где Ri - группа формулы R2 - S02NHCO-, R2S02NHCONH- или CF3S02NH-, где R2 - хлорфенил, X - кислород или сера, Q - о-фенилен, незамещенный или замещенный гидроксигруппой или (Ci-Cq) - алкокси- карбонилом, или Q - цис-винилен, являющихся ингибиторами лейкоцитарной эластазы человека (ЛЭЧ). Указанное свойство предполагает возможность применения этих соединений в медицине.
Цель изобретения - получение новых гетероциклических кетонов, обладающих новым для этого ряда видом биологической активности - способностью ингибировать лейкоцитарную эластазу человека.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, в которых, если не указано иначе:
1) температуры даются в градусах Цельсия); операции осуществляют при комнатсо
ной температуре или при температуре окружающей среды, т.е. при температуре в пределах 18-25°С;
2)выпаривание растворителя осуществляют с использованием вращающегося испарителя при пониженном давлении (600-4000 Па 4,5-30 мм рт.ст.) с температурой бани до 60°С;
3)мгновенную хроматографию осуществляют на Мерк Кизельгеле (Art 9385) фир- мы Е.Меок, Да.рмштадт, ФРГ; если указывается кислый силикагель, то использовался материал, производимый фирмой Дж.Т.Бейкер Кемикал КО., Филлип- сбург, НДж, США и имеющий рН около 6 при суспендировании в воде, тонкослойную хроматографию (ТСХ) осуществляют на си- ликагельных CHLF пластинках Аналтек 0,25 мм (Art 21521), поставляемых фирмой Аналтек, Ньюарк, ДЕ, США:
4)обычно за ходом реакции следят с помощью ТСХ, и время реакции дается лишь для иллюстрации;
5)точки плавления являются нескорректированными и (разл) указывает разложение; данные точки плавления являются температурами, получаемыми для веществ, полученных как описано; полиморфизм может приводить в результате к выделению
веществ с различными точками плавления при некоторых получениях;
6)по данным ТСХ все конечные продукты были по существу чистыми и имели удовлетворительные спектры ЯМР и микроаналитические данные;
7)выходы даются только для иллюстра- ци и не обязательно являются величинами, которые могут быть получены при тщательной разработке процесса; если требовалось больше вещества, некоторые процедуры получения повторялись;
8)если они даются, данные ЯМР представлены в виде дельта-величин для основных диагностических протонов, данные в миллионных долях (млн.дол,) по отношению к тетраметилсилану (ТМС) в качестве внутреннего стандарта, определенных при 80 МГц или 250 МГц с использованием CDCIa, ДМСО-do или СОзОО в качестве растворителя; Аг означает ароматическую группу или сигнал;
9)пониженные давления даются в виде абсолютных давлений в Паскалях (Па); другие давления даются в виде давления по манометру в барах;
10)соотношения растворителей даются в виде обьем/объем (об./об.); соотношения твердых веществ даются в виде мае./мае, (м./м,);
11)масс-спектры (МС) снимались с энергии электронов 70 эВ при способе химической ионизации с использованием прямого экспозиционного зонда; когда они
5 даются, сообщаются только пики в десять процентов основного пика и более крупные;
12)когда сообщаются данные жидкостной хроматографии высокого давления (HPLC), дается tR (время удержания) FR (ско0 рость течения) дается в мл/мин, Col А представляет ODS аналитическую колонку Цорбакс (торговая марка) 4,6 мм х 25 см и Col В - Феноменекс (торговая марка) Цорбакс С-8 аналитическую колонку 4,6
5 мм х 35 см.
Номенклатура: для единообразия и ясности, где это возможно, используются наименования типа аминокислотная последовательность. Обычно стереохими0 ческая идентификация хирального центра в виде (S) указывает, что по оценке продукт содержит не менее 95% (З)-изомера при указанном центре; отсутствие идентификации при хиральном центре указывает на смесь
5 изомеров, которая при указанном центре не обязательно составляет смесь 1:1.
Пример. /4-/4-Хлорфенил)сульфо- ниламинокарбонил/бензоил/-Ьвалил-М/1 -/5-/гидрокси-метил)бензоксазол-2-ил/кар
0 бонил-2-метилпропил/- -пролинамид (формула 1, гетероцикл, содержащий X, N и Q - 5-/гидроксиметил/-бензоксазол-2-ил, RI R2-(S02) - NHCO-, R2 4-CIC6H4
а. З-амино-4-гидроксибензольный
5 спирт.
Смесь 10% (об./об.) палладия на угле (5,25 г) и 4-гидрокси-З-нитробензилового спирта (25,0 г) в этаноле (1,3 л (гидрируют в шейкере при 3,4 бар в течение 23 ч, после
0 чего смесь фильтруют через диатомовую землю и упаривают. Остаток подвергают мгновенной хроматографии с элюировани- ем смесью метанол:хлороформ (0:100 - 10:90), получая продукт (11,92 г, 60%) в виде
5 красного твердого вещества, ТСХ, Rf 0,14, метанол:хлороформ (5:95), МС, (М+1), 139, 138, 123, 122, 110.
Ь.(15)-Бензилоксикарбонил-1 -валил-Ы -/1-/гидрокси/-/5-/гидроксиметил/бензо
0 ксазол-2-ил/метил-2-метилпропил /-L-npo- линамид.
(15)-Бензилоксикарбонил-1.-валидгМ-/ 3-этокси-2-гидрокси-3-имино-1-/1-метилэ тилпропил/-1 -пролинамид-хлоргидрат (3,0
5 г) и спирт, полученный согласно примеру 1а (0,771 г), в абсолютном этаноле (20 мл) нагревают при 65°С в течение 20 ч, смесь растворяют в этилацетате, промывают (1 н. NaOH, солевым раствором), сушат сульфа- том магния и упаривают. Неочищенный продукт подвергают мгновенной хроматографии с элюированием смесью ацетошгекса- ны (55:46), получая продукт (858 мг) в виде белого твердого вещества, ТСХ, Rf 0,26, ацетон:гексан (3:2), МС, м/е 581 (М+1), 563, 501,473,455.
Вычислено, %: С 61,73; Н 7,10. N 9,29.
C31H40N407 1,25Н20
Найдено, %: С 61,81; Н 6,86, N 9,09.
c.(15)-Бензилоксикарбонил-1-валил- М/1-/5-//третбутилдиметилсилил-окси/ме тил/бензоксазол-2-ил/гидроксиметил-2-м етил пропил/-L-пролинамид.
