Способ определения активности оксидаз смешанной функции печени Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 G01N33/50 

Изобретение относится к биохимии, а именно к биохимическому анализу, и может быть использовано для оценки активности оксидаз печени в биохимических и клинических лабораториях.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемую пробу мочи, полученной после нагрузки амидопирином, подкис- ляют раствором соляной кислоты, прибавляют водные растворы нитрита калия и 3-(а,/3, -дикарбоксиэтил)роданина, последний в конечной концентрации 2,5 Ю - 2, М), хорошо смешивают и доводят раствор гидроксида калия до рН 12, фотоколориметрируют при 440 нм.

Пример 1. Для определения 4-ами- ноантилирина 1 мл разведенной (1:10) мочи животных, принимавших внутрибрюшин- ную нагрузку амидопирина по 100 мг/кг

массы, подкисляют 1 мл 2 М раствора соляной кислоты, прибавляют 1 мл 0,1%-ного раствора нитрита калия, 1 мл М раствора 3-(« ,/3, -дикарбоксиэтил)роданина (конечная концентрация 10 М), хорошо смешивают и через 3-5 мин прибавляют около 2 мл 20%-ного раствора гидроксида калия рН 12. Полученный окрашенный раствор колориметрируют на фотоколориметре КФК-2 при А 440 нм в кювете толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют холостой опыт.

Содержание 4-аминоантипирина рассчитывают по формуле: С -г- , где

D - оптическая плотность на основании математической обработки калибровочной кривой методов наименьших квадратов.

Для определения М-ацетил-4-аминоан- типирина 1 мл разведенной мочи животных, принимавших аналогичную нагрузку, прибавляют 0,2 мл концентрированной соляной

VJ

СО Ь О

CN

кислоты, нагревают на кипящей водяной бане на протяжении 15 мин и после охлаждения проводят аналогичные операции как при определении 4-аминоантипирина. Результаты определения приведены в табл. 1.

Пример 2. Для определения 4-аминоантипирина 1 мл разведенной (1:10) мочи животных, принимавших внутрибрюшин- ную нагрузку амидопирина по 100 мг/кг массы, подкисляют 1 мл 2 М раствора соляной кислоты, прибавляют 1 мл 0,1%-ного раствора нитрита калия, 1 мл М раствора 3-( ее. ,fi, -дикарбоксиэтил)роданина (конечная концентрация 2,5-10 М) и дальше поступают так, как описано в примере 1.

Результаты определения приведены в табл.2.

Пример 3. Определение метаболитов амидопирина в моче при максимальной концентрации цветореагента. Для определе- ния 4-аминоантипирина 1 мл разведенной (1:10) мочи животных, принимавших внутри- брюшинную нагрузку амидопирина по 100 мг/кг массы, подкисляют 1 мл 2 М раствора соляной кислоты, прибавляют 1 мл 0,1 %-но- го раствора нитрита калия, 1 мл М рас

0 5

0

5

твора 3-(сг,/, -дикарбоксиэтил)роданина (конечная концентрация 2,5-10 М) и дальше поступают аналогично примеру 1. Результаты определения приведены в табл. 3. Чувствительность по предлагаемому способу составляет 10 мкг метаболита амидопирина в 10 мкг конечного объема, что в 77 раз выше чем по прототипу.

Формула изобретения Способ определения активности окси- даз смешанной функции печени, включающий нагрузку амидопирином, отбор пробы мочи, добавление к ней цветообразующего реагента и колориметрическое определение продукта реакции реагента с метаболитами амидопирина, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, анализируемую пробу подкисляют соляной кислотой, добавляют нитрит калия, в качестве цветообразующего реагента используют 3-(« ,/3, -дикарбоксиэтил)роданин в конечной концентрации 2,5 - 2, М, затем рН реакционной смеси доводят до 12 и более, а колориметрирование проводят при 440 нм.

Использование: биохимия, биохимический анализ, медицина, оценка активности оксидаз печени. Сущность изобретения: анализируемую пробу мочи, полученной после нагрузки амидопирином, подкисляют раствором соляной кислоты, прибавляют нитрит калия иЗ-(« ,/ , -дикарбоксиэтил)ро- данин в конечной концентрации (2,) -(2,5 -10 ) М, смесь доводят до рН 12 и более, колориметрируют при 440 нм. Изобретение позволяет повысить чувствительность определения на 2 порядка. 3 табл.

Т а б л и ц а 1

30

Таблица2

ТаблицаЗ