СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ГЕМОГЛОБИНА Советский патент 1965 года по МПК A61K35/14 

Известные способы получения кристаллического гемоглобина из охлажденной гемолизированной крови сложны и не обеспечивают удо1влетворительного качества гемоглобина.

С целью улучшения качества целевого продукта и упрощения процесса, предложено в гемолизированную кровь крупдого рогатого скота добавлять насыщенный раствор сернокислого аммония и отделять балластные белки. Прозрачный раствор подкисляют до рН около 6,0-6,5, добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония, выделивщиеся кристаллы гемоглобина отделяют, перекристаллизовывают, подвергают диализу и лиофилизащии.

Для получения кристаллического гемоглобина цитратную или оксалат«ую кровь, полученную на бойне, оставляют в холодильнике на .ночь, затем центрифугируют, плазму отбрасывают, а эритроциты 3 раза промывают 1%-ным раствором поваренной соли. На каждые 100 мл отмытых эритроцитов добавляют 20 мл дистиллированной воды и 10 жл эфира, смесь перемешивают и оставляют стоять до полного гемолиза (контролируют под микроскопом). К гемолизату добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония до концентрации последнего около 45%, быстро перемешивают и фильтруют в холодильнике через смоченный водой складчатый фильтр.

Осадок балластных белков отбрасывают, прозрачный фильтрат подкисляют разбавленной уксусной кислотой до рП 6,0-6,5 (на 100 мл фильтрата 9-10 мл 0,1 ,и уксусной кислоты) и постепенно при перемешивании добавляют 56 мл насыщенного раствора сульфата аммония (при этом появляется помутнение). При стоянии раствора в холодильнике при О-5°С кристаллизация начинается через

4-5 час и заканчивается через 2-4 сут. Добавление затравки кристаллов ускоряет кристаллизацию. Отфильтрованные или отцентрифугированные кристаллы гемоглоби-на растворяют в небольшом количестве воды, подкисляют уксусной кислотой до рП 6,0-6,5 ,и постепенно при интенсивном церемещивании добавляют насыщенный раствор или порощок сульфата аммония. Перекристаллизацию повторяют еще 3-4 раза, после чего гемоглобин

диализуют до полного удаления сульфата аммо:ния против холодной (О-8°С) водопроводной воды. Отмытый гемоглобин отфильтровывают и высушивают лиофилизацией.

25

Предмет и з о б р е т е п и я 3 шения качества целевого продукта и упрощения процесса, в гемолизирозанную кровь крупного рогатого скота добавляют насыщенный раствор сернокислого аммоиия, отделяют балластные белки, прозрачный раствор под-5 4 кисляют до рН около 6,0-6,5, добавляют ни сыщенный раствор сер.нокислого аммония, выделившиеся жри-сталлы гемоглобина отделяют, перекристаллизовывают, подвергают диализу и лпофилизадии.