Раствор продукта примера 1Ь (736 мг), трет-бутилдиметилсилилхлорида (380 мг), 4- диметиламинопиридина (7,8 мг) и триэтила- мина (0,37 мл) в дихлорметане (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Раствор затем растворяют в этилацетате. промывают(1 н. HCI, насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают, Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью ацетон:гексан (1:3), получая продукт (715 мг, 82%) в виде светло-желтого твердого вещества, ТСХ, Rf 0,46, ацетон:гексан (2:3), МС, м/е 695 (М+1), 679, 587, 563, 455.
Вычислено, %: С 63,54, Н 7,85, N 8,01
C37H54N40 -1,025Н20
Найдено, %: С 63,44, Н 7,75, N 7,54.
d.(3)-Бензилоксикарбонил-1 -взлил-М- /1-/5-//третбутилдиметилсилилокси/ме- тил/бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метилп ропил/-L-пролинамид.
Трет-бутиловый спирт (0,068 мл) добавляют к раствору продукта примера 1 с (500 мг) и периодинана Десс-Мартина (1,22 г) в дихлорметане (5 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученную суспензию распределяют между этилацетатом и 1:1 раствором насыщенного Na2S20s, насыщенного NaHCOa, слои разделяют и этил ацетатный слой промывают (один раз 1:1 раствором насыщенного N328203, насыщенного №НСОз, два раза насыщенным бикарбонатом натрия, один раз солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают.
Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии с элюированием смесью ацетон:гексан (1:3), получая продукт (448 мг, 90%) в виде белого твердого вещества, ТСХ, Rf 0,54, ацетон:гексан (2:3), HPLC, tR 6,18, Col A, FR 2, вода:ацетонитрил (1:9), МС, м/е 603 (М+1, основание), 677, 635, 585, 460. ,
Вычислено, %: С 63,72, Н 7,59. N 8,03.
C37H52N407SI 0,25Н20
Найдено, %: С 63,84, Н 7,45, N 7,70. е. Бензилоксикарбонил-Ьвалил-Ы-/1/5-/гидроксиметил/-бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метил пропил/-L-пролинам ид.
Фтористый тетрабутиламмоний (1,2 мл 1 М раствора в тетрагидрофуране) добавляют к раствору продукта примера 1d (418 мг) в тетрагидрофуране (5 мл). Полученный в результате красный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и выдерживают при 5°С в течение 16ч,
Красный раствор распределяют между этилацетатом и 1 н. HCI и этилацетатныГ слой промывают (насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный
продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью ацетон:гексаны (35:65) с последующей еще одной очисткой с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью метанол:хлороформ (2,5:97,5), получая продукт (183 мг, 53%) в виде белого твердого вещества, ТСХ, Rf 0,52, ацетон:гексаны (3:2), HPLC, tR 6,27, COI, A, , вода:ацетонит- рил (40:60), МС, м/е 579 (М+1), 561, 331,
225, 197, 91 (основание).
Вычислено, %: С 62,40, Н 6.76, N 9,39.
C31H3BN407 1.0Н20
Найдено, %: С 62,23, Н 6,40, N 9.14. f. /4-/(4-Хлорфенил)сульфониламино- карбонил/бензоил/-1 -валил-М-/1-/5- (гид- роксиметил)бензоксазол-2-ил/карбонил-2 -метилпропил/- -пролинамид (формула I,
гетероцикл, содержащий X, N и 0-5-/гидро- ксиметил/бензоксазол-2-ил; Ri R2(S02) NH СО-; R2 4-С1СбН4).
Трифторметансульфокислоту (0,140 мл) добавляют к раствору вещества, полученного
согласно процедуре примера 1е, (182 мг) в дихлорметане (8 мл), перемешивают в течение 15 мин и смесь упаривают. Остаток растворяют в тетрагидрофуране (10 мл), обрабатывают 4-диметиламинопиридином
(293 мг), 4-(4-хлорфенил)сульфониламино- карбонил/бензойной кислотой (113 мг) и хлоргидратом-1-(3-диметиламинопропил)3- -этилкарбодиимида (66,5 мг) и перемешивают при комнатной температуре в течение 16
ч. Смесь распределяют между 1 н. HCI и этилацетатом, этил ацетатную фазу промывают (1 н. HCI, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью метанол:хлороформ:уксусная кислота (1,5:97,5:1,0), получая продукт (77 мг, 32%) в виде светло-желтого твердого вещества ТСХ, Pf 0,28, метанол;хлороформ: уксусная кислота (5:9:1), МС, м/е 766 (М+1). 758,592,562,421,346,328.
Вычислено, %: С 55,48, Н 5,49, N 8,29.
ют этилацетатом и промывают (тремя порциями 1:1 смеси насыщенный Ма25202:на- сыщенный NaHCOs, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают.
Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью ацетон:гексан (25:75), получая 2,20 г твердого вещества, ТСХ, Rf 0,21, ацетон:гексаны (30:70), МС. м/е 635
(М+29), 608 (М+2), 607 (М+1), 374, 331, 91. Вычислено, %: С 62,43, Н 6,38, N 9,10
C32H38N408 0.50Н20
Изобретение касается гетероциклических кетонов, в частности получения соединений общей ф-лы I: Rj- -aohNH-CtCHtHjljI-CIO-N-pC(ObNH-C(CHtCHj jVC(0) где Ri - -C(0)-NH-S(0)2R2; -NH-C(0)-NH- S(0)2R2 или -NH-S(0)2-CF3 при R2 - Х-кислород или сера; О - орто-фенилен (возможно замещенный) ОН, С1-С4-алкокси- карбонилом) или цис-винилен, являющихся ингибиторами лейкоцитарной эластазы человека. Цель - создание новых с иной активностью веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией кислоты ф-лы II Ri-CeH -n- С(0)-ОН с соответствующим аминокетоном. Новые соединения не имеют признаков токсичности и оказывают ингибирующее действие лейкоцитарной эластазы человека на пептидном субстрате низкомолекулярного веса (анилида метоксисукцинилаланилпро- лилвалин-п-нитроанилида).
Сз7Н4оС1№ОэЗ 1.0Н20 1,ОСНзСООН 15
Найдено, %: С 55,42, Н 5,33, N 8,77
П р и м е р 2. /5/-4-//4-Хлорфенил/суль- фониламинокарбонил/бензоил/-7-валил- Ы-/1-/5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2 -ил/карбонил- 2-метилпропил/-пролина- мид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и 0-5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2- ил, RI - Ra (SOa) NH -CO-, R2 4-CICeH4
а. /15/-Бензилоксикарбонил-Ьвалил- М-/1-/гидрокси/-/5-метокси-карбонил/бе нзоксазол-2-ил/метил-2-метилпропил/-1 - пролинамид.
