Способ определения токсичности воды Советский патент 1992 года по МПК G01N33/18 

Изобретение относится к биологической индикации, в частности к определению токсичности воды.

Известен способ определения токсичности воды с использованием культуры микроорганизмов.

Наиболее близким тест-объектом для оценки токсичности воды являются митохондрии млекопитающих.

Цель изобретения - повышение достоверности определения токсичности. Для этого в качестве тест-объекта используются эритроциты крови.

Примеры приготовления тест-объекта.

Используют готовый препарат эритро- цитарной массы.

5-10 мл свежей крови наливают в небольшую емкость и в течение 10-15 мин перемешивают плавными круговыми движениями с помощью стеклянных шариков. Затем отделяют полученную эритроцитар- ную массу со сгустков однослойным марлевым фильтром. К полученной эритроцитар- ной взвеси добавляют 1-2 мл чистого физиологического раствора.

Способ осуществляется следующим образом.

Приготавливают физ. раствор из исследуемой пробы воды, которую предварительно фильтруют. Затем к 5 мл подготовленной пробы добавляют эритроцитарную массу в количестве, обеспечивающем концентрацию 200-250 клеток на 1 мкл (10 мкл эритро- цитарной массы на 1 мл пробы).

Для контрольной пробы берут 5 мл чистого физиологического раствора и добавляют то же количество эритроцитарной массы.

Пробирки со взвесью эритроцитов в растворах проб помещают в термостат на 30 мин при 37°С.

После термостатирования пробы центрифугируют при 5 G в течение 10 мин для осаждения эритроцитов, надосадочную

Ё

VI

О

ю ;ю со ю

жидкость удаляют и добавляют чистый физ. раствор до прежнего объема.

1 мл исследуемой пробы помещают в кювету спектрофотометра и проводят реакцию термогемолиза при 58°С.

Аналогичную реакцию проводят с контрольной пробой.

Регистрируют зависимость величины пропускания Т% луча света при длине волны 670 нм от времени термического воздействия на эритроциты.

Определяют ЕТ50 - время, в течение которого происходит термогемолиз половины всех эритроцитов в растворе.

Относительную токсичность определяют по формуле

ЕТ 50 опыт

ЕТ 50 контроль

В табл, 1 приведены результаты определения некоторых веществ предложенным способом и прототипом.

0

5

0

С помощью предлагаемого способа была оценена токсичность проб речной воды. Содержание загрязнителей выражено в предельно допустимых концентрациях Данные представлены в табл. 2. Формула изобретения Способ определения токсичности воды, включающий инкубацию пробы с тест-объектом с последующим определением, о т л ичающийся тем, что, с целью повышения достоверности определения токсичности, в качестве тест-объекта используют эритроциты крови, определение токсичности проводят по реакции термогемолиза на спектрофотометре при длине волны 670 нм и оценкой по

ф0рмуле S FTEJn50onblT , 1 ЕТ50контроль

где S - относительная токсичность;

ЕТ50 опыт - время гемолиза половины эритроцитов в исследуемой пробе;

ЕТ50 контроль - то же, в контрольной пробе.

Использование: биологическая индикация, определение токсичности воды. Сущность изобретения: для оценки токсичности воды проводят реакцию термогемолиза эритроцитов и определяют относительную токсичность по формуле: ЕТ 50 опыт S где S - относительЕТ 50 контроль ная токсичность исследуемой пробы, ЕТ50 контроль - время гемолиза половины эритроцитов в контрольной пробе. ЕТ50 опыт - время гемолиза половины эритроцитов в исследуемой пробе воды 2 табл

30

Таблица 1

Таблица 2