Способ выявления GRероNема раLLIDUм Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса,

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной К, поступил о стационар с подозрением на сифилис. В стационаре больной всесторонне обследован: общий анализ крови и мочи без патологии, серологические реакции (реакция Вассер- мана, РИФ, РИБТ) отрицательные. Общепринятые, ежедневные исследования (в течение 6 дней) тканевой жидкости из эрозии на половом члене на бледную трепоне- му в темнополееом микроскопе не

позволили обнаружить возбудителя сифилиса. Исследования пунктата увеличенного пахового лимфоузла также не позволили обнаружить бледные трепонемы. На 7-й день обследования у больного параллельно с исследованием тканевой жидкости из зрозии под микроскопом в темном поле зрения проведена инокуляция исследуемого материала е углубление камеры из полиакрила- мидного геля.

Для изготовления микрокамер используют предметные и покровные стекла, геле- вые блоки и герметизирующая замазка. С этой целью на предметное стекло кладут заранее приготовленный гелевый блок размером 5x5 - 10x10 мм с углублением 2x2 - бхб мм. В углубление гелевого блока микроVJ

О 00

о

пипеткой вносят материалы для исследования на бледные трепонемы и накрывают блок покровным стеклом. Покровное стекло скрепляют с предметным стеклом герметизирующей замазкой, оставлял лишь небольшое отверстие ( г 3-4 мм) для заполнения камеры питательной средой. Затем в камеру микропипеткой вводят жидкую питательную среду, в состав которой входит смесь в объемном соотношении 1:1 плазмола и 1%- ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Streptococcus lactls 121/4, Streptococcus cremorls 244 x 6/1, Lactobacterium easel 18, Acetobacter aceti РД-10, Lactobacterlum bulgaricum в пропорции 1:1:2:2:1, после чего закрывают герметизирующей замазкой отверстие, через которое вводится питательная среда. Таким образом в камере создаются анаэробные условия. Камеру помещают в термостат при температуре +35° - 37°С и периодически проводят диагностический контроль в течение 48 часов содержимого микрокамеры под микроскопом в темном поле зрения или в фазовоконтраст- ном микроскопе на наличие возбудителя сифилиса Для удобства наблюдения камеру можно помещать в термостатный столик, который устанавливают на креплении предметного столика микроскопа. Диагностическое бэктериоскопическое исследование посева микрокамер необходимо проводить периодически в течение двух дней, т.к. тканевые бледные трепонемы делятся через каждые 30-33 часа. Вместе с тем необходимо проводить тщательное бактериоскопиче- ское исследование содержимого микрокамер и в первые часы после посева, поскольку труднодиагностируемые формы устойчивого выживания трепонем-а-формы, цисты - в созданных благоприятных условиях могут реверсировать в обычные спирзле- видные формы, которые возможно обнаружить при микроскопическом исследовании в темном поле. Через 36 часов от момента посева исследуемого материала при микроскопии выявлены обычные спиралевидные бледные трепонемы с характерными для них видами движений, равномерными завитками и другими морфологическими свойствами, характерными для бледных трепонем. Больному поставлен диагноз: сифилис 1 серонегативный и назначено специфическое лечение.

П р и м е р 2. Больной А. обратился к врачу по новому эрозии на половом члене. Диагноз - эрозивный баланопостит. Стандартные серологические реакции на сифилис на момент обследования отрицательные. В отделяемом из эрозии и пунктате лимфоузла при обычной темнополевой микроскопии бледные трепонемы не обнаружены в течение 3-х дней исследования. Начиная с 4-го дня обследования больному параллельно с общепринятым методом исследования проведена инокуляция исследуемого материала из эрозии в микрокамеру,

0 заполненную питательной средой в соответствии с примером 1, но с использованием 2%-го гидролизата с последующим созданием анаэробных условий инкубирования и помещением микрокамер в термо5 стат при +37°С. Проведенный микроскопический диагностический контроль позволил через б ч после проведенного посева обнаружить в посевном материале типичные бледные трепонемы с

0 характерными для них морфологическими свойствами и поставить больному диагноз: Сифилис 1 серонегативный и назначить специфическое лечение.

Таким образом, использование способа

5 позволяет повысить способ диагностики сифилиса в тех случаях, когда бактериоскопи- ческий и серологический методы дают отрицательные результаты.

Данный способ может также использо0 ваться для исследования цикла развития бледных трепонем, стадийности образования их форм, условий, при которых они воз- никают, и изучения действия антибиотикотерапии в системе In vivo,

5 Пример 3. В отмытые в физиологическом растворе камеры размером 1 см х 1 см х 0,3 см из полиакриламидною геля через шприц или пастеровской пипеткой вводят в имеющиеся одну или более полостей путем

0 прокола исследуемый материал, содержащий бледные трепонемы. Затем камеры им- плантируютвнутрибрюшинно

лабораторным животным (кроликам, белым мышам), а через определенное время извлекают из организма и подвергают микроско5 пированию. При необходимости из полостей камеры пастеровской пипеткой можно извлекать пробы для микроскопии под покровным стеклом или других целей, а камеру повторно имплантировать в орга0 низм лабораторного животного.

Формул а изо бретени я Способ выявления Treponema pallldum в исследуемом клиническом материале, о т личающийся тем, что, с целью повыше5 ния точности способа, исследуемый материал инокулируют в жидкую питательную среду, содержащую в равных объемных соотношениях плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сыво

ротки молока, полученного путем фермента-acetl РД-10, Luctobacterlum bulgarlcum в сотивного гидролиза молочной сыворотки. отношении 1:1:2:2:1, и инкубацию посевов

смесью микроорганизмов Streptococcusпроводят в анаэробных условиях в микрокамеtactts 121/4, Streptococcus cremoris 244 ре, выполненной из полиакриламидного геля. хб/1, Lactobactedum easel 18, Acetobacter

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса. Цель изобретения - повышение точности способа: Для вы- явления возбудителя сифилиса исследуемый материал помещают в камеру, выполненную из полиакриламиднсго геля и обеспечивающую анаэробные условия, в которую затем вводят питательную среду, содержащую в равных объемных соотношениях плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Streptococcus lactis 121/4, Streptococcus cremorls 244 хб/1, Lactobacterlum casei 18, Acetobacter aceti РД-10, Lactobacterium bulgaricum в пропорциях 1:1:2:2:1. Камеры инкубируют в течение 48 часов при 37°С с постоянным микроскопическим контролем посевом. Способ позволяет выявлять возбудитель в тех случаях, когда серологический и микроскопический методы исследования не эффективны.