СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-АМИНОПЕНИЦИЛЛАНОВОЙ 'КИСЛОТЫг,;!--•.; q1 ^. . |И^1-1[:. ."'ЛлЗТ^КА Советский патент 1965 года по МПК C12P37/06 C12P37/06 

Известны способы получения 6-аминопенициллаловой кислоты путем ферме 1тативного гидролиза пенициллина с помощью культуры микроорганизма Е. coli, полученной на питательной среде, содер кащей кукурузный экстракт и фенилуксусную кислоту. Использование нх прнзодит к образованию незначительного количества фермента и для гидролиза растворов бензилпенициллина достаточно высокой концентрании требуется большое количество м,икробной массы.

По предлагаемому способу микроорганизм Е. соИ многократно (10-30 раз) пассируют на агаризованной среде, содержащей кукурузный экстракт. Полученной культурой засе ают жидкую питательную среду, выдерживают прн температуре не выше 26°С, отделяют биомассу и гидролизуют ею растворы пениниллина. После удаления примесей при значении рН раствора 2-3 выделяют целевой продукт при рН около 4,1-4,3.

Пример. Исходную культуру Е. соИ, поддерживаемую на полужидком агаре Хоттингера, пересеивают в пробирки со скошенным агаром следующего состава: кукурузного экстракта 2% (по сухому весу), агара 2%, рН 7. Пассажи .иа указаной среде проводят ежедневно. После 15 пассажей полученную активированную культуру используют в качестве посевного материала для ферментации микробной массы.

Ферментацню осуш,ествляют в конической колбе емкостью 750 мл, содержащей 100 мл стерильной питательной среды (2%-ного кукурузного экстракта). Засев производят смывом одного агарового косяка пассированной культуры Е. соИ (штамм 9637), носле чего смесь инкубируют на круговой качалке в течение 18 час при 24°С. Инокулят асептически переносят в 70 л. питательной среды, содержащей 25/0 кукурузного экстракта н 0,05о/о фенилуксусной кислоты. После ферментации нрн 23-24°С в течение 18 час с аэрацией

(0,5-:1,0 объем воздуха на 1 объем среды в минуту) биОМассу отделяют сепарацией.

Полученную микробную массу суснендируют в 20 уг 6Vo-Horo раствора бензилпенициллина и, регулируя рН добавлением водного

раствора аммиака на уровне 7,2-7,8, выдерживают при перемешиванни в течение 5- 6 шспри 40-42°С.

Гидролизную жидкость охлаждают до 4- , подкисляют до рН 2, отделяют микробную массу сепарацией и подщелачивают прозрачный раствор аммиаком до рН около 4,1- 4,3. Выпавший кристаллический продукт отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат. Получают 440 г пренарата с содержасоответствует 55о/о-ному выходу на исходный бензилпенициллин.

Предмет изобретения

Способ получения 6-аминопенициллановой кислоты путем ферментативного гидролиза пенициллина с помощью культуры микроорганизма Е. icoli, полученной .на питательной среде, содержащей кукурузный экстракт и фенилуксусную кислоту, отличающийся тем.

что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения способа его получения, микроорганизм 1. соН пассируют многократно (10-30 раз) на агаризованной среде, содержащей кукурузный экстракт; полученной культурой засевают жидкую питательную среду, выдерживают при температуре .не выше 2б°С, биомассу отделяют, гидролизуют ею растворы пенициллина, удаляют примеси при рН 2-3 с последующем выделением целевого продукта при рН около 4,1-4,3.