Способ получения хламидиозного антигена для реакции непрямой иммунофлюоресценции Советский патент 1992 года по МПК A61K39/02 A61K39/118 G01N33/531 

Цель изобретения - повышение специ.фической активности хламидийного антигена.

П р и м е р 1, Куриные эмбрцоны, павшие на 4-7 сут после заражения хламидиями орнитоза, вскрывают в стерильных условиях. Желточные мешки в колбу со стеклянными бусами и тщательно гомогенизируют. Затем на среде 199 из них готовят 20%-ную маточную суспензию. Добавляют азид натрия 0,1 % и формалин 0,05%, выдерживают суспензию при 4°С в течение 72 ч. После этого суспензию центрифугируют приБООд втечение 15 мин. Образовавшийся средний слой (нижний - частицы ткани, верхний - жир), переносят в стерильную пробирку и доводят средой 199 до 5%-ной концентрации. .

Полученный таким хламидийный антиген смешивают со стабилизатором состава, мас.%: среда 199-98; сахароза - 2, разливают по ампулам по 0,25 мл, ампулы помещают в специальные металлические кассеты и лиофилизируют на сублимационных установках. Рабочий вакуум в течение цикла не более 13,33 Па. Температура конденсатора в начале высушивания не выше , в течениецикла не выше -47°С. Начальная температура материала в период сублимации -(45 ± 10)°С, Конечная темпераfypa досушивания (25 ± 5)°С. По окончании высушивания кассеты с препаратом немедленно закрывают крышками, помещают в зксикатор и герметизируют запайкой.

П р и м е р 2. Получение неинфекционных тест-антигенов из Chlamydia pSittacli возбудителя энзоотического аборта овец (штамм ЕАЕ), Способ осуществляют так, как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов, зараженных возбудителем энзоотического аборта овец.

Примерз. Получение неинфекционных тест-антигенов из Cl.trachomatis. возбудителя уретрита (Штамм ЛБ-1). Способ осуществляют так как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов, инфицированных ujTaMMOM ЛБ-1.

П р и м е р 4. Получение инфекционных тест-антигенов из Cl.trachomatis, возбудителя венерической лимфогранулемы (штамм Л-2). Способ осуществляют так, как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют .желточные мешки куриных.эмбриоиов. зараженных штаммом Л-2.

Эффективность инактивации штаммов хламидийр исходном материале различными концентрациями азида натрий и формалина контролируют введением этого материала после 72 ч ийкубации пpиf4-6°C в желточные мешки шестидневных развивающихся куриных «эмбрионов. Использование азида натрия в концентрации 0,1-0,15% и формалина 0,05% обеспечивает полную инактивацию различных штаммов хламидий. Это позволяет значительно снизить кoн{ eнтpaцию формалина (до 0,05%), применяемую для инактивации возбудителя, следовательно, уменьшить его влияние на специфическую активность поверхностных антигенов.

Специфическую активность полученных тест-антигенов хламидий с использованием различных концентраций формалина 1 азида натрия определяют титрованием гомологичных иммунных сывороток методом непрямой флюоресценции (см. табл.).

Таким образом, положительный эффект от использования способа заключается в повышении специфической активности хламидийного антигена, что отражается на чувствительности реакции, а также на удлинении срока хранения тест-антигенов и возможности тpaнcпoptиpoвки лиофилизированных препаратов. При этом повышается технодогичность процесса приготовления диагностйкумов, поскольку инактивация возбудителя в отличие от известного способа проводится сразу после гомогенизирования инфицированных желточных мешков, следовательно, все последующие операций по приготовлению тест-антигеное осуществляют уже с неинфекционным материалом. Это особенно важно при работе со штаммами возбудителя орнитоза, которые относятся к второй группе патогенности.

Формула изобретения Способ получения хламидиозного антигена для реакции непрямой иммунофлюоресценции, включающий культивирование хлайидий в куриных эмбрионах, .гомогенизацию инфицированных желточных ков, суспендирование клеток в солевом растворе с последующей инактивацией формалином и отделением целевого продукта, отлича1ощийся тем, что с целью, повышения специфической активности антигена, после гомогенизации клетки суспендируют в среде 199, инактивацию проводят формалином в смеси с азидом натрия в конечной концентрации 0,05 и 0,1 % на суспензии соответственно, далее целевой продукт смешивают со стабилизатором co-V става, мас.%: среда 199 - 98-99,5; сахароза - 0,5-2, и лиофилизируют.

Рмуттага титргаания cinoporoK больных хпамнлиоэон иетоясм непрямой 1миуно лоомсц т|1П1 е неинфекциомнирм тест актигенаии хлаиндиЛ, попуцешц ш при нсполъюаанми рааличнмх ннактивирукцих концентрлций аяида натрия и форнапта

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для серологической диагностики различных хламидийных заболеваний человека и животных. Цель изобретения - повышение специфической активности тест-антигена хламидий. Цель достигается приготовлением из гомогенизированных желточных мешков, содержащих живые хламидий 20%-ной суспензии на среде 199, к которой добавляют 0,05% формалина и 0.1% азида натрия при 4-6°С в течение 72 ч, после чего материал центрифугируют при 500д 15 мин отбирают средний слой, доводят его средой 199 до 5%-ной концентрации и лиофилизируют с 98-99,5% среды 199 и 0,5-2% сахарозы.слсИзобретение относится к медицине, к медицинской микробиологии и может быть использовано для серологической диагностики различных хламидийных заболеваний человека и животных.Известен способ получения инфекционных тест-антигенов хламидий из овокультур путем центрифугирования при 500д в тече- 'ние l6 мин гомогенизированной суспензии желточных мешков зараженных куриных эмбрионов. Средний слой, содержащий хламидий, используют в качестве тест-антигена в реакции непрямой иммунофлюоресцен- ции для диагностики хламидийных инфекций.Однако необходимость применения материала, содержащего живой инфекционный агент, ограничивает практическое использование этого метода.Известен способ получения инфекцион- Hbfx тест-антигенов хламидий из овокультур путем многократного дифференциального центрифугирования гомогенизированной суспензии желточных мешков на солевом растворе с последующей инактивацией возбудителя формалином в конечной концентрации 0.25%.Однако известный способ не обеспечивает достаточного качества полученных тест-антигенов. Обработка возбудителя высокой концентрацией формалина существенно снижает специфическую активность поверхностных антигенов хламидий. Как С/1е.цствие этого снижается интенсивность их специфического свечения при взаимодействии с гомологичными антителами, уменьшается чувствительность реакции. •Жидкие тест-антигены имеют ограниченный срок годности

fr|kHM 4«Hii«.

Титри антител дани яйле обрлтних велнимн; концеятрацим вМАВ натрия и ферналмн процентах.- . . ., , . . , .;