инокулят выращивают в качалочных колбах емкостью 750 мл по 250 мл среды в каждой. Состав среды, %: гидролизат отходов жмыха легких 1,0; гидролизат пекарских дрожжей 0,5; КНаРСМ 0,5; D-глюкоза 0,5. рН среды 7,2 доводят при помощи 2 н. едкого натрия. Среду стерилизуют 30 мин при 0,8 атм. Температура выращивания инокулята 37°С, продолжительность роста 18ч. Ферментацию проводят в ферментере типа Биолафит емкостью 20 л, заполненного 9 л указанной среды. Количество вносимого инокулята составляет 0,2% от общего объема среды. Время культивирования 5 ч, аэрация 5-6 л/мин, температура выращивания 37°С.

Клетки от культура л ьной жидкости отделяют центрифугированием (10 мин при 12000 об/мин).

Для определения пирофосфатазной активности клетки разрушают дезинтегратором со стеклянными шариками (диаметр шариков 150-200/мк) в течение 10 мин при 4500 об/мин. Разрушенные таким образом

клетки отделяют путем центрифугирования (15 мин при 15000 об/мин). В полученном супернатанте определяют пирофосфатаз- ную активность.

Активность неорганической пирофосфатазы определяют спектрофотометриче- ским методом (длина волны 660 нм) по интенсивности окраски продукта реакции индикатором. За единицу пирофосфатазной

активности принимают такое количество

фермента, которое при 30°С и при рН 9,0 за

1 мин гидролизует 1 мкмоль пирофосфата.

Сравнительные данные предлагаемого

продуцента - неорганической пирофосфатазы и известного штамма представлены в таблице.

Новый продуцент Escherichia coll LG 88 обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известным

продуцентом Escherichia coll K-12. Удельная активность в клеточном экстракте Е, Coli LG 88 превышает удельную ферментативную активность известного штамма в 2-2,2 раза.

Формула изобретения

Штамм бактерий Escherichia coll ВКПМ В-4780 - продуцент неорганической пиро- фосфатазы.