Перемешиваемый раствор /1S/ бензи- -локсикарбонил-1--валил-М-/3-этокси-2-гидрокси-3-имино-1-/1-метилэтил/пропил-1-1-пролинамид-хлоргидрата (5,47 г)и 4-карбо- метокси-2-аминофенола (5,10 г) в сухом этаноле (50 мл) нагревают в течение 3 ч при 60°С в атмосфере азота. Смесь растворяют в этилацетате, промывают (1 н. HCI, 1 н. NaOH, три раза, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают, Неочищенный продукт подвергают мгновенной хроматографии при элюировании смесью ацетон:гексаны (30:70), получая 2,210 г продукта, ТСХ, Rf 0,18, ацетон:гексаны (35:65), МС, 649 (М+41), 637 (М+29), 611 (М+3), 6ГО (М+2), 609 (М+1), 591,501.
Вычислено, %: С 62,73, Н 6,74, N 8,76
Сз2Н4оМ40в О.ЗбСНзСОаСзНз
Найдено, %: С 62,71, Н 6,73, N 8,67. - о. /8/-Бензилоксикарбонил-1 -8алил-М- /1-/5-метоксикарбонил /-бензоксазол-2-ил / /карбонил-2-метилпропил/- -пролинамид.
Трет-бутанол (0,340 мл) добавляют к раствору продукта примера 2а (2,70 г) и пе- риодинана Десс-Мартина (4,62 г) в дихлор- метанв (20 мл) и раствор перемешивают при комнаткой температуре в течение 22 ч. Полученную в результате суспензию разбавля
Найдено, %: С 62,43, Н 6,24, N 8,90 с. /5/-1 -Валил-1М-/1 //5-/метоксикарбо- нил/бензоксазол-2-ия /карбонил-2-метил пропил/-L-пролинамид,
К перемешиваемому раствору продукта
примера 2Ь (500 мг) в дихлорметане (4 мл) в атмосфере азота, добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,365 мл). Спустя 5 мин реакционную смесь выливают в дистиллированную воду (100 мл) и экстратируют три раза дихлорметаном, Водный слой доводят до рН 8 с помощью бикарбоната натрия и промывают три раза дихлорметаном, водную фазу обрабатывают 1 н. гидроокисью натрия (50 мл) и промывают
еще один раз дихлорметаном. Органические промывные жидкости объединяют, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая
185 мг (48%) белой пены, ТСХ, Rf 0,22, метанол:хлороформ (5:95).
с./5/-4-/(4-Хлорфенил)сульфонилами нокарбонил/бензоил/-1 -валил- N-1 /-/5-ме- токсикарбонил/бензоксазол-2-ил/карбон ил-2-метилпропил/- - пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q-5/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, RI R2 (S02) NH CO-, R2 4-С1СеН4
Хлоргидрат 1-/3-диметиламинопро- пил/3-этилкарбодиимида (160 мг) добавляют к раствору продукта примера 2с (185 мг),
1-гидроксибензотриазола (110 мг) и 4-/(4- хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензойной кислоты (280 мг) в тетрагидрофуране (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (три раза 1 н. HCI, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии с
элюированием смесью ацетон:дихлорме- тан:уксусная кислота (20:80:1 капля/мл), получая 160 мг твердого вещества, Rf 0,36, мета но л: хлороформ: уксусная кислота (5:95:1 капля/мг) HPLC, tp 15,84, Col A, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран:трифт
оруксусная кислота (55:35:15:0,1), FR 2, МС, м/е 684 (Мь29), 656 (М+1). 375, 374, 356, 355, 354, 352, X 302, 283, 260, 259, 178, 163.
Вычислено, %: С 55,07, Н 5,31, N 8,03
CaaHUoCINsOioS 1,ОН20 -1,ОСНзС02Н
Найдено, %: С 55,05, Н 5,13, N 8,06.
П р и м е р 3. /5/-/4-/(4-Хлорфенил)суль- фониламинокарбонил/бензо-ил/-1 -валил- М-/1-/6-(метоксикарбонил)бензоксазол-2- ил/карбонил-2- метилпропил/ L-пролина- мид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q 6-/метоксикарбонил/бензоксазол- 2-ил, Ri Ra (S02) NH CO-, R2
а. /15/-Бензилоксикарбонил-1 -валил- М-/1-/гидрокси/-/6-/метокси-карбонил/б ензоксазол-2-ил/-метил-2-метил пропил /- пролинамид.
Перемешиваемый раствор /15/-бензи- локсикарбонил-1 -валил-1М-/3-этокси-2-гид рокси-3-имино- 1-(1-метилэтил)пропил/-1 - пролинамид-хлоргидрата (1,00 г) и 5-карбо- метокси-2-аминофенола (930 мг) в сухом этаноле (9 мл) нагревают в течение 4 ч при 60°С в атмосфере азота. Смесь растворяют в этилацетате, промывают (два раза 1 н. NaOH, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт подвергают хроматографии с элюи- рованием смесью ацетон:гексаны (35:65), получая 300 мг продукта, ТСХ, Rf 0,50, ацетон:гексаны (45:55), МС, м/е 610 (М+2), 609 (М+1).
Ь./5/-бензилоксикарбонил- -валил-К1- /1-/6-/метоксикарбонил/бензоксазол-2- ил/карбонил-2-метил пропил/-L-пролинам ид.
Трет-бутанол (0,050 мл) добавляют к раствору продукта примера За (300 мг) и периодинана Десс-Мартина (630 мг) в дих- лорметане (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 17ч. Полученную в результате суспензию разбавляют этилацетатом и промывают (тремя порциями 1:1 смеси насыщенный Ма252Оз:№НСОз, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии с элюированием смесью ацетон:гексан (30:70), получая твердое вещество, которое растворяют в ацетонитри- ле (30 мл) и обрабатывают 300 мг активированного угля. Смесь перемешивают в течение 10 мин. фильтруют и упаривают, получая 257 мг продукта, ТСХ, Rf 0,49, ацетонггексаны (40:60), МС, м/е 635 (М+29), 608 (М+2), 607 (М+1).
Вычислено, %: С 62,43, Н 6,38, N 9,10
C32H38l U08 0,5 Н20
Найдено, %: С 62,62. Н 6,28, N 8,94
c./5/-1 -Валил-М-/1-/6-/метоксикарбо- нил/бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метил
пропил-1 -пролинамид-трифторметансул ьфокислотная соль.
