Способ определения пирокатехина Советский патент 1992 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к аналитической химии или прикладной биологии, а именно к способам определения пирокатехина в смеси, и может быть использовано при анализе сточных вод, при определений содержания пирокатехина в резорцине.

Известен способ определения микроколичеств фенолов в воде, основанный на реакции конденсации 4 -аминоантипирина с фенолами.

Недостатком известного способа является невозможность определить отдельно пирокатехин, если он находится в смеси с другими фенолами, так как с разными фенолами образуются одинаково окрашенные продукты конденсации.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ определения пирокатехина, основанный на обработке анализируемой пробы химическим peareWF том, содержащим фенолы с последующем фотометрированием полученного раствора.

Недостатком известного способа является низкая селективность, так как способ

предназначен для определения индивидуальных фенолов и разные фенолы дают одинаково окрашенные продукты конденсации.

Цель изобретения - повышение селективности определения.

Поставленная цель достигается тем, что в способе, основанном на обработке анализируемой пробы химическим реагентом и фотометрирование, анализируемую пробу обрабатывают резорцином, перекисью водорода в присутствии пербКсидазы при рН 7,5 - 8,0 и измеряют изменение оптической плотности в кинетическом режиме.

Способ осуществляют следующим образом.

Определяют концентрацию пирокатехина. К анализируемой пробе добавляют фосфатный буфер,-водные растворы резорцина, пероксидазы и пероксида водорода, Смесь быстро перемешивают и измеряют ее оптическую плотность (А) через определенные промежутки времени Т в течение 1-2 мин. По рассчитываемому отношению изменения оптической плотности ( Д А ) во времени (ДТ) судят о концентрации резорцина в пробе.

XI

сл ел

со ч

Пример 1.

В кювету вносят 1,6 мл фосфатного буфера рН 7,75; 1,0 мл резорцина 20 мМоль; 1,0 мл пирокатехина, содержащего 1 мкг вещества; 0,2 мл пероксидазы с концентрацией 5 мкг/мл, 0,2 мл 140 мМоль/л раствора пероксида водорода, быстро перемешивают смесь и измеряют изменение оптической плотности во времени при Л 460 нм. Ti 15c, Т2 45с, ДТ 45 с-15 с 30 с Ai 0,014, Аа 0,053 Д А 0,053 - 0,014 - 0,039

ДА

зт

100 7,8

Пример 2. Определяют концентрацию пирокатехина. В кювету вносят 1,6 мл фосфатного буфера рН 7,75; 1,0 мл резорцина 20 мМоль/л; 1,0мл пирокатехина, содержащего 1 мкг вещества; 0,2 мл пероксидазы с концентрацией 5 мкг/мл; 0,2 мл 140 мМоль/л раствор пероксида водорода; быстро перемешивают смесь и измеряют изменение оптической плотности во времени при А 460 нм.

Ti-15c, T2 45c,

ЛТ 45 с - 15 с 30 с 0,5 мин

А 1 0,014, А2 0,053,

А А 0,053-0,014 0,039

ДА 5Т

100 7,8

Пример 3. Определение проводят аналогично примеру 1, за исключением того, что рН 8,0, концентрация пероксида водорода 180 мМоль/л, резорцина 50 мМоль/л и кинетику снимают при Я 470 нм, Ti 15 с, Т2 45 с, ДТ 30 с 0,5 мин Ai 0,012, А2 0,050, ДА 0,038

ДА ZT

100 7,6

Пример 4. Определение проводят аналогично примеру 1, за исключением того, что рН 7,5, концентрация пероксида водорода 100 мМоль/л и резорцина 15 мМоль/л, измерения проводят при А 450нм. Ti 15с, Т2 45с ДТ 0,5мин Ai 0,012, А2 0,047 ДА 0,035

100 7,0

ДТ в минутах, ДА - в ед. оптической плотности (Д А/ДТ) 100 - в условных единицах.

Последовательность операций при внесении компонентов реакционной смеси растворов пробы, резорцина, буфера не имеет значения. Пероксидазу и пероксид водорода вносят последними. Пероксид водорода

запускает реакцию, и с момента его введения начинают отсчет времени.

Пример 5. Все значения, как в примере 1, но содержание пирокатехина 6

мкг. Последовательность внесения компонентов реакционной смеси: растворы буфера, резорцина, пробы пирокатехина, пероксидазы, пероксида водорода.

Ti 15с, Т2 75с, ДТ 60с 1 мин

Ai 0,026, А2 0,178 Д А А2 - AI

0,178-0,026 0,152 (ДА/ДТ)- ,2 Пример 6. Все значения, как в примере 4, но последовательность внесения компонентов смеси другая; растворы пробы, резорцина, буфера, пероксидазы, пероксида водорода.

Ti 15 с, Т2 75 с.Д Т 60 с 1 мин Ai 0,026, А2 0,179 , Д А 0,179 - 0,026

0,153

{ДА/ДТ)- 100 15,3 В данном способе реакцию окисления смеси фенолов катализирует пероксидаз- ная система (пероксидаза плюс пероксид

водорода). Результаты представленные в таблицах и примерах, получены в опытах, где одни. из компонентов реакционной смеси - 0,2 мл раствора пероксидазы с концентрацией 5 мкг/мл.

Для способа это оптимальная концентрация пероксидазы. При более низких концентрациях падает чувствительность метода, при более высоких концентрациях уменьшается линейный участок кинетической кривой нарастания окраски. При увеличении концентрации пероксидазы 5 мкг/мл, линейный участок кинетической кривой становился менее 25 сек (для пирокатехина с концентрацией 1-2 мкг/мл) и ухудшалась

воспроизводимость опытов.

Предложенный способ позволяет провести прямое определение микроколичества пирокатехина в присутствии высоких концентраций резорцина (при соотношении

пирокатехин : резорцин до 1 :1000). Данные по преимуществу предложенного способа - высокая селективность определения пирокатехина - представлены в табл. 2. Формула изобретения

0 Способ определения пирокатехина, включающий обработку анализируемой пробы химическим реагентом и фотометри- рованием, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности определе5 ния, анализируемую пробу обрабатывают резорцином и перекисью водорода в присутствии пероксидазы при рН 7,5 - 8,0 и измеряют изменение оптической плотности в кинетическом режиме.

Таблица1 Зависимость скорости индикаторной реакции от концентрации пирокатехина

Сущность изобретения: пробу обрабатывают резорцином и перекисью водорода в присутствии пероксидазы при рН 7,5 - 8,0 и измеряют измерение оптической плотности в кинетическом режиме. 2 табл.

Таблица 2