Штамм гриба OoSpoRa LастIS, гидролизующий жиры и жиросодержащие вещества Советский патент 1992 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относитсяк биотехнологии и касается штаммов, гидролизующих ли- пиды.

Известны штаммы Glotrlchum candldum, Rhizopus microsporus, Oospora tragrans. Geotrlchum matalense и другие, способность разрушать жиры и жироподоб- ные вещества.

Наиболее близким к изобретению является микроскопический гриб Oospora lactls штамм УзЛМ-2.

Известный штамм обладает недостаточно высокой липолитической активностью.

Целью, изобретения является получение более эффективного штамма с повышенной липолитической активностью и сокращенной продолжительностью культивирования.

Полученный штамм Oospora Jactis ВКПМ F-412 имеет следующие морфолого- культуральные и физиолого-биохимические характеристики: культура образует хорошо развитый мицелий величиной 4-10 мкм в поперечнике с редкими перегородками. Отдельные ветки мицелия расчленяются поперечными перегородками на дрожжевидные клетки-оидии, которые сначала имеют резко обрезанные концы, затем они округляются. Оидии размером (7-20) (6-9) мкм располагаются цепочками, которые легко распадаются. Иногда они образуют внутри нити мицелия. Встречаются крупные клетки раз- мером (10-28) (12-18) мкм, составляющие 12%, а также 15% карликовые клетки размером (1,5-4) (1,2-3,5) мкм. Молоко гриб пеп- тонизирует, желатин разжижает.

В качестве источников углерода культура усвамвает глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, крахмал, яблочную, лимонную, уксусную кислоты, а также оливковое, хлопковое, подсолнечное, кукурузное масла, говяжий и бараний жиры.

В качестве источников азота используют аммонийные соли: МЖНаРОз, ( (МНФР04, NKtoCI. NhWOa, (NH4kS04. Несколько хуже растет на средах с нитратными солями: NaNOa. КМОз. Са(МОз)2сл

Температурные точки роста: минимум 3-4°С, максимум 37°С, оптимум 18-28°С. При низких температурах рост идет медленно. Отношение к рН питательной среды: растет при 4,5-8,0, оптимум 6,2-6,4. При крайних значениях рН рост культуры сильно замедляется. Штамм хранится при 4°С, на среде сусло-агар 7° Блг в течение 6 мес. Штамм получен ультрафиолетовым облучением по известному способу бактерицидной лампой БУВ-30, длина волны 2537 А°. Водную суспензию гриба подвергали воздействию УФ-лучей в течение 5, 10, 20, 30, 45, 60 и 120 с. В результате отбора гриба с выживаемостью 3-80% получен штамм ВКПМ F-412, имеющий высокую липолити- ческую активность. Предварительный отбор, проведенный качественным методом липазной активности, выявил культуры, образующее зоны гидролиза жира, превышающий размер колонии на 6-11 мм по сравнению с известным способом 5-10 мм.

Для сравнения штаммов УзЛМ-2 и F- 412, их выращивание производилась на среде следующего состава, %: настой хлопкового шрота 2; ()2S04 0,3; СаСОз 0,1; масло хлопковое 1.

В качестве посевного материала использована водная суспензия 2-суточной культуры, выращенной на сусло-агаре. Суспензия вносилась в количестве 1%, в колбу емкостью 750 мл, содержащую 100 мл питательной среды.

Липолитические свойства полученного

мутанта изучали по сравнению с известным способом в адекватных условиях.

Количественный анализ отобранных вариантов показал, что у штамма ВКПМ F-412 наиболее высокой липолитической активностью обладает культуральная жидкость, полученная в результате культивирования при 18°СирН4,9.

Интенсивное размножение клеток при

культивировании штамма ВКПМ F-412 наступает через 12 ч, а у прототипа через 15 ч и соответственно продолжительность культивирования сокращается на 3-4 ч. При этом максимальное накопление липазы у

штамма ВКПМ F-412 наступает через 18-19 ч при культивировании на круговой качалке со скоростью вращения 150-200 об/мин, активностью 4,9-5,9 102 ед/мл, у прототипа через 24 ч. Максимальная активность липазы до 5,9-6,1 10 ед/мл наблюдается при рН 4,9, которая является оптимальным условием для проведения технологического процесса при гидролизе жира.

Штамм ВКПМ F-412 показал себя стэбильным при культивировании как продуцирующий активную липазу и его можно рекомендовать для гидролиза жира.

Пример. Выращивание штамма проводили на среде следующего состава, %:

настой хлопкового шрота 2; (N4)2504 0,3; СаСОз 0,1, масло хлопковое 1, на круговой качалке 200 об/мин, в колбах емкостью 750 мл, содержащих 100 мл питательной среды, в которую внесена в количстве 1 % суспензия 2-суточной культуры. Культивирование проводилось в течение 18ч при 28°С. Полученная культуральная жидкость используется для разложения жиросодержащих продуктов.

Формула изобретения Штамм гриба Oospora lactis ВКПМ F-412, гидролизующий жиры и жиросодержащие вещества.

Использование: биотехнология, пищевая промышленность. Сущность изобретения: возможность использования штамма для гидролиза жиров. Штамм Oospora Sactls ВКПМ F-412 получен обработкой УФ-лучами штамма Уз/Ш-2. Колонии белые, бархатистые, плоские с выпуклой серединой. Края состоят из прямых мицелиевидных нитей. Полученная культурзльная жидкость имеет высокую лмпазную активность с сокращенной продолжительностью культивирования. Максимальная активность липазы до 5,9- 6,1 102 ед/мл наблюдается при рН 4,9.

Г

Среда, Т ,возраст, условия роста

Размеры, I Характер роста (пленка, кольцо, осадок, мкмI помутнение, рост по стенке пробирки)

Сусло-агар 2-суточная, 26°С МО

Рыбный гидролизат, 2-суточный, 1,9-8 26°С

Чапека (с агаром)

Жидкое сусло (7 Блг) 2-су- t-IO

точная, 26°С

Колонии в одно-двухсуточной культуре белые бархатистые, плоские с выпуклым центром и мицелевидным краем диаметром 6-11 см. Воздушный мицелий хорошо снимается, субстратный врастает в агар

На среде с рыбным гидролизатом в центре колонии исчезает белый бархаристый пушо и появляется матовый кремоваты. налет, который со временем занимает всю колони

Колонии в одно-двухсуточной культуре белые бархатистые, но менее пушистые, мицелевидным краем диаметром 5-10 см. Рост медленнее, чем на сусло-агаре.

Через двое суток культура образует тонкую пленку на поверхности среды, которая со временем превращается в толстую бархатистую, белую пленку. В

Среда, Т,возраст, условия роста

Размеры, I Характер роста (пленка, кольцо, ослл 1 , мкмI помутнение, рост по стенке пробирки)

МПБ (мясо-пептонный бульон), Ы О 2-суточнэя, 26 С

Чапека (жидкая), 2-суточная, -10 26° С

Продолжение таблицы

среде помутнение и осядок отсутстпует. Пигмент не образует.

Образует пленку также,как я жидком сусле, появляется чуть-чуть осадок. Пигмент не образует.

Образуется тонкая пленка,менее пушистая, белого цвета