К перемешиваемому раствору продукта примера ЗЬ (210 мг) в дихлорметане (1,5 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям
трифторметансульфокислоту (0,15 мл). Через 40 мин реакционную смесь упаривают. Полученное твердое вещество помещают под вакуум на 1 ч и используют непосредственно в примере 3d, приведенном ниже,
ТСХ, Rf 0,00, ацетон:гексаны (25:75), МС. м/е 244, 242, 235, 195, 189, 186, 181, 178, 121, 105,93,92,91, 79.
d,/5/-/4-/(4-Хлорфенил)сульфонила- минокарбонил/бензоил/-1--валил- N-/1-/6(метоксикарбони1)бензоксазол-2-ил/-кэрбо нил-2-метилпропил/-1 - пролинамид (формула f, гетероцикл. содержащий, X, N и Q 6-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, RI R2 (S02). NH. CO-, R2
Хлоргидрат 1-/3-Диметиламинопро- пил/-3-этилкарбодиимида (75мг) добавляют к раствору продукта примера Зс, 1-гидро- ксибензотриазола (50 мг) и 4-//4-хлорфе- нил/сульфониламинокарбонил/-бензойной
кислоты (130 мг) в метиленхлориде (2 мл) и тетрагидрофуране (2 мл) с последующим добавлением 4-метил-морфолина (0,041 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16ч. К реакционной
смеси добавляют дополнительно 4-метилморфолин (0,041 мл) и реакционную смесь
перемешивают еще 7ч. Реакционную смесь
разбавляют этилацетатом, промывают (1 н.
HCI три раза, солевым раствором), сушат
над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии с элюированием смесью ацетон:метиленхлорид:уксусная кислота (30:70:1), получая твердое вещество (160 мл),
которое далее очищают с помощью мгновенной хроматографии с использованием градиентного элюирования смесью аце- тон:метиленхлорид:уксусная кислота (500 мл, 100:1,900 мл 10:90:1, затем 50:50:1), получая целевое соединение (71,6 мг), ТСХ, Rf - 0,17, ацетон:хлороформ:уксусная кислота (10:90:1), HPLC, T.R 15,84, Col A, FR 2, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран.трифт оруксусная кислота (55:35:15:0,1), МС, м/е
794 (М+1), 778, 777, 776, 423, 422, 421, 384, 374, 357, 356, 355, 354, 259.
Вычислено, %: С 54,57, Н 5,3b, N 7.76 CseH/ioCINsOioS 1,0 Н20 1,5 СНзС02Н Найдено, %: С 54,31, Н 5,19, N 7,81
П р и м е р 4. /4-/(4-Хлорфенмл)сульфо- ниламинокарбонил/бензоил/- L-валил-М- /1-/2-оксазолил/карбонил-2-метил пропил /-L-пролинзмид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q 2-оксазолил, Ri Ra (SCte) NH CO-, R2 4-CIC6H4
a.2-Триметилсилилоксазол. н-Бутиллитий (28,5 мл 2,54 М раствора в
гекса е) добавляют к раствору с температурой -78°С оксазола (5,0 г) в простом эфире (150 мл). Полученный в результате раствор перемешивают при -78°С в течение 30 мин с последующим добавлением триметилси- лилхлорида (7,86 г) и смесь оставляют подогреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь перегоняют, собирают фракцию с температурой кипения примерно 130°С, получая 2-триметилсилилоксазол (5,12 г), МС, м/е 142 (М+1), 91, 73.
b./15/-Бензилоксикарбоэдл-1-валил-
N-/1 -/2-оксазолил /-гидр0ксиметил-2-м ил пропил/-L-пролинамид.
Раствор /5/-бензилоксикарбонилЧ -ва- лил-М-/1-формил-2-метилпропил/-Ц-про- линамида (7,4 г) и продукта примера 4а (4,84 г) в толуоле (10 мл) нагревают при 80°С в течение 24 ч и еще в течение 14 ч при 60°С. Растворители выпаривают, остаток растворяют в тетрагидрофуране (50 мл), обрабатывают 1 н. HCI (5 мл) и перемешивают в течение 30 мин, Смесь растворяют в этила- цетате, промывают (1 н. HCI, насыщенным бикарбонатом натрия,- солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный материал очищают с по- мощью мгновенной хроматографии с использованием злюирования смесью ацетон:гексаны (30:70), получая продукт (4,57 г), ТСХ, Rf 0,31, метанол:хлороформ (5:95), МС, м/е 501 (М+1), 483, 393.
Вычислено, %: С 62,38, Н 7,25, N 11,19
С2бНзбМОе
Найдено, %: С 62,52, Н 7,22, N 10,87.
c./5/-Бензилоксикарбонил-1.-валил-М- /2-метил-1 -/-/2-оксазолил /-карбонил /пропил /-L-пролинамид.
Трет-бутанол (0,83 мл) добавляют к раствору продукта примера 4Ь (4,4 г) и перио- дининана Десс-Мартина (15 г) в дихлорметане (150 мл) и смесь перемешивают в течение 16ч. Получающуюся суспензию распределяют между смесью насыщенный NaaSaOa : насыщенный NaHCOa (1:1) и этилацетатом. Этилацетатный раствор промывают (смесью насыщенный №2520з:насыщенный МаНСОз (1:1), насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и
упаривают. Остаток очищают с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью ацетон:гексаны (35:65), получая 4,8 г твердого вещества. Это твердое вещество растворяют в этилацета- те, промывают (смесью насыщенный N328203: насыщенный ЫаНСОз(1:1), насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают, получая продукт в виде белой пены (3,74 г), ТСХ, Rf 0,32, ацетон:гексаны (40:60), МС, м/е 499 (М+1), 266.
Вычислено, %: С 62,64, Н 6,87, N 11,24
C26H34N406
Найдено, %: С 62,30, Н 6,74, N 11,01.
d. /4-/(4-Хлорфенил)сульфониламино- карбонил/бензоил-1-валил-1Ч- /1-(2-оксазо- лил)карбонил-2-метилпропил/-Ь-пролина мид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q 2-оксазолил, Ri R2 (SOa) NH CO-, R2 4гС1СбН4).
