Питательная среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциальной диагностики сибирской язвы.

Известна питательная среда ГКИ дяя выявления капсулы сибиреязвенного .микг роба, состоящая из 40% сыворотки крупного рогатого скота и 60% раствора Хенкса.

К недостаткам известной питательной с0еды относится то, что она не является оптимальной по Составу, поскольку еспечивает капсулообразование не более 60-80%.

Известна также питательная среда Для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба с использованием столовой минеральной воды.

Недостатком известной среды является то, что в качестве стимулятора капсулообразования используют пищевой продукт (столовую минеральную воду), который в экстремальных условиях (в частности, в полевых и особых ситуациях, в отдаленных и южных регионах страны) бывает малодоступным. .

Цель изобретения - упрощение и удешевление питательной среды.

Поставленная цель достигается тем, что среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба и дифференциации возбудителя сибирской язвы, содержащая сыворотку крупного рогатого скота, взамен столовой минеральной воды содержит свежую мочу человека при следующем соотношений компонентов. о6.%:

Сыворотка Крупного

рогатого скота35-40

Свежая моча здорового

человека60-66

Известно, что наиболее оптимальной средой для жизнедеятельности сибиреязвенного микроба является организм человека и животных. Поэтому предлагаемая питательная среда является моделью уелоВИЙ пребывания микроба в естественных условиях, т.е. в организме человека или животного, поскольку содержит те же компоненты (сыворотку крови, соли, аминокислоты, ще лочность, которые присутствуют в крови и

моче).

Свежевыделенная моча человека имеет слабощелочную реакцию (рН 7,8), является сложным продуктом обмена веществ, содержит более 150 компонентов органического и неорганического происхождения, г/л: азот 10-20; белки 0,02-0,07: аминокислоты (17 наименований) 0,02-(У,Об: соли Са 1,5: Мо 20-40: натрия 0,5-13,6; фосфора 1520: хлора 0,01-1.0; мальтозы 75; тиамина , Из аминокислот в моче содержатся, мг/л: аланин 3-3,1; аргинин 16-60: валин 8-70; гистидин 8,3: гликокол 17-19; изолейцин 0,3-4,0; лизин 1,5-10,5; метионин 0,20,9; треонин 2-5; триптофан 0,5-3,0; тирозин 0,8-5,5; фенилаланин 1-4,0; цистин 7,0-23,0. Из приведенного материала видно, что моча человека является естественным химическим раствором, содержащим незаменимые аминокислоты, соли, сахара и витамины, необходимые для нормальной жизнедеятельности сибиреязвенного микроба, которые в производственных условиях приходится готовить по специальной рецептуре (раствор Хенкса, среда Игла и т.д.).

Культивирование сибиреязвенного микроба во всех примерах проводили в колбах емкостью 0,5 л, козффициент заполнения (К) 0,5, при 36-38°С, доза посевного материала 510 спор/100 мл, экспозиция инкубации 10-18 ч.

П р и м е р 1. К 35 мл стерильной сывоpoTKtT крупного рогатого скота (кр.рог.ск.) прибавлянэт 65 мл свежёпрлученной мочи человека. Среду разливают в колбы по 0,05 л и засевают споровой культурой Вас. anthracts штамм 11-й вакцины Ценковского из расчета 5-10 спор/100 мл среды, закрывают резиновыми пробками и культивируют 10-18 ч при 36-38С. По истечении указанного времени стерильно готовят мазки из выросшей культуры, окрашивают синькой Леффлера и просматривают в световом микроскопе, используя

иммерсионную систему, По наличию и коли честву инкапсулированных клеток оценивают степень и характер капсулообразования.

Степень капсулообразования к 18 ч роста в культуральной жидкости 85±2%, а титр клеток составил 1,7±0, (титр клеток определяли методом предельных разведений).

П ример2. Предлагаемая среда (об, %); 38 мл сыворотки кр,рог.ск., 62 мл мочи человека. Условия инкубации как в примере 1. Степень капсулообразования к 18 ч в культуральной жидкости достигла 92 ±2 %, а титр клеток составил 8.4±0,3 -10® на 1 мл среды.

Пример 3. Предлагаемая среда (об. %); 40 мл сыворотки кр.рог.ск,, 60,0 мл мочи человека. Условия инкубирования и проведения анализа aнaлoгVlчны примеру 1. Степень капсулообразования к 18 ч роста в культуральной жидкости составили 97±3%, а титр клеток составил 2,2±0,1 10 на 1 мл среды.

Результаты зависимости капсулообразования Bacillus anthracls от соотношения компонентов среды представлены в таблице.

Таким образом, предлагаемая питательная среда для культивирования Вас. anthracis имеет по сравнению с известной следующие преимущества: замена пищевого продукта более доступным - продуктом метаболизма человека, который позволяет полностью сохранить диагностическую ценность известной оптимальной дифференциально-диагностической среды и проводить достоверную идентификацию возбудителя.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба, содержащая сыворотку крупйого рогатого скота и солевой раствор, отличающаяся тем, что, с целью упрощения и удешевления питательной средь, в качестве солевого раствора она содержит свежую мочу здорового человека при следующем соотношении компонентов, об.%:

Сыворотка крупного

рогатого скота35-40

Свежая моча здорового

человека60-65

Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциальной диагностики сибиреязвенного микроба. Целью изобретения! является упрощение и удешевление питательной среды, р этой цепью солевой раствор в жидкой питательной среде заме- .няется на мочу здорового человека. 1 табл.