Трифторметансульфокислоту (0,89 мл) добавляют к раствору продукта примера 4с (1,0 г) в дихлорметане (15 мл) и перемешивают в течение 10 мин, растворитель упаривают и остаток помещают под высокий вакуум на 20 мин. Остаток растворяют в тетрагидрофуране (40мл) и обрабатывают хлор- гидратом 1-/3-диметиламинопропил/-3- этилкарбодиимида (429 мг), 4-/(4-хлорфе- нил)сульфониламинокарбонил/бензойной кислотой (800 мг) и 4-диметиламинопириди- ном (1,97 г). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч, растворяют в этилацетате, промывают (1 н. HCI, насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенное вещество очищают с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью ацетон:гексаны:уксусная кислота (10:90:1-20:80:1), получая продукт (930 мг), ТСХ, Rf 0,40, метанол:хлороформ:уксусная кислота (5:95:1), HPLC, tR 7,35, Col A, FR 2, вода:ацетонитрил:тетрагидрофу- ран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1), МС, м/е 685 (М+1), 668, 393, 377, 266, 248.
Вычислено, %: С 54,07, Н 5,47, N 9,27
C32H36CIN50eS 0,5 Н20 1,0 СНзСООН
Найдено, %: С 53,78, Н 5,33, N 9,25 П р и м е р 5. /4-/(4-Хлорфенмл)сульфо- ниламинокарбонил/бензоил/Ј-валил-Ы-/1/- (2-бензотиазолил)карбонил-3-метилпро- пил/- -пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q 2-бензотиазолил, RI R2 (S02) NH CO-, R2 4-CIC6H4
a.М-а-Бензилоксикарбонил-Ы-метокси- N-метилвалинамид.
Раствор хлоргидрата 1-/3-диметилами- нопропил/-3-этилкарбодиимида (19,07 г) в дихлорметане (500 мл) охлаждают до -10°С. К данному раствору добавляют 1-гидрокси- бензотриазол (13,44 г) и 4-метилморфолин (11,5 мл). К реакционной смеси добавляют по каплям раствор М-(бензилоксикарбонил)- L-валина (25,0 г) в дихлорметане (200 мл). После окончания добавления смесь подогревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 0,5 ч, а затем охлаждают до 10°С. К перемешиваемой реакционной смеси по каплям добавляют смесь хлоргидрата N-метил-О-метилгидрок- силамина (9,7 г) и 4-метилморфолина (11,5 мл) в дихлорметане (150 мл). Реакционную смесь подогревают до температуры окружающей среды при перемешивании в течение ночи. Смесь упаривают и остаток распределяют между водой и этилацетатом. Органический слой промывают (10%-ной HCI, насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния, упаривают сушат в течение ночи под глубоким вакуумом, получая продукт в виде смолы (26,25 г), которая затвердевает в морозильнике, ТСХ, Rf 0,57, хлороформ:ме- танол (40:1), МС, м/е 295 (М+1). 234, 187, 162, 152, 119.
b./5/-1-/2-Бензотиазолил/2-бензилок- сикарбонил/амино-З-метил-1-бутанол.
Сухой эфир (5 мл) охлаждают до -78°С и добавляют н-бутиллитий (6,0 мл 2,54 М раствора в гексане). Быстро по каплям добавляют раствор бензотиазола (1,83 г) в сухом эфире (15 мл). Перемешивание при -78°С продолжают в течение Юмин. Черезтонкую трубочку (канюлю) добавляют эфирный раствор (10 мл) амида, полученного согласно процедуре примера 5а, и использованного без дополнительной очистки, (2,00 г) и реакционную смесь оставляют подогреваться до 30°С при перемешивании в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают путем выливания ее в насыщенный NH/iCI и экстрагируют этилацетатом. Экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают, получая желтое глэсло. Очистка с помощью мгновенной хроматографии, элюмрование смесью гексан:этила- цетат (10:1), дают продукт в виде желтого стекла (0,98 г) ТСХ, Rf 0,67, гексан:этила- цетат (2:1). МС, м/е 368 (М+1), 206, 191. 162, 135, 91 (основание),
c.2-Амино-1-/2-бензотиазолил/-3-ме- тил-1-бутанон,
Вещество, получанное согласно процедуре примера 5Ь (0,94 г), растворяют в смеси дихлорметана (20 мл) и анизола (1 мл) в атмосфере азота. Добавляют трифюрметан- сульфокислоту (1 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и
экстрагируют водой. Водные экстракты промывают дихлорметаном, доводят до насыщенным бикарбонатом натрия и экстрагируют дихлорметаном. Органический раствор сушат сульфатом натрия и упарива0 ют, получая желтое масло (0,50 г). ТСХ, Rf 0,36, гексан:этилацетат (2:1).
d.Бензилоксикарбонил-1 -валил-М-/1- (2-бензотиазол и л)-карбонил-2-мети л пропил /-L-пролинамид.
5 Дихлорметановый раствор материала, полученного согласно процедуре примерз 5с и использованного без дополнительной очистки (0,5 г), 1-гидроксибензотриазола (0,58 г) и бензилоксикарбонил-Ь-валил-Ь
0 пролина (0,74 г) обрабатывают хлоргидра- том 1-/3-диметиламинопро-пил/-3-этилкар- бодиимида (0,47 г) и реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота в течение 15 ч. Реакционную смесь разбавляют дих5 лорметаном, промывают (насыщенным бикарбонатом натрия. 10%-ный HCI), сушат сульфатом натрия и упаривают, получая желтое масло (1,48 г), ТСХ, Rf 0,39, хлоро- форм:метанол (50:1), МС, м/е 565 (М-И,
0 основание), 332, 331.
e.1 -Валил-М-/1-(2-бензотиазолмл)кар- бонил-2-метил-пропил/-L-пролинамид.
Амид, полученный в соответствии с процедурой примера 5d и использующийся без
5 дополнительной очистки (1,20 г), подвергают реакции снятия защитной группы с использованием процедуры аналогичной процедуре примера 5с, получая продукт в виде масла (0,34 г, 37%), ТСХ, Rf 0,34,
0 хлороформ:метанол (10:1).
f./4-/(4-Хлорфенил)сульфониламмно- карбонил/бензоил-1 -валил-М- /1-(2-бензо- тиэзолил)карбонил-2-метилпропил/-1 -про линамид (формула I, гетероцикл, содержа5 щий X, N и Q 2-бензотиазолил, RI R2 (ЗОз) NH CO-, R2 ).
Амин, полученный в соответствии с процедурой примера 5е и использующийся без дополнительной очистки (0,34 г), 1-гидро0 ксибензотриазол (0,21 г) и 4-/(4-хлорфе- нил)сульфониламинокарбон ил/бензойную кислоту (0,27 г) объединяют в дихлорметане (12 мл), суспензию обрабатывают хлоргид- ратом 1 -/3-диметиламиноп ропил /-3-этил5 карбодиимида (0,17 г). Перемешивание продолжают в течение 7,5 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают (насыщенным бикарбонатом натрия, 10%-ной HCI), сушат сульфатом натрия и упаривают, получая маслянистую пену. Очистка с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью гек- сан:этияацетат:уксусная кислота (50:50:1,5) дает продукт в виде белого твердого вещества (0,32 г), ТСХ, Rf 0,29, гексаны:этилаце- тата:уксусная кислота (50:50:1,5) HPLC, tR 26, Col A, FR 2, вода:ацетоиитрил:тетра- гидрофуран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1), МС, м/е 752 (М+1), 423,421, 393, 377, 342, 332,315, 314 (основание), 313, 312, 136.
Вычислено, %: С 57,07, Н 5,13, N 9,09
СзбНз8С М 0732 ОзСНзСООН
Найдено, %: С 57,32, Н 5,45, N 8,76.
Примерб, /5/-/4-/(4-Хлорфе- нил/сульфониламинокарбонил/ бензоил/- 1 -валил-М-/2-метил-1-(2-тиазолил)карбонил пропил/-.- пролинамид (формула I, гетеро- цикл, содержащий X, N и Q 2-тиазолил, R1 R2 (S02) NH CO-, R2 4-С1С6Н4).
a./5/-2-/Бензилоксикарбонил/амино- 3-метил-1-/2-тиазолил/-1- бутанон. ,
К охлажденному (-35°С раствору тиазо- ла (1,23 мл) в сухом тетрагидрофуране (40 мл) добавляют н-бутиллитий (6,6 мл 2,18 М раствора в гексане) на протяжении 3 мин. Темно-коричневую реакционную смесь перемешивают в температурном интервале от -30 до -25°С в течение 10 мин. Быстро на протяжении 1 мин добавляют раствор вещества, полученного согласно методике примера 5а и использующегося без дополнительной очистки (1,7 г), в сухом тетрагидрофуране (15 мл). Перемешивание при -30°С продолжают в течение 15 мин. Смесь резко охлаждают выливанием ее в насыщенный хлористый аммоний (100 мл) и органические вещества экстрагируют эти- лацетатом. Экстракты промывают насыщенным бикарбонатом натрия, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая коричневое масло. Очистка с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью гексан:этилацетат (2:1) дает продукт в виде желтого масла (1,81 г, 98%) ТСХ, Rf 0,45, гексан:этилацетат (2:1), МС, м/е 319 (М+1), основание), 275.
b./5/-2-Амино-3-метил-1-(2-тиазолил)- 1-бутанон.
Кетон, полученный в соответствии с процедурой примера ба (1.8 г), растворяют в дихлорметане (30 мл) и обрабатывают трифторметансульфокислотой (2,5 мл) в виде одной порции, реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 5 мин. Смесь разбавляют дихлорметаном и экстрагируют водой. Водную фазу доводят до основной величины рН
с помощью насыщенного бикарбоната натрия, а затем экстрагируют дихлорметаном. Экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают, получая продукт в виде темно-желтого
масла (0,78 г, 75%), ТСХ, Rf 0,7, хлоро- форм:метанол (10:1), МС, м/е 185 (М+1, основание) 167, 140,
с. /5/-Бензилоксикарбонил-Ьвалил-Ы- /2-метил-1-Ь72-тиазолил/карбонилпроп
ил Ч -пролинамид.
Аминокетон, полученный в соответствии с процедурой примера 6Ь (0,73 г), растворяют в дихлорметане (25 мл). Последовательно к раствору добавляют
бензилоксикарбонил-1 -валил-1 -пролин (1,38 г), 1-гидроксибензотриазол (1,07 г) и хЛоргидрат 1-/3-диметиламинопропил/-3- этилкарбодиимид(0,76 г). Смесь перемешивают в течение ночи при температуре
окружающей среды в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном, промывают (насыщенным бикар.бонатом натрия, 10%-ной HCI), сушат сульфатом натрия и упаривают, получая
желтое масло (2,5 г). Очистка с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью гексажзтилаце- тат (1:1) дает продукт в виде твердой пены {1,6 г), ТСХ, Rf 0,3, гексан:этилацетат (1:1),
МС, м/е 515 (М+1, основание). 407, 331, 282,91.
Вычислено, %: С 59,64-, Н 6,74, N 10,70
35
C26H34N405S -0,5Н20
Найдено, %: С 59,56, Н 6,54, N 10,42.
d./5/-1 -Валил-М-/2 метил-1-/2-тиазо- лил/карбонилпропил/-1 -пролин-аминтриф торметансульфокислотная соль.
0 Кетон, полученный согласно примеру 6с (0,51 г), растворяют в дихлорметане (15 мл) и обрабатывают трифторметансульфокислотой (0,44 мл) в виде одной порции. Реакционную смесь перемешивают при
5 температуре окружающей среды в течение 15 мин. Упаривание и сушка в глубоком вакууме дают белую смолу (1,17 г, более чем 100%). Вес неочищенного продукта, составляющий избыток по отношению к 100%-му
0 выходу, предписывается трифторметан- сульфокислоте.
e./ S /-/4-/(4-Хлорфенил)сул ьфонилами- нокарбонил/бензоил-Ьвалил-N- /2-метил- 1-(2-тиазолил)карбонилпропил/-1 -пролина
5 мид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q - 2-тиазолил, Ri Ra (S02J NH CO-, Ra 4-CiCeH4
Неочищенный аминокетон, полученный согласно процедуре примера 6d и использу- ющийся без дополнительной рчистки (0,13
г), 4-/(4-хлорфенил)сульфонаминокзрбо- нил/бензойную кислоту (0,34 г) и 4-метил- морфолин (0,59 мл) растворяют в тетрагидрофуране и смесь обрабатывают хлоргидратом 1-/3-диметиламинопропил/- 3-этилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота. Упаривание дает остаток, который распределяют между водой и этилацетатом, Органическую фазу промывают(10%-ной HCI, водой, солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают. Мгновенная хроматография, элюирование смесью хлороформ:мета- нол:уксусная кислота (100:2,5:0,5) дают продукт в виде белой пены (0,50 г). Еще одна очистка (та же система растворителей, что использовалась выше) дает целевой продукт в виде белой пены (0,43 г), ТСХ, Rf 0,35, хлороформ:метанол:уксусная кислота (100:2,5:0,5), МС, м/е 702 (35CI- М+1), 283, 282 (основание), 120, HPLC- IR 8,54, Col A, FR 2, вода:ацетонитрил:тетрагидрофу- ран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1). П р и м е р 7. /(4-Хлорфе- нил)сульфонил/уреидо/бензоил/-1 -валил -N- /1-/5-(метоксикарбонил)бензоксазол-2- ил/карбонил-2-метилпропил - - пролина- мид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N, Q 5-/метоксикарбонил/-бензоксазол-2- ил, RI R2 (SOz) NH CO, NH, R2 ).
a./3/-1 -Валил-М-/1-/5-(метоксикарбо- нил)бензоксазол-2-ил/карбо- нил-2-метил п- ропил/-1 -пролинамид.
К перемешиваемому раствору продукта примера 2Ь (1,00 мг) в метиленхлориде (8 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,73 мл). Спустя 10 мин реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают три раза дистиллированной водой. Величину рН раствора доводят до 8 с помощью добавления раствора насыщенного бикарбоната натрия (25 мл). Основной раствор энергично экстрагируют дихлорметаном 6 раз. К получающемуся в результате водному слою добавляют хлористый натрий (10 г) и смесь экстрагируют дважды дихлорметаном. Все органические экстракты объединяют, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая продукт(620 мг), ТСХ, Rf 0,20, метанол:хло- роформ (5:95).
b./5/-/4-/М1-/(4-Хлорфенил/сульфо- нил/уреидо/бензоил/- -валил-М- /1-/5- (метоксикарбонил)бензоксазол-2-ил/-карбо нил-2-метилпропил/- L-пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N и Q 5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, RI R2 (S02) NH CO NH, R2
Хлоргидрат 1-/3-димвтиламинопро- пил/3-этилкарбодиимида (100 мг) добавляют к раствору продукта примера 7а (225 мг), 1-гидрооксибензотриазола (70 мг) и 4-/N - /(4-хлорфенил/сульфонил/ у реи до /-бензойной кислоты (190 мг) в дихлорметане (3
мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (1 н. HCI три раза), солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают.
Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии, при элюирова- нии смесью ацетон:метиленхлорид:уксус- наая кислота (10:90:1), получая целевое соединение (271 мг)в виде твердого вещества, ТСХ, Rf 0,14, ацетон:дихлорметан:ук- сусная кислота (20:80:1), HPLC, IR 13,47, Со A, FR 2, вода:ацетонитрил:тетрагид- рофуран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1), МС, м/е 699, 374, 245, 219,
197, 178, 120.
Вычислено, %: С 51,55, Н 5,62, N9,15.
C38H44CIN6OioS -3.7Н20 0,70 СНзС02Н
Найдено, %: С 51,40, И 4,97, N 9,8 П р и м е р 8. /4-/(Три фторметилсульфо- ил/амь бензоил/-1 -валил-Ы-/1-/5-метокси- карбонил/бензоксазол-2-ил/карбонил-2-ме тиленпропил/-1 - пролинамид (формула I, ге- тероцикл, содержащий X, N и Q - 5-(меток- сикарбонил/бензоксазол-2-пл, RI - СРз (S02) NH-).
a.Этил 4-//трифторметилсульфо- нил/амино/бензоат.
Ангидрид трифторметансульфокислоты (4,1 мл) добавляют по каплям к предварительно охлажденному (0°С) раствору этил-п- аминобензоата (3,3 г) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С, затем оставляют подогреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 ч. После того, как реакционную смесь упарили, к остатку добавляют этилацетат (125 мг)
и полученный в результате органический растнор промывают(1 н. HCI, затем солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают. Остаток очищают с помощью мгновенной хроматографии с элюированием
смесью хлороформ:метанол (95:5), получая продукт в виде белого порошка (1,27 г), ТСХ, Rf 0,37, хлороформ:метанол (90:10),
b.4-//(Трифторметилсульфонил)ами- но/бензойная кислота.
Раствор 1 н. NaOH (8,4 мл) добавляют к
перемешиваемому раствору продукта примера 8а (1,25 г) в метаноле (25 мл). Добавляют воду (2 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. После отгонки метанола под вакуумом водоструйного
насоса полученный водный остаток разбавляют водой (20 мл). Водный раствор промывают этилацетатом, подкисляют до рН 2 с помощью 1 н. HCI и экстрагируют этилацетатом (общее количество 40 мл). Органическую фазу сушат сульфатом магния и упаривают, получая продукт в виде белого порошка (1,05 г), ТСХ, Rf 0,4, хлоро- форм:метанол:уксусная кислота (96:4:0,2).
c./5/-1 -Валил-М-/1-/5-(метоксикарбо- нил)бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метилп ропил/-1.-пролинамид.
К перемешиваемому раствору продукта примера 2Ь (750 мг) в метиленхлориде (5 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,53 мл). Спустя 20 мин реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают три раза дистиллированной водой. К объединенным водным слоям добавляют хлористый натрий (5 г) и полученный раствор доводят до рН 8 с помощью добавления раствора насыщенного бикарбоната натрия (20 мл). Основной раствор энергично экстрагируют дихлорметаном восемь раз. Органические слои объединяют, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая продукт (420мг), ТСХ, Rf 0,28, метанол: хлороформ (5:95).
d./4-//Трифторметилсульфонил/ами- но/бензоил/-1 -валил-М-/1-/5- (метоксикар- бонил)бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метил пропил/Ч.- пролинамид (формула I, гетеро- цикл, содержащий X, N и Q 5-/метоксикар- бонил/бензоксазол-2-ил, Ri CFa(S02) NH-).
Хлоргидрат 1-/3-диметиламинопро- пил/-3-этилкарбодиимида (240 мг) добавляют к раствору продукта примера 8с (420 мг), 4-диметиламинопиридина (110 мг) и 4- /трифторметилсульфонил/-амино/-бензой ной кислоты (340 мг) в тетрагидрофуране (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (1 н. HCI три раза, солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии, при элюирова- нии смесью метанол:хлороформ:уксусная кислота (20:800:1), получая целевое соединения (330 мг) в виде твердого вещества, ТСХ, Rf 0,50, метанол:хлороформ:уксусная кислоты (5:95:1), HPLC, tp 15,61, CoL A, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран:уксус ная кислота (55:35:15:0,1), FR 2, МС, м/е 752 (М+29), 724 (М+1), 706,374,356,351,323.
Вычислено, %: С 51,57, Н 5,20, N 8,95.
СзаНзбРз ОэЗ 0,60 Н20 0,80 СН3С02Н Найдено. %: С 51,29, Н 5,07, N 8,97
Исследование биологической активности гетероциклических кетонов.
Силу действия соединений, полученных по предлагаемому способ, в качестве ингибиторов эластазы прежде всего определяют по способности соединений ингибироеать действие лейкоцитарной эластазы человека (ЛЭЧ) на пептидном субстрате низкого молекулярного веса. Силу ингибитора или его активность оценивают с помощью кинетического определения константы диссоциации (Ki) комплекса, образующегося при взаимодействии ингибитора с ЛЭЧ. Используемым субстратом был анилид метоксисук- цинил-аланил-пролилвалин-п-нитроанилид.
В исследованиях используется фермент ЛЭЧ фирмы Эластитин Продактс, Сент-Луис, Миссури или очищенный согласно методике Vlscarello, B.R. и др.
С использованием очищенной ЛЭЧ стандартную степень или скорость получения п-нитроаналина измеряют при 25°С спектрофотометрически в видимом спектре при 410 нм по автоматическим данным, получаемым от спектрофотометра Сагу 210 (фирма Вариан Ассошиэйтс). Реакции инициируют с помощью инъекции 10 мкл раствора ЛЭЧ в 3-миллилитровую кювету, содержащую 2,89 мл буфера (10-миллимо- лярный фосфат натрия, 500-миллимолярный NaCI, рН 7,6), 50 мкл раствора субстрата в ДМСО и 50 мкл ДМСО. Начальные скорости стабильной реакции получения п-нитроани- лина вычисляют с помощью приведения в соответствии экспериментальных данных с линейной зависимостью от времени по наименьшим линейным квадратам. Данная скорость, определенная без добавления ингибитора, используется в качестве стандарта при вычислении величин К| ингибитора.
Обычно гетероциклические кетоны по изобретению не являются медленно связывающими ингибиторами ЛЭЧ; однако, если обнаруживается, что гетероциклические кетоны являются медленно связывающими ингибиторами ЛЭЧ, осуществляются специальные методы анализа для точного определения величин Kino их ингйбированию ЛЭЧ. В типичном эксперименте в 3-миллилетро- вую кювету добавляют 2,89 мл буфера (10- миллимолярный фосфат натрия, 500-миллимолярный хлористый натрий, рН 7.6), 50 мкл раствора ингибитора в ДМСО и 50 мкл раствора субстрата в ДМСО. Кювету закупоривают, переворачивают несколько раз для перемешивания ее содержимого и выдерживают в спектрофотометре при 25°С. По истечении 5 мин (за это время реакционный раствор достигает термического равновесия) в кювету для инициирования
реакции добавляют 10 мкл исходного раствора фермента. Проводят дву- или трехкратное повторение опытов при нулевой концентрации ингибитора и по крайней мере при трех ненулевых концентрациях инги- битора. Величины К| вычисляют в соответствии с методикой Williams and Morrison.
Величины Ki для гетероциклических ке- тонов формулы I:
Величина Ki для известных трифторме- тилкетозамеиденных производных ди-, три- и тетрапептидов, являющихся ингибиторами ЛЭЧ, составляет меньше 10
Животные модели.
Животные модели эмфиземы включают внутритрахеальное (и.т.) введение эластоли- тической протеазы для того, чтобы вызвать медленно прогрессирующее деструктивное повреждение легких. Эти повреждения обычно оценивают по истечении от нескольких недель до нескольких месяцев после начального инсульта. Однако эти протеазы также вызывают повреждения, которые становятся очевидными в первые несколько часов. Раннее повреждение сначала носит характер кровотечения, прогрессирует до воспалительного повреждения к концу первых 24 ч и достигает полноты в первую неделю после инсульта. Чтобы воспользоваться результатами данного раннего повреждения используют следующую модель.
Хомячков сначала слегка анестезируют бревиталом. Затем непосредственно в трахеи вводят фосфатный буферированный физиологический раствор (PBS) рН 7,4 (в чистом виде или содержащий 400 мкг ЛЭЧ). Через 24 ч животных умерщвляют, легкие удаляют и тщательно освобождают от посторонней ткани. После определения сырого веса легких легкие промывают PBS и определяют общее количество выделенных красных и белых кровяных телец. После введение ЛЭЧ величины сырого веса легких, общее количество красных кровяных телец и общее число белых кровяных телец увеличиваются в зависимости от дозы. Соединения, которые являются эффективными ингибиторами элэстазы, могут предотвращать или снижать до предела серьезность повреждений, вызываемых ферментом, приводя в результате к более низкому сырому весу легких и к пониженным величинам общего числа кровяных телец (красных и белых) по сравнению с введением одной ЛЭЧ. Соединения могут оцениваться с помощью введения или их одновременно или в различные периоды времени до введения ЛЭЧ для определения их полезности в предотвращении повреждений от ЛЭЧ. Соединения, полученные по предлагаемому способу, дают статистически значительные снижения сырого веса легких и общего числа телец по отношению к введению одного ЛЭЧ.
Как показали опыты, соединения по изобретению проявляли активность по крайней мере в одном из испытаний, описанных выше. Однако не всегда наблюдалась прямая корреляция между активностью соединений, величины Ki которых измерялись в испытании по измерению ингибирования, и пониженными величинами общего числа телец и сырого веса легких по отношению к введению одной ЛЭЧ, полученными в испытании с животной моделью. Кроме того, в опыте с животной моделью не было замечено никаких явных признаков острой токсичности.
Формула изобретения Способ получения гетероциклических кетонов формулы I
о у
RrfVc-N-iv-N l
н о
где RI - группа формулы R2 - S02NHCQ-, R2 S02NHCONH- или CF3S02NH-, где R2 - хлорфенил; X - кислород или сера; Q - о-фенилен, незамещенный или замещенный гидроксигруппой или {Ci-CO-алкок- сикарбонилом, или Q-цис-винилен, отличающийся тем, что кислоту формулы II
О
М #
А о
:N /
Q
Rf Q-cooH
гле RI имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с аминокето- ном формулы 111
н 0 и О Х
:Q
23167820724,,
Приоритет по признакамгидроксигруппой или (С1-С алкоксикарбонилом. или Q-цис-винилен.
S02NHCO- или R2 S02NHCONH-, R2 - хлор- или сера; Q - о-фенилен, незамещенный или фенил; X - кислород или сера; Q - о-фени- замещенный гидроксигруппой или (С1-С4-ал- лен, незамещенный или замещенный коксикарбонилом, или Q-цис-винилен.
| СПОСОБ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ГАЛОГЕНОСЕРЕБРЯНЫХ ФОТОГРАФИЧЕСКИХ ЭМУЛЬСИЙ | 0 |
|
SU189305A1 |
